趙艷坤 劉慧敏 王帥 蔡建星 王成 陳賀

（1. 新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室 新疆農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全實(shí)驗(yàn)室，烏魯木齊830091；2. 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室，北京 100193）

金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus，S.aureus）是一種革蘭氏陽(yáng)性菌，在世界范圍內(nèi)被稱(chēng)為侵襲性病原菌，是引起奶牛乳房炎的重要致病菌之一，感染率達(dá)50%以上［1］。S.aureus性乳房炎主要致病機(jī)理是侵入奶牛乳腺組織后，定殖和黏附于乳腺上皮 細(xì) 胞（Mammary epithelial cells，MECs）［2］， 損害MECs和腺泡功能［3］，還可出現(xiàn)乳腺膿腫、硬化或瘺管，嚴(yán)重者會(huì)出現(xiàn)乳腺的壞死和脫落，一旦感染很難治愈［4］，不僅影響產(chǎn)奶量和乳品質(zhì)，造成巨大經(jīng)濟(jì)損失，甚至危及人類(lèi)健康。近年來(lái)，隨著抗菌藥物在臨床和畜牧業(yè)的濫用，S.aureus耐藥性問(wèn)題日趨嚴(yán)重，出現(xiàn)了多重耐藥（Multidrug-resistant，MDR）菌株及超級(jí)細(xì)菌-耐甲氧西林金黃色葡萄球 菌（Methicillin-resistantStaphylococcus aureus，MRSA），其MDR和泛耐藥（Pan-drug resisitance，PDR）引起了國(guó)內(nèi)外專(zhuān)家學(xué)者廣泛關(guān)注［5］。據(jù)報(bào)道，全球MRSA的檢出率為18.4%-82.9%，我國(guó)MRSA平均檢出率為47.9%［6］，MRSA 90%以上是MDR菌株［7］。目前，細(xì)菌耐藥性問(wèn)題已成為全世界共同關(guān)注的焦點(diǎn)，中國(guó)政府也十分重視抗菌藥物臨床合理使用和細(xì)菌耐藥問(wèn)題。2018年，為貫徹十九大精神，全國(guó)堅(jiān)持實(shí)施優(yōu)質(zhì)乳工程，而在十三屆全國(guó)人大一次會(huì)議中，農(nóng)業(yè)部表示將狠抓細(xì)菌耐藥性問(wèn)題。現(xiàn)階段，在抗菌藥物選擇的壓力下，新的S.aureus耐藥機(jī)制不斷出現(xiàn)，且伴隨著耐藥基因在菌體間的轉(zhuǎn)移，使得S.aureus性奶牛乳房炎難以使用1種抗菌藥物或不同化學(xué)成分的抗菌藥物聯(lián)合治療。目前，乳制品和獸醫(yī)業(yè)對(duì)奶牛臨床治療的現(xiàn)狀要求限制S.aureus耐藥性傳播，并迫切需要開(kāi)發(fā)不被現(xiàn)有耐藥機(jī)制覆蓋的新抗菌藥物。因此，本文分析S.aureus耐藥性現(xiàn)狀，并結(jié)合S.aureus耐藥基因以闡明其耐藥機(jī)制，旨為S.aureus性奶牛乳房炎臨床治療用藥及新型藥物研發(fā)提供理論參考，同時(shí)響應(yīng)十九大精神對(duì)整個(gè)奶牛養(yǎng)殖業(yè)的綠色健康發(fā)展具有重大意義。

1 奶牛乳房炎金黃色葡萄球菌耐藥現(xiàn)狀

S.aureus產(chǎn)生耐藥的根本原因是抗菌藥物的大量使用，且抗菌藥物使用時(shí)間越長(zhǎng)，其越容易產(chǎn)生耐藥性，兩者呈正相關(guān)［8］。丹麥于1963年最早發(fā)現(xiàn)了人類(lèi)耐甲氧西林且mec基因陽(yáng)性的金黃色葡萄球菌菌株（Methicillin-resistantStaphylococcus aureus，MRSA）［9］。1975年，比利時(shí)首次從奶牛乳房炎中分離出MRSA［10］。近年來(lái)，隨著S.aureus和MRSA的流行傳播，其泛耐藥性給奶牛養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)嚴(yán)重的威脅，因此在全球備受關(guān)注。

1.1 國(guó)外奶牛乳房炎源S.aureus耐藥現(xiàn)狀

S.aureus具有廣譜耐藥和多種耐藥特性（表1）。2011-2018年近10年的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)可以看出，國(guó)外對(duì)奶牛乳房炎中S.aureus、MRSA的分離率因地域性差異浮動(dòng)較大，2011-2014年MRSA的分離率不是很高，但近幾年有增加的趨勢(shì)；S.aureus對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)、氨基糖苷類(lèi)、喹諾酮類(lèi)及大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)等常見(jiàn)類(lèi)型抗菌藥物表現(xiàn)不同程度的耐藥，耐藥性變化趨勢(shì)為：β-內(nèi)酰胺類(lèi)、磺胺類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)及氨基糖苷類(lèi)耐藥性明顯上升；大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)略有上升；喹諾酮類(lèi)耐藥性沒(méi)有明顯變化。值得一提的是，2015年南非西北部發(fā)現(xiàn)S.aureus對(duì)萬(wàn)古霉素的耐藥率高達(dá)68.79%；2018年，阿拉伯北部發(fā)現(xiàn)S.aureus對(duì)氯霉素耐藥率達(dá)13.7%，而在此之前對(duì)其均表現(xiàn)敏感，說(shuō)明S.aureus耐藥菌株逐漸增多，但其區(qū)域性差異巨大。同時(shí)，奶牛乳房炎S.aureus的MDR（30.9%-100%）現(xiàn)象嚴(yán)重，近兩年分離的S.aureus均為MDR（100%）。

1.2 國(guó)內(nèi)奶牛乳房炎源S.aureus耐藥現(xiàn)狀

查閱近年來(lái)我國(guó)奶牛主要養(yǎng)殖區(qū)域或乳房炎高發(fā)地區(qū)的S.aureus耐藥性相關(guān)資料并進(jìn)行整理，總結(jié)我國(guó)各地區(qū)耐藥率高低如下：新疆：PG＞AMP＞ERY＞ 克林霉素（Clindamycin，CLI）＞TET＞SXT；內(nèi)蒙古：ATM＞氧氟沙星（Ofloxacin，OFX）＞AMP＞SXT＞ERY；寧夏：PG＞AMP＞ERY＞SXT；天津：PG＞CEF＞ERY＞TET＞ 甲氧西林（Methoxicillin，MET）＞CLI＞林可霉素（Lincomycin，LNY）；河北：磺胺異惡唑（Sulfonazo isoxazole，SIZ）＞AMP＞甲氧胺嘧啶（Methoxamine pyrimidine，TMP）＞SXT＞阿 莫 西 林（Amoxicillin，AMC）＞強(qiáng)力霉素（Doxycycline，DO）＞ERY＞克拉霉素（Clarithromycin，CLR）＞LNY＞阿奇霉素（Azithromycin，AZM）；山東：PEN＞諾氟沙星（Norfloxacin，NOR）＞恩諾沙星（Enrofloxacin，ENR）＞卡那霉素（Kanamycin，K）＞鏈霉素（Streptomycin，SM）＞GM＞ERY；黑龍江：PG＞AMP＞SXT；江蘇：PG＞AMP＞SXT＞SM＞K＞ERY＞TET＞CLI；上海 ：PG＞AMP＞SXT＞ERY ； 安 徽 ：PG＞AMP＞SXT＞ERY＞CLI；浙江：PEN＞AMP＞SXT；河南：PG＞AM0＞AMP＞SXT；陜西：PG＞AM0＞AMP＞SM。假設(shè)同一地區(qū)大于70%的S.aureus分離株對(duì)某種藥物敏感度認(rèn)定為該區(qū)S.aureus菌株對(duì)此藥敏感，我國(guó)新疆［20］、內(nèi)蒙古［21］、黑龍江［22］、寧夏［23］、陜西［24］、四川［25］、天津［26］、河北［5］、安徽［27］、上海［28］等 14 個(gè)地區(qū)分離的牛源S.aureus對(duì)PG、AMP和SXT均表現(xiàn)出極強(qiáng)的耐藥性；大部分省區(qū)分離株對(duì)ERY耐藥；新疆、天津、江蘇地區(qū)的S.aureus分離株對(duì)TET耐藥，其他省區(qū)對(duì)其表現(xiàn)介于耐藥與敏感之間；新疆、天津、安徽、四川和江蘇分離株對(duì)CLI耐藥；河南和陜西分離株對(duì)AMO耐藥性較強(qiáng)；其中河北地區(qū)S.aureus耐藥菌株最多，對(duì)10種抗菌藥物表現(xiàn)不同程度耐藥，說(shuō)明我國(guó)奶牛乳房炎分離的S.aureus菌株耐藥性種類(lèi)較多，多耐性較廣泛。結(jié)合表1，世界范圍內(nèi)奶牛乳房炎S.aureus耐藥及MDR普遍存在。我國(guó)與世界其他地區(qū)研究結(jié)果一樣，不同地區(qū)分離的S.aureus菌株對(duì)各類(lèi)常見(jiàn)抗菌藥物表現(xiàn)不同程度的耐藥性，但地區(qū)與地區(qū)之間S.aureus耐藥菌株差異較大，進(jìn)一步說(shuō)明S.aureus耐藥性可能具有一定區(qū)域性。S.aureus對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗菌藥物耐藥性最嚴(yán)重，這也與國(guó)外研究結(jié)果一致，說(shuō)明β-內(nèi)酰胺類(lèi)仍然是治療奶牛乳房炎使用最廣泛的一類(lèi)抗菌藥物，導(dǎo)致S.aureus菌株在世界范圍內(nèi)對(duì)其高度耐藥，符合世界性觀察到的S.aureus耐藥性普遍趨勢(shì)。

表1 2011-2018 年奶牛乳房炎S.aureus 對(duì)10 種常見(jiàn)抗菌藥物耐藥性［11-19］

事實(shí)上，S.aureus菌株的耐藥性越來(lái)越強(qiáng)，已經(jīng)發(fā)展出廣譜的抗菌藥物抗性機(jī)制，這意味著隨著耐藥性的不斷發(fā)展，新的耐藥機(jī)制將會(huì)不斷地出現(xiàn)，且變得更為復(fù)雜，必定導(dǎo)致S.aureus對(duì)臨床所用抗菌藥物的耐藥程度日漸嚴(yán)重，加劇臨床治療難度。

2 奶牛乳房炎金S. aureus耐藥機(jī)制

S.aureus的耐藥性機(jī)理復(fù)雜，總結(jié)主要有以下幾種：（1）酶失活；（2）主動(dòng)外排系統(tǒng)；（3）保護(hù)、改變、更換抗菌藥物靶位點(diǎn)；（4）基于質(zhì)?；蛉旧w上的耐藥基因介導(dǎo)的S.aureus耐藥機(jī)制?，F(xiàn)階段，由基因編碼介導(dǎo)的S.aureus分子耐藥機(jī)制成為各國(guó)相關(guān)學(xué)者研究熱點(diǎn)。

2.1 S.aureus對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗菌藥物的耐藥機(jī)制

S.aureus對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗菌藥物的耐藥機(jī)制主要有以下兩種：（1）質(zhì)粒介導(dǎo)的獲得性耐藥。S.aureus菌株由耐藥因子生成了β-內(nèi)酰胺酶，此酶附著在細(xì)菌表面，經(jīng)質(zhì)粒介導(dǎo)，通過(guò)胞外β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物的水解，致使產(chǎn)酶株與非產(chǎn)酶株相比抗菌藥物的活性降低或消失，導(dǎo)致S.aureus對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物產(chǎn)生耐藥；（2）藥物結(jié)合位點(diǎn)的改變或形成新的青霉素結(jié)合蛋白（Penicillin binding protein，PBP）介導(dǎo)的固有耐藥。PBPs是構(gòu)成S.aureus細(xì)胞壁形成的重要蛋白酶系統(tǒng)，也是β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗菌藥物與S.aureus菌體的結(jié)合靶位點(diǎn)，與其具有較高親和力。當(dāng)環(huán)境藥物濃度達(dá)到最小抑菌濃度（Minimum inhibitory concentration，MIC）時(shí)，β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物與PBPs結(jié)合，使其乙?；瑢?dǎo)致轉(zhuǎn)肽酶（Transpeptidase，TPase）失活，便會(huì)讓細(xì)菌難以形成細(xì)胞壁，從而導(dǎo)致敏感菌死亡［29］。

PBPs的改變是S.aureus對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物耐藥的重要機(jī)制［30］。PBPs在MRSA對(duì)苯唑西林的耐藥程度中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。β-內(nèi)酰胺酶、PBPs的過(guò)量表達(dá)可導(dǎo)致MRSA的低水平耐藥，PBPs與苯唑西林的親和力也是MRSA低水平耐藥的原因之一；而PBP2a的存在則導(dǎo)致MRSA高水平耐藥，與其他PBPs不同，PBP2a與β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物親和力極低甚至不與其結(jié)合，致使MRSA高水平耐藥。而mecA是PBP2a的編碼基因，MRSA的分子耐藥機(jī)制與mecA基因密切相關(guān)?？偨Y(jié)有以下兩種。

mecA是MRSA的耐藥決定子，MRSA的mecA基因通過(guò)轉(zhuǎn)座子的移動(dòng)得到外來(lái)基因，該基因大量表達(dá)使S.aureus對(duì)甲氧西林耐藥的產(chǎn)物PBP2a合成。另有資料表明，作為MRSA耐藥輔助基因的fem型基因在細(xì)菌細(xì)胞壁生成環(huán)節(jié)至關(guān)重要，其中femA、femB這兩種基因在S.aureus對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物耐藥方面具有重大影響［31］。據(jù)報(bào)道，β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗菌藥物針對(duì)MRSA的抗藥性或可由femA、femB的失活導(dǎo)致，以此同時(shí)也造成了其他多種類(lèi)抗菌藥對(duì)MRSA的敏感性大幅提升［32］。2014年，萬(wàn)艷紅［33］在51株MRSA菌株中發(fā)現(xiàn)mecA、femA基因檢出率均為100%；另有研究對(duì)河南地區(qū)180株MRSA菌株進(jìn)行PCR檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)有168株mecA基因陽(yáng)性（符合率為93.3%），且多為MDR菌株［34］。MSRA產(chǎn)生的高耐藥性，實(shí)質(zhì)上是由fem基因協(xié)同mecA基因產(chǎn)生的表型，但當(dāng)mecA與fem其中一方失活后，這一效果便大打折扣。在fem基因失活的前提下，盡管PBP2a可由mecA單獨(dú)編碼產(chǎn)生，但偶見(jiàn)細(xì)菌仍出現(xiàn)高度耐藥現(xiàn)象［35］。由于mecA和femA基因在MRSA對(duì)苯唑西林等β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗菌藥物耐藥的重要地位，且其主要存在于耐藥菌中，因此，國(guó)際上通常檢測(cè)mecA和femA兩個(gè)基因以判定S.aureus對(duì)甲氧西林抗菌藥物是否耐藥。

S.aureus的耐藥性可能與其細(xì)胞壁的形成相關(guān)，而PBP2a可能會(huì)加速該現(xiàn)象出現(xiàn)，即使相關(guān)PBPs活性在β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物干預(yù)結(jié)合下而降低，這一現(xiàn)象仍會(huì)發(fā)生。實(shí)驗(yàn)表明，PBP2a不會(huì)單方面促成β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗菌藥物對(duì)MRSA的耐藥性，若沉默PBP2基因，可降低對(duì)甲氧西林的耐藥程度［36］；另外，阻斷PBP2的TGase活性時(shí)，抗菌藥物的存在致使PBP2抑制TPase活性，PBP2a則可恢復(fù)TPase活性，實(shí)現(xiàn)細(xì)菌肽聚糖合成與細(xì)胞壁骨架搭建［37］。由此可知，MRSA的耐藥性是其細(xì)胞壁上合成了相關(guān)肽聚糖，而PBP2a則協(xié)同PBP催化了該過(guò)程。

2.2 S.aureus對(duì)四環(huán)素類(lèi)抗菌藥物的耐藥機(jī)制

在對(duì)S.aureus測(cè)序后發(fā)現(xiàn)，其基因序列中包含了滅活酶基因、排外基因、核糖體保護(hù)基因及未明機(jī)制的基因等。共40多種耐藥性基因，而這些耐藥性基因均指向四環(huán)素類(lèi)藥物，這就揭示了S.aureus對(duì)四環(huán)素類(lèi)抗菌藥物耐藥的本質(zhì)［38］。在系列針對(duì)耐四環(huán)素類(lèi)藥物的研究中發(fā)現(xiàn)，多數(shù)研究主要著力在主動(dòng)排外基因和核糖體保護(hù)基因等基因，TetK、TetO、TetL、TetA及TetC等基因均包含于此。其中在奶牛源葡萄球菌中介導(dǎo)四環(huán)素耐藥的基因主要為T(mén)etL和TetK，TetM和最為罕見(jiàn)的TetO也在牛源葡萄球菌中被檢出。國(guó)外有學(xué)者利用PCR技術(shù)檢測(cè)對(duì)S.aureus中可能存在的耐四環(huán)素抗菌藥物基因片段發(fā)現(xiàn)：在分離的90株S.aureus中，TetK基因的檢出率為84%，TetL基因?yàn)?%，TetM為2%，TetO僅為1%［39］。這些耐藥基因能夠產(chǎn)生介導(dǎo)四環(huán)素耐藥的保護(hù)蛋白，以質(zhì)?；蜣D(zhuǎn)座子為媒介在各個(gè)菌體間快速地產(chǎn)生、擴(kuò)散著對(duì)此類(lèi)抗菌藥物的耐藥性。

2.3 S.aureus對(duì)氨基糖苷類(lèi)抗菌藥物的耐藥機(jī)制

S.aureus對(duì)氨基糖苷類(lèi)抗菌藥物的耐藥機(jī)制主要有以下3種：（1）藥物結(jié)合位點(diǎn)的改變。發(fā)生基因突變現(xiàn)象，致使藥物無(wú)法發(fā)揮抑菌或殺菌作用而形成耐藥；（2）膜屏障的改變或主動(dòng)外排作用。減少此類(lèi)抗菌藥物的吸收或阻止藥物進(jìn)入細(xì)菌內(nèi)而產(chǎn)生耐藥；（3）氨基糖苷修飾酶（Aminoglycosides modifying enzyme，AMEs）的修飾鈍化作用。AMEs通過(guò)修飾此類(lèi)抗菌藥物的特定基團(tuán)，使其降低或失去對(duì)靶位核糖體的親和力而喪失生物活性，從而產(chǎn)生耐藥性。這是S.aureus對(duì)該類(lèi)藥物產(chǎn)生耐藥的主要機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn)，氨基糖苷類(lèi)抗菌藥物耐藥的基因中，氨基糖苷乙酰轉(zhuǎn)移酶（Aminoglycoside acetyltransferases，AAC）6′和氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶（Aminoglycosidephosphotransferases，APH）2′′基 因分別編碼雙功能酶AAC6′和APH2″，這兩種編碼基因可使S.aureus對(duì)GM、K、丁胺卡那（Amikacin，AMK）、妥布霉素（Tobramycin，TM）和奈替米星（Netilmicin，NET）等產(chǎn)生耐藥性［40-41］；Turutoglu 等［42］從奶牛乳房炎分離出了18株MRSA菌株，進(jìn)行PCR耐藥基因檢測(cè)及序列分析發(fā)現(xiàn)，有3株mecA陽(yáng)性基因編碼耐甲氧西林，并證明了這3株菌株存在AAC6′、APH2″、APH3′等基因編碼的氨基糖苷類(lèi)耐藥，表明攜帶氨基糖苷類(lèi)修飾酶基因的3株菌株對(duì)慶大霉素、卡那霉素和新霉素耐藥；徐佳［43］對(duì)奶牛乳房炎葡萄球菌種類(lèi)及耐藥性研究表明，32.1%的S.aureus為AACA、APHD基因檢測(cè)陽(yáng)性，證實(shí)了表達(dá)AAC6′、APH2″是S.aureus對(duì)氨基糖苷類(lèi)抗菌藥物耐藥的主要原因；Crossman等［44］學(xué)者在對(duì)S.aureus全基因組的研究中發(fā)現(xiàn)，S.aureus帶有多種擬多重耐藥轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因。目前，國(guó)內(nèi)外相關(guān)報(bào)道罕見(jiàn)，其功能和具體作用機(jī)制尚未明確，尚需進(jìn)一步研究。

2.4 S.aureus對(duì)大環(huán)內(nèi)酯、林可胺類(lèi)（Macrolides lincosamides，MLs）抗菌藥物的耐藥機(jī)制

S.aureus對(duì)MLs抗菌藥物的耐藥機(jī)制主要有3種：（1）藥物活性被鈍化；（2）藥物與菌體的作用位點(diǎn)突變；（3）菌體內(nèi)形成了主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)藥物系統(tǒng)。

多項(xiàng)研究表明，紅霉素核糖體甲基化酶（Erythromycin ribosome methylase，erm）基因、msr基因是介導(dǎo)MLs抗菌藥物耐藥的兩個(gè)主要基因。S.aureus染色體或質(zhì)粒上攜帶erm、msr基因，分別編碼核糖體甲基化酶和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白［45］，這兩種編碼基因通過(guò)修改抗菌藥物與菌體的結(jié)合位點(diǎn)，抑制MLs類(lèi)抗菌藥物，從而使得S.aureus對(duì)MLs抗菌藥物耐藥［46］。其中erm基因是介導(dǎo)S.aureus對(duì)MLs抗菌藥物產(chǎn)生廣泛耐藥的主要原因，erm基因表達(dá)及其上游啟動(dòng)子出現(xiàn)突變均可致使MLs產(chǎn)生耐藥，當(dāng)核糖體蛋白L4和大亞基的23S rRNA堿基突變而抑制該類(lèi)藥物與核糖體靶位點(diǎn)結(jié)合，也可導(dǎo)致MLs抗菌藥物耐藥［47］；而msrA和msrC基因編碼的主動(dòng)泵出系統(tǒng)可將MLs抗菌藥物從細(xì)胞中排出，以保持細(xì)胞內(nèi)低濃度MLs藥物水平。報(bào)道稱(chēng)，msrC基因在介導(dǎo)S.aureus對(duì)紅霉素高水平耐藥中發(fā)揮重要作用［48］。

erm、msr基因已被證實(shí)在牛源S.aureus中檢出。Kot等［49］研究表明，奶牛乳房炎中S.aureus檢出率16.4%，其中15.6%對(duì)MLs抗菌藥物產(chǎn)生了耐藥性，對(duì)其抗性基因檢測(cè)得出，ermA、ermB和ermC的檢出率分別是14.8%、11.1%和55.5%；2018年，最新研究表明，牛源奶酪被認(rèn)為是抗菌藥物耐藥基因的儲(chǔ)存庫(kù)，S.aureus分離率為4.3%，16S rRNA基因的DNA序列鑒定結(jié)果顯示，耐藥基因msrA攜帶率為60.9%，msrB攜帶率為46.6%［50］。說(shuō)明S.aureus及MLs耐藥基因分離率因地域性不同差異較大。

2.5 S.aureus對(duì)喹諾酮抗菌藥物的耐藥機(jī)制

S.aureus對(duì)喹諾酮類(lèi)抗菌藥物（Quinolone antibiotics）耐藥的機(jī)制主要有3種：（1）藥物靶酶及編碼基因的突變。DNA促旋酶和拓?fù)洚悩?gòu)酶IV是喹諾酮類(lèi)藥物對(duì)S.aureus發(fā)揮抗菌作用的靶酶，grlA和grlB基因編碼DNA促旋酶，grlA、grlB和parC基因編碼拓?fù)洚悩?gòu)酶IV［51］。李曉娜等［52］報(bào)道220株奶牛乳房炎S.aureus菌株中g(shù)rlA基因、gyrA基因和norA基因的檢出率分別為80%、78.64%和78.18%，說(shuō)明奶牛乳房炎S.aureus攜帶喹諾酮類(lèi)藥物耐藥基因，這些基因位點(diǎn)的突變可引起喹諾酮類(lèi)藥物作用的靶位改變，從而導(dǎo)致S.aureus對(duì)喹諾酮類(lèi)藥物耐藥。但不同結(jié)構(gòu)的喹諾酮類(lèi)藥物對(duì)S.aureus的作用位點(diǎn)不同。苗貝貝等［53］通過(guò)研究左氧氟沙星、莫西沙星和奈諾沙星3種喹諾酮類(lèi)藥物對(duì)S.aureus耐藥突變體的體外抗菌活性發(fā)現(xiàn)，左氧氟沙星優(yōu)先作用于S.aureus拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅳ靶位parC基因，而莫西沙星和奈諾沙星則幾乎同時(shí)作用于S.aureusDNA促旋酶靶位grlA基因和拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅳ靶位parC基因。該類(lèi)藥物耐藥性與這些靶位酶基因密不可分，統(tǒng)稱(chēng)為喹諾酮類(lèi)藥物耐藥決定區(qū)（Quinolone resistance-determining regions，QRDR）基因 ；（2）主動(dòng)外排系統(tǒng)。主要為norA、norB、norC基因介導(dǎo)的主動(dòng)外排系統(tǒng)［56］，使藥物在菌體內(nèi)蓄積量減少，從而介導(dǎo)喹諾酮類(lèi)藥物低水平耐藥；（3）質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥機(jī)制。質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮類(lèi)藥物耐藥（Plamidmediated quinolone resisitence，PMQR） 機(jī) 制 通 過(guò)PMQR基因?qū)崿F(xiàn)。目前，qnr、Aac6’-Ib-cr、qepA和oqxA/B基因的作用機(jī)制已較為成熟，主要通過(guò)以下5種方式介導(dǎo)S.aureus產(chǎn)生耐藥：①與喹諾酮作用靶酶結(jié)合，降低藥物對(duì)細(xì)菌的抑制作用；②提高細(xì)菌MIC，增加細(xì)菌耐藥率；③促進(jìn)細(xì)菌染色體基因自身突變，增加高水平耐藥菌株；④將藥物排出菌體外，降低藥物在菌體內(nèi)的蓄積量；⑤使gyrA、parC功能區(qū)發(fā)生突變，細(xì)菌趨于高水平耐藥。而Cfr和fexA兩種基因在牛源S.aureu中報(bào)道較少，是今后挖掘S.aureus對(duì)喹諾酮類(lèi)分子耐藥機(jī)制的新元素。

表2 S.aureus常見(jiàn)的基因突變位點(diǎn)［51-55］

3 結(jié)語(yǔ)

奶牛乳房炎S.aureus面臨著嚴(yán)峻的耐藥及其耐藥基因流行傳播形勢(shì)，出現(xiàn)了多重耐藥現(xiàn)象，但細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生是一種天然抗生現(xiàn)象，現(xiàn)代畜牧業(yè)中抗菌藥物的使用不可避免，隨著細(xì)菌耐藥性的快速發(fā)展，S.aureus耐藥機(jī)制日漸復(fù)雜。因此，應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注S.aureus耐藥現(xiàn)狀及其變遷情況，從分子水平深層探索S.aureus耐藥機(jī)制，發(fā)現(xiàn)新的耐藥基因，找出削減S.aureus及MRSA耐藥機(jī)理，避免抗菌藥物的惡循環(huán)濫用，為奶牛乳房炎設(shè)計(jì)合理的臨床治療方案。奶牛乳房炎源病菌耐藥性監(jiān)測(cè)試劑盒和相應(yīng)新型抗菌藥物的研發(fā)是相關(guān)研究領(lǐng)域發(fā)展趨勢(shì)。