李新蕊，李默雷，楊振才，李玉娟

(河北師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，石家莊 050024)

泥鰍仔魚(yú)出膜后不久極容易出現(xiàn)大量死亡，開(kāi)口餌料不足以及不適口是導(dǎo)致苗種培育失敗的重要原因之一[1]。目前關(guān)于泥鰍開(kāi)口餌料的研究?jī)?nèi)容主要集中在對(duì)泥鰍適宜開(kāi)口餌料的選擇上[2-8]，結(jié)果均表明輪蟲(chóng)最適宜作為泥鰍的開(kāi)口餌料，但對(duì)泥鰍餌料的適宜需求量未見(jiàn)報(bào)道。適宜的餌料密度能有效提高仔魚(yú)的成活率和生長(zhǎng)速度，縮短苗種培育期，增加收入，對(duì)此，本試驗(yàn)以輪蟲(chóng)為泥鰍開(kāi)口餌料，探究不同餌料密度與泥鰍仔魚(yú)攝食、存活、生長(zhǎng)的關(guān)系及其適宜的餌料密度，以期為其苗種培育提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)條件

在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。試驗(yàn)用水為經(jīng)24 h充分曝氣的地下井水。試驗(yàn)期間，采用微孔曝氣管增氧，溶解氧維持在8 mg/L以上，pH 7.36～7.89，水溫為(21.0±0.3)℃。試驗(yàn)容器為長(zhǎng)寬深58 cm×32 cm×44 cm的塑料箱，水深30 cm，實(shí)際盛水50 L。

1.2 試驗(yàn)仔魚(yú)和開(kāi)口餌料

試驗(yàn)用魚(yú)為出膜約3 d、大小均勻、體質(zhì)健壯的臺(tái)灣泥鰍仔魚(yú)，口裂剛剛開(kāi)啟，卵黃囊接近消失，處于混合營(yíng)養(yǎng)階段，平均全長(zhǎng)(5.117±0.042)mm。

試驗(yàn)所用餌料取自室外池塘，每天上午7:00用25號(hào)浮游生物網(wǎng)(0.064 mm)從池中撈取，用13號(hào)浮游生物網(wǎng)(0.112 mm)濾除較大的浮游動(dòng)物和雜物后,將濾液攪勻取樣測(cè)其輪蟲(chóng)密度。

輪蟲(chóng)密度的測(cè)定：取混勻水樣15 mL加入0.25 mL魯哥氏碘液固定后，將沉淀樣品充分搖勻，吸出1 mL，用1 mL計(jì)數(shù)框，在10×40倍顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)；每個(gè)樣品計(jì)數(shù)兩片，取其平均值；同一樣品的兩次計(jì)數(shù)結(jié)果與其均數(shù)之差超過(guò)平均值±15%，需再計(jì)數(shù)一片。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)和方法

共設(shè)計(jì)5個(gè)輪蟲(chóng)密度試驗(yàn)組，分別為100個(gè)/L(A組)、500個(gè)/L(B組)、1 000個(gè)/L(C組)、3 000個(gè)/L(D組)、5 000個(gè)/L(E組)。每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)放養(yǎng)泥鰍仔魚(yú)1 000尾。

試驗(yàn)周期為7 d(4～10日齡階段)。試驗(yàn)期間，每天上午7:00用虹吸法換水一次，溫差不大于1 ℃； 8:30測(cè)定各箱內(nèi)現(xiàn)存輪蟲(chóng)密度，并補(bǔ)充至試驗(yàn)設(shè)計(jì)密度。

4～9日齡階段，每日9：30每箱隨機(jī)撈取仔魚(yú)30尾(撈取前攪動(dòng)水面讓魚(yú)分布盡量均勻，分別從四角、中間五點(diǎn)各取魚(yú)6尾)，觀察并記錄腸道內(nèi)有食物的尾數(shù)，計(jì)算攝食發(fā)生率和攝食率。同時(shí)用攝像解剖鏡(江南永新光學(xué)有限公司jsz5d，精度為±0.001 mm)測(cè)量各組仔魚(yú)全長(zhǎng)及體高，全長(zhǎng)為仔魚(yú)吻端至尾鰭末端的距離，體高為胸鰭基部垂直于全長(zhǎng)的高度，測(cè)量觀察過(guò)程中小心操作，測(cè)定完成立即放回原箱內(nèi)。并于試驗(yàn)結(jié)束時(shí)(10日齡)測(cè)定仔魚(yú)終末全長(zhǎng)、體高及存活情況。

1.4 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析

根據(jù)下式計(jì)算攝食發(fā)生率、攝食率、存活率、相對(duì)生長(zhǎng)率、特定生長(zhǎng)率：

攝食發(fā)生率(FI)=取樣中首次攝食的個(gè)體數(shù)/取樣總個(gè)體數(shù)×100%

攝食率(FR)=腸道有食物的個(gè)體數(shù)/測(cè)定總個(gè)體數(shù)×100%

存活率=終末存活魚(yú)尾數(shù)/初始魚(yú)尾數(shù)×100%

相對(duì)生長(zhǎng)率(RGR)=(終末全長(zhǎng)-初始全長(zhǎng))/初始全長(zhǎng)/天數(shù)×100%

特定生長(zhǎng)率(SGR)= [(ln終末全長(zhǎng))-(ln初始全長(zhǎng))]/天數(shù)×100%

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Statistic10.0軟件進(jìn)行分析，各組間的差異采用單因素方差分析和Duncan′s多重比較。仔魚(yú)的SGR隨餌料密度的變化采用回歸分析。P<0.05為差異或回歸顯著水平。試驗(yàn)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”(Mean±S.D.)表示。

2 結(jié)果

2.1 餌料密度對(duì)臺(tái)灣泥鰍仔魚(yú)攝食率的影響

方差分析表明，4日齡仔魚(yú)的FI在不同餌料密度組間差異顯著(F(4,10)=28.610，P<0.000 1)，D、E組仔魚(yú)的FI顯著高于A、B、C組的(P<0.05)，而D、E組之間的差異不顯著(圖1)。

圖1 4日齡各處理組臺(tái)灣泥鰍仔魚(yú)的攝食發(fā)生率Fig.1 The effect of different feeding level on the feeding incidence of the 4 days post hatch P.dabryanus不同字母代表各餌料密度組之間差異顯著(P<0.05)

5～9日齡，不同餌料密度組仔魚(yú)攝食率隨時(shí)間的變化情況見(jiàn)圖2， D、E組的攝食率均維持在近100%的水平，C組的在60%～80%之間波動(dòng)，而A組和B組的始終在50%以下。

圖2 不同餌料密度培育的泥鰍仔魚(yú)的攝食率變化Fig.2 The variation of survive rate of P.dabryanuslarvae fed with different prey densities

2.2 餌料密度對(duì)臺(tái)灣泥鰍仔魚(yú)存活率的影響

各試驗(yàn)組仔魚(yú)的存活率見(jiàn)圖3，餌料密度對(duì)泥鰍仔魚(yú)的存活率有顯著影響(F(4,10)=67.81，P<0.000 1)，A組、B組泥鰍仔魚(yú)分別在8日齡、9日齡時(shí)全部死亡，其它試驗(yàn)組仔魚(yú)的存活率隨著餌料密度的增加而顯著升高(P<0.05)，D、E組的存活率均達(dá)到60%以上，說(shuō)明當(dāng)餌料密度為100個(gè)/L、500個(gè)/L時(shí)不能維持泥鰍仔魚(yú)生存。

2.3 餌料密度對(duì)臺(tái)灣泥鰍仔魚(yú)生長(zhǎng)的影響

方差分析表明，餌料密度對(duì)仔魚(yú)的終末全長(zhǎng)、RGR、SGR有顯著的影響(F(4,50)=52.85，P<0.000 1；F(4,50)=32.91，P<0.000 1；F(4,50)=28.94，P<0.000 1)(表1)，E組仔魚(yú)生長(zhǎng)最快，RGR達(dá)7.34%/d，SGR為5.89%/d。

圖3 不同餌料密度培育的臺(tái)灣泥鰍仔魚(yú)(9日齡)的存活率Fig.3 The survive rate of P.dabryanus larvae(9 days post hacth)with different prey densities不同字母代表各餌料密度組之間差異顯著(P<0.05)

組別初始全長(zhǎng)/mm終末全長(zhǎng)/mm相對(duì)生長(zhǎng)率/(%/d)特定生長(zhǎng)率/(%/d)A組5.117±0.0425.286±0.133a0.827±0.651a0.734±0.629aB組5.117±0.0425.771±0.064b2.555±0.249b2.392±0.221bC組5.117±0.0426.009±0.076b2.491±0.211b2.285±0.180bD組5.117±0.0427.258±0.223c5.977±0.622c4.923±0.454cE組5.117±0.0427.746±0.159d7.338±0.444d5.892±0.291c

注：*同列中標(biāo)有不同字母者表示組間差異顯著(P<0.05)。

將各處理組的SGR和餌料密度做二次多項(xiàng)式回歸表明， SGR與餌料密度的回歸關(guān)系顯著(F(2,52)=54.141，P<0.000 1)，回歸方程為：SGR=-1.76×10-7PD2+1.88×10-3PD+0.87(見(jiàn)圖4)。由圖4可見(jiàn)，SGR隨著餌料密度的增加而增加，曲線(xiàn)最高點(diǎn)對(duì)應(yīng)的餌料密度為5 350個(gè)/L，表明滿(mǎn)足4～10日齡臺(tái)灣泥鰍仔魚(yú)最快生長(zhǎng)速度的餌料密度可能為5 350個(gè)/L。

圖4 不同餌料密度培育的臺(tái)灣泥鰍仔魚(yú)的特定生長(zhǎng)率Fig.4 The specific growth rate of P.dabryanus larvae with different feeding level

不同餌料密度組泥鰍仔魚(yú)的全長(zhǎng)變化如圖5。A組在6日齡時(shí)達(dá)到最大，8日齡時(shí)全部死亡。B組在7日齡達(dá)到最大，9日齡時(shí)全部死亡。C組在9日齡時(shí)最大，6～10日齡之間變化不大。D、E組在5日齡時(shí)無(wú)差異，之后E組的增速快于D組，且差異越來(lái)越大。

圖5 不同餌料密度培育的臺(tái)灣泥鰍仔魚(yú)全長(zhǎng)變化Fig.5 The variation of total length of P.dabryanuslarvae fed with different prey densities

體高的結(jié)果見(jiàn)圖6。試驗(yàn)期間，A、B、C組仔魚(yú)的體高呈下降趨勢(shì)，D、E組仔魚(yú)在5日齡時(shí)體高比較接近，之后D組仔魚(yú)體高緩慢增大，E組仔魚(yú)體高不停增大，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)仔魚(yú)平均體高0.617 mm。

圖6 不同餌料密度培育的臺(tái)灣泥鰍仔魚(yú)體高變化Fig.6 The variation of body depth of P.dabryanuslarvae fed with different prey densities

3 討論

3.1 不同餌料密度對(duì)臺(tái)灣泥鰍仔魚(yú)攝食率的影響

王有基[9]對(duì)泥鰍早期攝食節(jié)律的研究中發(fā)現(xiàn)，8日齡前的FI存在顯著性差異(P<0.05)，4日齡時(shí)泥鰍仔魚(yú)FI為55%左右。本試驗(yàn)中，后三組FI為57.11%～71.56%，且差異不顯著，說(shuō)明4日齡時(shí)當(dāng)餌料密度達(dá)到3 000個(gè)/L及以上時(shí)，即可滿(mǎn)足此時(shí)泥鰍仔魚(yú)攝食需求；之后3 000、5 000個(gè)/L組仔魚(yú)FR均接近100%，說(shuō)明泥鰍在5日齡后幾乎全部開(kāi)口。

同時(shí)，當(dāng)輪蟲(chóng)密度維持在3 000個(gè)/L時(shí)，4～9日齡間的泥鰍仔魚(yú)就可以吃到食物。其余組泥鰍仔魚(yú)的FR最終均呈下降趨勢(shì)，說(shuō)明隨著泥鰍仔魚(yú)的生長(zhǎng)，仔魚(yú)的攝食量增大，餌料不足時(shí)吃到食物的仔魚(yú)數(shù)量也隨之變少。因此，在泥鰍苗種培育期間，從保證泥鰍具有攝食能力的角度出發(fā)，要求水體中輪蟲(chóng)的密度在3 000個(gè)/L以上。

3.2 不同餌料密度對(duì)臺(tái)灣泥鰍仔魚(yú)存活率的影響

本試驗(yàn)中，仔魚(yú)的最高存活率為65.4%，蘇應(yīng)兵等[6]的研究中輪蟲(chóng)組泥鰍的存活率為55.23%，朱明等[4]的研究中輪蟲(chóng)組泥鰍的存活率約為62%，與本試驗(yàn)結(jié)果相近。

Bagenal等[11]認(rèn)為,仔魚(yú)后期的存活率主要是餌料供應(yīng)不及時(shí)及仔魚(yú)對(duì)餌料的適應(yīng)問(wèn)題，研究表明，泥鰍在3日齡開(kāi)口后如果不及時(shí)投喂餌料,其生長(zhǎng)性能和存活率越來(lái)越差[9]。這可能是本試驗(yàn)中餌料密度為100、500個(gè)/L組仔魚(yú)分別在8、9日齡時(shí)全部死亡的原因。

本試驗(yàn)中不同餌料密度之間的存活率差異顯著，說(shuō)明餌料密度與仔魚(yú)存活率之間存在相關(guān)性，雖然卵黃囊為早期仔魚(yú)提供了足夠的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，但此時(shí)仔魚(yú)的活動(dòng)能力有限，捕食能力較弱。本試驗(yàn)證明，餌料密度低是泥鰍苗種培育時(shí)存活率低的一個(gè)原因，500個(gè)/L及以下的輪蟲(chóng)密度不能滿(mǎn)足泥鰍仔魚(yú)的生存。

3.3 不同餌料密度對(duì)臺(tái)灣泥鰍仔魚(yú)生長(zhǎng)的影響

關(guān)于餌料密度對(duì)魚(yú)類(lèi)早期發(fā)育階段攝食生長(zhǎng)的影響已有很多報(bào)道，有少部分研究表明餌料密度對(duì)仔魚(yú)生長(zhǎng)率沒(méi)有顯著影響[12]，一般認(rèn)為隨著餌料密度的增加，仔魚(yú)的生長(zhǎng)率先升高后下降，存在一個(gè)最佳餌料密度[13]。對(duì)于這一關(guān)系，Parra等[14]的解釋是低密度下仔魚(yú)的進(jìn)食效率較高，劉文逵等[13]研究的解釋為餌料密度過(guò)高，耗氧高，代謝廢物也多，從而對(duì)仔魚(yú)的生存環(huán)境造成了不良影響。本試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著餌料密度的增加，臺(tái)灣泥鰍仔魚(yú)的終末全長(zhǎng)、RGR及SGR均呈現(xiàn)顯著增加趨勢(shì)，通過(guò)對(duì)SGR和餌料密度回歸分析得到二次回歸關(guān)系，計(jì)算得到4～10日齡臺(tái)灣泥鰍仔魚(yú)最佳的餌料密度可能為5 350個(gè)/L。

從本試驗(yàn)不同組間仔魚(yú)4～10日齡的全長(zhǎng)和體高的變化可以看出，當(dāng)餌料密度在3 000個(gè)/L以下時(shí)，仔魚(yú)從外界獲得的營(yíng)養(yǎng)不能滿(mǎn)足其需要，一直處于需要消耗自身營(yíng)養(yǎng)維持生命活動(dòng)的狀態(tài)。當(dāng)餌料密度維持在3 000個(gè)/L時(shí)，雖然魚(yú)體持續(xù)緩慢生長(zhǎng)，但身體卻處于日漸消瘦狀態(tài)。

對(duì)比臺(tái)灣泥鰍仔魚(yú)攝食、全長(zhǎng)和體高數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)對(duì)于4～10日齡的泥鰍仔魚(yú)，當(dāng)攝食量不足時(shí)，仔魚(yú)的體高會(huì)明顯的減小，而全長(zhǎng)維持不變或緩慢變長(zhǎng)，說(shuō)明在泥鰍仔魚(yú)階段，體高指標(biāo)可以靈敏地對(duì)餌料供應(yīng)充足或缺乏做出反應(yīng)。因此，在實(shí)際生產(chǎn)中可以依據(jù)仔魚(yú)的體高情況來(lái)判斷仔魚(yú)的飽食程度。

在自然環(huán)境中生物餌料數(shù)量不穩(wěn)定，很容易受溫度、水質(zhì)等因素影響，目前泥鰍仔魚(yú)苗種培育通常采用腐熟糞肥肥水[15]，水體中輪蟲(chóng)的豐度一般為3 000個(gè)/L左右，可維持3～5 d。結(jié)合本試驗(yàn)的研究結(jié)果，從提高生長(zhǎng)率、成活率、收益的角度考慮，在實(shí)際泥鰍仔魚(yú)的培育過(guò)程中，如果水體中輪蟲(chóng)密度不足5 350個(gè)/L，建議從開(kāi)始攝食起即適量添加餌料，以保證仔魚(yú)正常的生長(zhǎng)發(fā)育。