馬荷花 査菁 張旭 石宏彩 王金玉 陳燕

唇腭裂是新生兒中較為常見的一種先天發(fā)育畸形，在不同種族和地域其發(fā)病率有很大的差異，其中以亞洲黃種人最高、歐洲白種人次之、非洲黑種人最低[1]。根據(jù)其是否伴發(fā)有其它各系統(tǒng)的先天畸形，可分為綜合征性和非綜合征性唇腭裂，后者又包括唇裂(CLO)、唇裂合并腭裂(CLP)以及單純性腭裂，CLO和CLP統(tǒng)稱唇裂伴或不伴腭裂(non-syndromic cleft lip and or palate, NSCL/P)[2]。NSCL/P約占整個(gè)唇腭裂發(fā)病率的70%[3]。

研究表明NSCL/P具有家族遺傳傾向性，其易感性與多組基因相關(guān)[4]。這些基因中，5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因C677T受到學(xué)者們的關(guān)注，研究表明MTHFR基因C677T位點(diǎn)基因多態(tài)性在NSCL/P的遺傳中起重要作用[5]，但當(dāng)前研究存在諸多問題，如單個(gè)研究樣本量過少、研究結(jié)果不一致，因此，本文采用Meta分析評(píng)價(jià)亞洲人群中MTHFR基因C677T位點(diǎn)基因多態(tài)性與NSCL/P易感性的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 文獻(xiàn)來源

檢索自各數(shù)據(jù)庫建庫日期至2016-07中國學(xué)術(shù)期刊全文數(shù)據(jù)庫(CNKI)、萬方中文科技期刊全文數(shù)據(jù)庫(WanFang)、中國生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(CBM)及維普中文科技期刊全文數(shù)據(jù)庫(VIP)等,檢索詞如下：“非綜合征型唇腭裂”、“5， 10-亞甲基四氫葉酸還原酶”、“基因多態(tài)性”，外文數(shù)據(jù)庫Pubmed、Embase、Web Of Science等，檢索詞如下：“Cleft Lip”、“Cleft Palate”、“MTHFR”，并結(jié)合文獻(xiàn)追查納入文獻(xiàn)的參考文獻(xiàn)。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)

①亞洲人群非綜合征性唇腭裂患者為研究對(duì)象； ②設(shè)計(jì)類型為病例對(duì)照研究；③提供病例組和對(duì)照組的各基因型頻數(shù)；④對(duì)照組基因型分布符合哈溫平衡。

1.3 數(shù)據(jù)提取

提取納入文獻(xiàn)以下信息:第一作者姓名、發(fā)表年份、研究國家地區(qū)、對(duì)照的來源、基因檢測的方法、病例和對(duì)照的樣本量、樣本量總數(shù)、各個(gè)基因型頻數(shù)。

1.4 Meta分析

用Stata 12.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所納入文獻(xiàn)進(jìn)行Meta分析。納入研究間統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性(P>0.10)者，用固定效應(yīng)模型(fixed-effects model，F(xiàn)EM)， 反之則用隨機(jī)效應(yīng)模型(random-effects model，REM),并分別計(jì)算合并比值比(OR)、95%可信區(qū)間(95% CI) 及P值?；蚨鄳B(tài)性分析包括：等位基因模型(Tvs.C)、雜合子模型(CTvs.CC、TTvs.CT)、純合子模型(TTvs.CC)、顯性模型(CT+TTvs.CC)和隱形模型(TTvs.CC+CT)各模型的比較。并采用Begg’s檢測發(fā)表偏倚。

2 結(jié) 果

2.1 納入文獻(xiàn)情況

初次電子檢索納入文獻(xiàn)110 篇，通過閱讀題目及摘要排除明顯不符合納入標(biāo)準(zhǔn)者及重復(fù)利用數(shù)據(jù)者72 篇，符合納入標(biāo)準(zhǔn)者37篇，閱讀全文后排除無法提取相關(guān)數(shù)據(jù)者及對(duì)照組基因型頻數(shù)不符合哈溫平衡者，最終納入研究文獻(xiàn)15 篇(圖 1)。其中1 篇研究泰國人群[6]、1 篇研究印度人群[7]、1 篇研究土耳其人群[8]，1 篇研究伊朗人群[9]，其余為中國人群[10-20](表 1)。各研究中病例組與對(duì)照組等位基因頻數(shù)與各基因型頻數(shù)分布統(tǒng)計(jì)見表 2。

圖 1 文獻(xiàn)篩選流程圖

表 1 納入文獻(xiàn)的基本特征表

表 2 納入文獻(xiàn)中MTHFR基因C677T基因多態(tài)性分布

2.2 Meta分析結(jié)果

等位基因模型Tvs.C組OR值為1.333、95%CI為(1.062-1.672)；雜合子模型CTvs.CC組OR值為1.484、95%CI為(1.048-2.101)；TTvs.CT組OR值為1.169、95%CI為(0.959-1.425)；純合子模型TTvs.CC組OR值為1.778、95%CI為(1.091-2.898)；隱性模型TTvs.CC+CT組OR值為1.421、95%CI為(1.027-1.967)；顯性模型CT+TTvs.CC組OR值為1.580、95%CI為(1.098-2.274)。只有雜合子模型TTvs. CT組無統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性選用固定效應(yīng)模型外，其余模型均選用隨機(jī)效應(yīng)模型(表 3)。

表 3 等位基因及各基因型與NSCL/P易感性分析結(jié)果

2.3 敏感性分析

通過逐項(xiàng)剔除單個(gè)研究項(xiàng)目觀察該研究對(duì)合并效應(yīng)量的影響，進(jìn)行敏感性分析，計(jì)算合并OR值及95%CI。發(fā)現(xiàn)合并效應(yīng)量異質(zhì)性較小，它們的區(qū)間對(duì)總的實(shí)驗(yàn)結(jié)果并未產(chǎn)生逆轉(zhuǎn)，OR值穩(wěn)定，說明Meta分析結(jié)果穩(wěn)定性好。

2.4 發(fā)表偏倚檢測

Begg’s Test示等位基因模型Tvs.C組Z=1.09，雜合子模型CTvs.CC組Z=0.59，TTvs. CT組Z=1.00，純合子模型TTvs.CC組Z=0.49，隱形模型TTvs.CC+CT組Z=0.20，顯性模型CT+TTvs.CC組Z=0.89，且漏斗圖基本對(duì)稱，所納文獻(xiàn)間發(fā)表偏倚小。

3 討 論

MTHFR能還原5，10-亞甲基四氫葉酸為5-甲基四氫葉酸，二者在DNA合成修復(fù)和DNA甲基化中起重要作用，脫氧尿苷酸(dUMP)經(jīng)5，10-亞甲基四氫葉酸可轉(zhuǎn)化為脫氧胸腺苷三磷酸(dTTP),而dTTP則參與DNA的合成與損傷修復(fù)；5-甲基四氫葉酸經(jīng)甲硫氨酸合成酶等的作用提供甲基進(jìn)行DNA和蛋白質(zhì)的甲基化[5,21]。因此，MHTFR基因表達(dá)異常會(huì)影響DNA的合成與修復(fù)，導(dǎo)致染色體損傷，導(dǎo)致機(jī)體發(fā)生畸形。C677T 是 MTHFR基因最常見的不耐熱單核苷酸多態(tài)性突變位點(diǎn)，該基因第677位上密碼子中的胞嘧啶(C)突變?yōu)樾叵汆奏?T)，導(dǎo)致編碼后的丙氨酸突變?yōu)槔i氨酸，使MTHFR熱穩(wěn)定性降低，無法正常發(fā)揮酶活性，最終導(dǎo)致甲硫氨酸-葉酸代謝出現(xiàn)異常[21]。研究表明孕母補(bǔ)充足夠的葉酸可以減低新生兒患唇腭裂的危險(xiǎn)性[22]，但是葉酸補(bǔ)充量充足的孕母也會(huì)發(fā)生NSCL/P， MTHFR基因C677T位點(diǎn)多態(tài)性影響了葉酸代謝酶的活性，進(jìn)而增加了NSCL/P的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，提示NSCL/P的發(fā)生還與葉酸代謝酶的活性相關(guān)。

本文結(jié)果與朱博等[5]對(duì)中國人群的薈萃分析結(jié)果一致。但與王維等[23]關(guān)于中國漢族人群的Meta分析結(jié)果不符，其原因可能是納入研究數(shù)量過少，且本研究納入文獻(xiàn)基于亞洲人群，擴(kuò)大了研究人群范圍。亞組分析結(jié)果顯示中國人群中攜帶突變基因T，新生兒會(huì)增加罹患NSCL/P的風(fēng)險(xiǎn)性，且基因型為突變純合子(TT)時(shí)會(huì)增加罹患機(jī)率；其他人群數(shù)據(jù)分析顯示，攜帶突變基因T會(huì)有罹患NSCL/P的風(fēng)險(xiǎn)。這可能與人群遺傳異質(zhì)性、飲食習(xí)慣、生活環(huán)境等因素有關(guān)，有待進(jìn)一步研究。

本研究所納入文獻(xiàn)間發(fā)表偏倚小，各單個(gè)研究對(duì)合并結(jié)果影響小，結(jié)果較可靠。但是，本研究納入文獻(xiàn)基于亞洲人群，納入文獻(xiàn)以中國人群為主，納入研究在基因多態(tài)性檢測水平、生活環(huán)境、飲食習(xí)慣等方面也存在差異， Meta分析受制于納入研究固有的偏倚和缺陷，病例對(duì)照研究也存在回憶偏倚及選擇偏倚，因此Meta分析結(jié)果會(huì)有一定的局限性，因此研究結(jié)果具有一定局限性。

綜上所述，MTHFR基因C677T位點(diǎn)表達(dá)異常是NSCL/P的危險(xiǎn)因素之一，突變基因T會(huì)增加其發(fā)病幾率，而基因型TT會(huì)明顯增加NSCL/P的罹患風(fēng)險(xiǎn)。