姚秀菊 李廣權(quán)

（三六三醫(yī)院檢驗(yàn)科 四川 成都 610041）

臨床檢驗(yàn)工作中常有不能及時(shí)檢測(cè)或檢測(cè)后要求復(fù)檢的情況，為保證檢測(cè)或復(fù)檢結(jié)果的可靠性，防止樣本結(jié)果在放置過(guò)程中發(fā)生較大變化?？衫靡环N惰性聚合高分子物質(zhì)：分離膠，其穩(wěn)定性好，比重為1.045～1.050，恰好在血清比重和血細(xì)胞比重之間，離心后可有效地將血清與血細(xì)胞分隔開(kāi)[1]，避免血液離體后細(xì)胞內(nèi)外某些成分濃度差異而相互滲透而使結(jié)果受到胞內(nèi)高濃度物質(zhì)及血細(xì)胞代謝影響。本次研究我們通過(guò)比較分離膠采血管血清即時(shí)測(cè)定結(jié)果與室溫及4℃冰箱保存一段時(shí)間后的結(jié)果差異，旨在評(píng)估分離膠真空采血管保存血清的可行性及最佳保存方式。

1.材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

選取參加我院健康體檢的志愿者20例（包括本科實(shí)習(xí)生10例），要求采血前空腹8h以上，脂血溶血樣本除外。

1.2 儀器與試劑

采用Hitachi公司7600-010生化分析儀，原裝配套ISE試劑及校準(zhǔn)液。ALT（谷丙轉(zhuǎn)氨酶），AST（谷草轉(zhuǎn)氨酶），GGT（谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶），AKP（堿性磷酸酶），TBIL（總膽紅素），DBIL（直接膽紅素），BUN（尿素），Cr（肌酐），HDL-C（高密度脂蛋白膽固醇）試劑由日本和光株式會(huì)社提供，TP（總蛋白），ALB（白蛋白），UA（尿酸），GLU（葡萄糖），TG（甘油三酯），TC（總膽固醇）試劑由四川邁克公司提供，校準(zhǔn)品為德國(guó)Roche公司生產(chǎn)的多項(xiàng)目C.F.A.S校準(zhǔn)液（批號(hào)：177955），質(zhì)控品由英國(guó)朗道公司提供（批號(hào)：中值：897UN，高值：697UE）。

1.3 真空分離膠管

成都瑞琦公司提供（批號(hào)：20150612）。

1.4 研究方法

1.4.1 樣本準(zhǔn)備 納入研究的20例志愿者于同一天上午8∶00左右每人用分離膠管采集兩管靜脈血，每支采集4ml，并編上號(hào)。將采集的血樣分成兩組，每組20管，每組包含每例志愿者的樣本各一管）。對(duì)采集的血樣室溫直立靜置30min后以4000r/min離心10min分離出血清（血清與血細(xì)胞之間用分離膠隔開(kāi)）待檢測(cè)。

1.4.2 樣本檢測(cè) 隨機(jī)選擇一組離心后的樣本立即進(jìn)行ALT，AST，GGT，AKP，TP，ALB，TBIL，DBIL，BUN，Cr，UA，GLU，TG，TC，HDL-C，K，Na，Cl指標(biāo)檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果以初始結(jié)果表示，檢測(cè)結(jié)束后立即用原樣本管蓋加蓋保存。一組樣本放置于室溫（25℃）加蓋保存，另一組樣本加蓋置于冰箱4℃保存。室溫放置樣本分別于24h后及7天后再次檢測(cè)上述生化指標(biāo)，4℃冰箱放置樣本放置7天后再次對(duì)上述指標(biāo)檢測(cè)，每次檢測(cè)結(jié)束后均用原樣本管蓋加蓋保存，每次檢測(cè)均按實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)化操作程序（SOP），確保當(dāng)天的質(zhì)控結(jié)果通過(guò)后再進(jìn)行檢測(cè)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，計(jì)量資料采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 分離膠血清初始結(jié)果與室溫放置24小時(shí)檢測(cè)結(jié)果比較 對(duì)分離膠采血管內(nèi)血清即時(shí)檢測(cè)上述生化結(jié)果與室溫放置24小時(shí)后檢測(cè)結(jié)果比較，采用配對(duì)t檢驗(yàn)分析，對(duì)應(yīng)t值分別為1.658，1.575，0.991，-1.686，-1.715，1.258，1.852，1.971，-1.777，-1.759，-1.301，0.786，-1.085，-1.266，0.576，1.035，1.124，1.718，P值均＜0.05，其差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，比較結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 分離膠采血管初始結(jié)果與室溫放置24小時(shí)檢測(cè)結(jié)果比較（）

表1 分離膠采血管初始結(jié)果與室溫放置24小時(shí)檢測(cè)結(jié)果比較（）

*初始結(jié)果與室溫放置24小時(shí)后檢測(cè)結(jié)果經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)比較。

ALT 1.658 0.118 AST 1.575 0.125 GGT 0.991 0.362 AKP -1.686 0.114 TP -1.715 0.103 ALB 1.258 0.212 TBIL 1.852 0.072 DBIL 1.971 0.063 Urea -1.777 0.080 Cr -1.759 0.090 UA -1.301 0.201 GLU 0.786 0.454 TG -1.085 0.300 TC -1.266 0.210 HDL-C 0.576 0.511 K 1.035 0.355 Na 1.124 0.267 Cl 1.718 0.102

2.2 分離膠采血管初始結(jié)果與室溫放置7天結(jié)果比較及初始結(jié)果與4℃冰箱放置7天結(jié)果比較 分離膠采血管血清初始生化結(jié)果與室溫放置7天后結(jié)果比較，采用配對(duì)t檢驗(yàn)分析，GGT，GLU，Na，Cl對(duì)應(yīng)P值分別為0.062，0.054，0.076，0.065外，表明這4個(gè)項(xiàng)目室溫放置7天后結(jié)果與初始結(jié)果的差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其余項(xiàng)目對(duì)應(yīng)P值均＜0.05，即其余項(xiàng)目在室溫放置7天后結(jié)果與初始結(jié)果的差異有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而4℃冰箱保存7天樣本生化結(jié)果與初始結(jié)果比較，采用配對(duì)t檢驗(yàn)分析，所有項(xiàng)目對(duì)應(yīng)P值均＞0.05，表明4℃冰箱保存7天生化結(jié)果與初始結(jié)果的差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，比較結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 分離膠采血管初始結(jié)果與室溫放置7天結(jié)果比較以及初始結(jié)果與冰箱放置7天結(jié)果比較（）

表2 分離膠采血管初始結(jié)果與室溫放置7天結(jié)果比較以及初始結(jié)果與冰箱放置7天結(jié)果比較（）

*初始結(jié)果與室溫放置7天后檢測(cè)結(jié)果配對(duì)t檢驗(yàn)比較；**初始結(jié)果與4℃冰箱放置7天后檢測(cè)結(jié)果配對(duì)t檢驗(yàn)比較。

初始結(jié)果與室溫放置7天 初始結(jié)果與4℃放置7天生化指標(biāo) 結(jié)果比較 結(jié)果比較t值 P值* t值 P值**ALT 2.618 ＜0.05 1.658 0.118 AST 2.259 ＜0.05 1.575 0.125 GGT 1.891 0.062 0.991 0.362 AKP -3.296 ＜0.05 -1.686 0.114 TP -3.435 ＜0.05 -1.715 0.103 ALB 6.778 ＜0.05 1.258 0.212 TBIL 3.552 ＜0.05 1.852 0.072 DBIL 3.451 ＜0.05 1.971 0.063 Urea -7.347 ＜0.05 -1.777 0.080 Cr -9.199 ＜0.05 -1.759 0.090 UA -3.851 ＜0.05 -1.301 0.201 GLU 1.986 0.054 0.786 0.454 TG -18.385 ＜0.05 -1.085 0.300 TC -7.066 ＜0.05 -1.266 0.210 HDL-C 2.892 ＜0.05 0.576 0.511 K-8.134 ＜0.05 1.035 0.355 Na 1.849 0.076 1.124 0.267 Cl 1.965 0.065 1.718 0.102

3.討論

分離膠采血管不僅避免了離體后細(xì)胞內(nèi)外某些成分因濃度差的相互滲透而造成的分析前誤差，同時(shí)避免了因放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致細(xì)胞溶血對(duì)血清生化指標(biāo)的影響，在一定時(shí)間內(nèi)保證了血清成分的穩(wěn)定性。比如血液中穩(wěn)定性較差的葡萄糖，實(shí)際工作中為了便于與其它生化指標(biāo)同時(shí)檢測(cè)，臨床上普遍采用普通生化管收集，很多研究[2，3]表明，葡萄糖在普通生化管很容易酵解，特別在樣本量較大的臨床實(shí)驗(yàn)室，后檢測(cè)的血液葡萄糖結(jié)果往往降低非常明顯，嚴(yán)重影響了近些年日益增多的糖尿病的檢出率。雖然在防止糖酵解劑的容器中有一定的抑制作用[4]，但隨著放置時(shí)間的延長(zhǎng)，葡萄糖降低還是很明顯。本次研究結(jié)果表明，葡萄糖在分離膠采血管中的穩(wěn)定性不管是室溫放置7天還是4℃冰箱放置7天葡萄糖結(jié)果與初始結(jié)果比較變化均不明顯。

本研究我們發(fā)現(xiàn)，采用分離膠采血管收集的血清，室溫放置24小時(shí)后其生化指標(biāo)仍很穩(wěn)定，明顯高于普通生化管中血清生化指標(biāo)穩(wěn)定性[5]。同時(shí)我們還發(fā)現(xiàn)，分離膠管中血清在4℃冰箱保存7天后生化指標(biāo)的穩(wěn)定性明顯高于室溫放置7天的結(jié)果，與Marquet P[6]等研究報(bào)道一致。提示檢驗(yàn)工作者在遇到不能及時(shí)檢測(cè)或需要復(fù)檢前幾天的樣本，若采用分離膠管收集并4℃冰箱保存的血清，其檢測(cè)結(jié)果的可靠性明顯高于室溫保存的血清。這是由于分離膠的穩(wěn)定性除了與分離膠質(zhì)量有關(guān)外[7]，還受溫度影響較大，由于不同廠家對(duì)分離膠管要求的儲(chǔ)存溫度不同，其中也包括離心時(shí)的溫度[8]，因?yàn)槠胀x心機(jī)離心時(shí)可使樣本的溫度升高，達(dá)到規(guī)定的溫度會(huì)使分離膠溶解在血清中，漂浮的分離膠或油滴不僅對(duì)生化反應(yīng)杯和樣本針造成堵塞和污染，而且將對(duì)一些生化測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生影響。比如我們本次研究發(fā)現(xiàn)，室溫放置7天后的樣本組甘油三酯結(jié)果增高明顯。也有研究[9]發(fā)現(xiàn)離心后分離膠的漂浮物可引起IgG檢測(cè)結(jié)果增高，所以有條件的單位最好采用低溫離心機(jī)對(duì)分離膠采血管離心處理。同時(shí)有研究[10,11]發(fā)現(xiàn)不同材質(zhì)分離膠管保存的血清，其穩(wěn)定性是不同的，塑料材質(zhì)分離膠管比玻璃材質(zhì)的分離膠管可提供更佳品質(zhì)的檢測(cè)樣本。所以實(shí)驗(yàn)室在選用采血管前，應(yīng)參照美國(guó)CLSI在2010年12月出版的GP34-A文件對(duì)擬選用采血管進(jìn)行性能驗(yàn)證和評(píng)價(jià)[12］。

本研究表明：普通生化管穩(wěn)定性差的生化項(xiàng)目，可以考慮使用分離膠采血管采集，并及時(shí)分離血清及時(shí)檢測(cè)，對(duì)檢測(cè)后樣本或不能及時(shí)檢測(cè)的樣本，分離血清后最好置4℃冰箱保存，不宜長(zhǎng)時(shí)間室溫放置，以保證復(fù)檢或檢測(cè)結(jié)果的可靠性。