李維娟,李彥奇,張 坤

(新疆佳音醫(yī)院IVF胚胎實(shí)驗(yàn)室，烏魯木齊 830001)

凍融胚胎移植(FET)是將胚胎置于超低溫的液氮(-196 ℃)中冷凍保存，并在適宜時(shí)間解凍胚胎，進(jìn)行分期、分批、可多次移植的一項(xiàng)技術(shù)，胚胎冷凍-解凍的過(guò)程稱之“凍融”。1983年世界上首例凍融胚胎成功妊娠，1985年世界首例由FET獲得的健康嬰兒誕生。目前FET技術(shù)已廣泛應(yīng)用于臨床，并成為輔助生殖技術(shù)中不可缺少的一部分。有研究表明，該技術(shù)不僅可以減少卵巢過(guò)度刺激綜合征，使患者可以選擇在更適合的時(shí)期進(jìn)行移植,降低多胎妊娠率、促排卵次數(shù)及患者費(fèi)用，還可減輕患者的身心壓力和提高體外受精(IVF)的累積妊娠率[1-2]。對(duì)于延長(zhǎng)凍融胚胎復(fù)蘇后體外培養(yǎng)時(shí)間是否有助于改善妊娠結(jié)局尚有爭(zhēng)議[3]。本研究通過(guò)對(duì)解凍移植周期中卵裂期胚胎當(dāng)天解凍移植和提前解凍過(guò)夜培養(yǎng)后移植的臨床妊娠結(jié)局進(jìn)行回顧性分析，探討解凍移植周期中卵裂期胚胎當(dāng)天解凍移植和提前解凍過(guò)夜培養(yǎng)后移植對(duì)IVF結(jié)局的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性分析2017年1-4月在本院生殖中心接受凍融卵裂期胚胎移植治療的277例患者，即277個(gè)凍融卵裂期胚胎移植周期，均為玻璃化冷凍。本研究中卵裂期胚胎FET周期移植胚胎數(shù)≥1個(gè)，接受移植患者年齡22～49歲，平均(32.63±5.56)歲。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)子宮正常，既往無(wú)子宮手術(shù)史；(2)均為不超過(guò)3次的IVF移植周期。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)程序化冷凍胚胎移植周期；(2)囊胚移植周期；(3)解凍后繼續(xù)培養(yǎng)成囊胚再移植周期。根據(jù)解凍后胚胎培養(yǎng)時(shí)間的不同分為當(dāng)日解凍組(A組)和提前解凍組(B組)。其中移植當(dāng)日解凍胚胎162個(gè)周期(A組)，接受移植患者平均年齡(32.27±4.02)歲，平均解凍胚胎數(shù)(1.91±0.59)個(gè)；提前解凍115個(gè)周期(B組)，接受移植患者平均年齡(30.11±3.43)歲，平均解凍胚胎數(shù)(1.92±0.50)個(gè)，2組一般情況比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。根據(jù)患者的年齡，可將A組和B組分別分成3組，即A1、B1：年齡<30歲；A2、B2：年齡30～<35歲；A3、B3：年齡≥35歲。

1.2方法

1.2.1胚胎冷凍-復(fù)蘇 依照本院常規(guī)的促排卵方案，在IVF后第3天進(jìn)行胚胎冷凍。本院胚胎冷凍標(biāo)準(zhǔn)：(1)第3天細(xì)胞數(shù)≥7個(gè)細(xì)胞，卵裂球大小均勻，無(wú)空泡，碎片≤10%；(2)第3天細(xì)胞數(shù)≥4個(gè)細(xì)胞，碎片≤10%，且與第2天相比卵裂球數(shù)目有所增加。采用玻璃化凍融法對(duì)胚胎進(jìn)行冷凍和復(fù)蘇。胚胎復(fù)蘇后，觀察胚胎的透明帶和卵胞漿，選擇復(fù)蘇后卵裂球≥50%的胚胎進(jìn)行移植。

1.2.2復(fù)蘇的胚胎分組 A組當(dāng)日解凍，即在移植當(dāng)天進(jìn)行胚胎復(fù)蘇，體外培養(yǎng)1～3 h后進(jìn)行移植。B組提前解凍，在移植的前一天下午進(jìn)行胚胎復(fù)蘇，體外培養(yǎng)18～20 h后進(jìn)行移植。

1.2.3內(nèi)膜準(zhǔn)備 采用人工周期，于月經(jīng)第3天口服戊酸雌二醇2～6 mg/d，B超顯示子宮內(nèi)膜厚度為8～15 mm時(shí)，加用黃體酮40 mg/d肌肉注射和黃體酮軟膠囊(安琪坦)，第3天或第2天下午解凍胚胎。胚胎移植均在B超引導(dǎo)下進(jìn)行，移植后給予常規(guī)黃體支持。

1.2.4臨床妊娠標(biāo)準(zhǔn) 胚胎移植后14 d，尿人絨毛膜促性腺激素(HCG)陽(yáng)性，血HCG≥25 mIU/mL，可定為生化妊娠。胚胎移植三周后行B超可見孕囊，判斷為臨床妊娠。臨床妊娠率=臨床妊娠周期數(shù)/移植周期數(shù)×100%，胚胎著床率=著床胚胎數(shù)/移植胚胎數(shù)×100%。

2 結(jié) 果

2.1當(dāng)日解凍和提前解凍移植結(jié)局比較 A組與B組的臨床妊娠率分別為38.27%、43.48%，著床率分別為24.68%、26.98%，2組之間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2年齡與FET結(jié)局的關(guān)系 A3、B3分別與A1、B1，A2、B2相比，其臨床妊娠率和著床率均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。即隨著女性年齡增高，臨床妊娠率和著床率均隨之下降，見表1。

表1 年齡與FET結(jié)局的關(guān)系

3 討 論

FET在經(jīng)歷30多年的發(fā)展后，已成為輔助生殖技術(shù)的重要手段之一。因此，影響FET臨床妊娠結(jié)局的相關(guān)因素也成了國(guó)內(nèi)外學(xué)者共同探討的問(wèn)題。影響FET臨床妊娠結(jié)局的因素很多，包括患者年齡、胚胎質(zhì)量、移植時(shí)子宮內(nèi)膜是否適宜、凍融胚胎復(fù)蘇后體外培養(yǎng)時(shí)間等[4-5]。李偉等[6]認(rèn)為卵裂球的完整性是影響凍融胚胎種植率的重要因素，移植前提早解凍觀察復(fù)蘇后胚胎有無(wú)進(jìn)一步生長(zhǎng)，有助于評(píng)價(jià)凍融胚胎的發(fā)育潛能。有報(bào)道認(rèn)為，延長(zhǎng)解凍后的培養(yǎng)時(shí)間對(duì)胚胎臨床妊娠結(jié)局沒(méi)有好處，縮短體外培養(yǎng)時(shí)間則可以明顯提高種植率和活產(chǎn)率[7]。另外一些學(xué)者則發(fā)現(xiàn)延長(zhǎng)凍融胚胎體外培養(yǎng)時(shí)間并不影響凍融卵裂期胚胎的發(fā)育潛能，也不能提高FET的妊娠率和著床率[8-10]。本研究也表明提前解凍并未明顯改善妊娠結(jié)局。但是，有研究表明將第3天卵裂期胚胎凍融后培養(yǎng)至囊胚移植，可以明顯提高臨床妊娠率[11]。因此，臨床可通過(guò)適量增加囊胚的移植數(shù)目，從而改善FET的臨床妊娠結(jié)局。

隨著年齡的增長(zhǎng)，在FET周期中卵母細(xì)胞的數(shù)量及質(zhì)量逐漸下降，臨床妊娠率也隨之下降。因此，女性的年齡是影響FET臨床妊娠的因素之一。本研究結(jié)果顯示，年齡≥35歲患者臨床妊娠率和著床率明顯低于年齡<35歲患者，年齡≥35歲患者臨床妊娠率較低可能是因?yàn)槁殉矁?chǔ)備能力、卵子數(shù)量和質(zhì)量，以及子宮內(nèi)膜容受性均降低，并且染色體異常概率增加，從而導(dǎo)致臨床妊娠率下降，這與已有研究結(jié)論相一致[12-13]。

綜上所述，凍融卵裂期胚胎提前解凍培養(yǎng)后再進(jìn)行移植并不能改善妊娠結(jié)局，但年齡是影響凍融胚胎妊娠率和著床率的重要因素，隨著女性年齡的增高，臨床妊娠率和著床率均會(huì)隨之下降。因此，在臨床工作中應(yīng)根據(jù)患者的具體情況選擇恰當(dāng)?shù)臅r(shí)間進(jìn)行移植，從而提高臨床妊娠率。