肖紅梅

(安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院藥劑科、國家中醫(yī)藥管理局中藥化學三級實驗室，安徽 合肥 230001)

鹽酸丙酰左卡尼汀(Propionyl-L-carnitine hydrochloride)化學名為(R)-3-羧基-2-丙酰氧基-N，N，N-三甲基-1-丙胺鹽酸鹽，為左卡尼汀乙酰轉移酶刺激劑，可以擴張外周微動脈血管，改善微循環(huán)，臨床上主要用于治療間歇性跛行、外周微血管疾病、慢性充血性心力衰竭等[1-4]。目前僅有意大利Sigma-tau 公司上市了片劑和注射用凍干粉末，我國目前沒有其任何制劑上市銷售，尚處于臨床研究階段。

1 儀器與試藥

1.1儀器SHIMADZU LC-20系列高效液相色譜儀(島津SHIMADZU公司)；XP205型分析天平(0.01 mg，梅特勒-托利多儀器有限公司)；SK5200超聲波清洗器(上?？茖С晝x器有限公司)；Mili-Q型超純水制備儀(密理博中國有限公司)。

1.2試藥鹽酸丙酰佐卡尼汀對照品(瑞陽制藥有限公司，批號：20141001)；乙酰左卡尼汀(瑞陽制藥有限公司，批號：20141101)，左卡尼汀(中國藥品生物制品檢定研究院，批號：101041-201503)，巴豆甜菜堿(中國藥品生物制品檢定研究院，批號:420033-201501)，鹽酸丙酰左卡尼汀片(瑞陽制藥有限公司，批號：20150101、20150102、20150103，規(guī)格：500 mg)；乙腈(色譜純、天津市光復精細化工研究所)；磷酸二氫鉀、氫氧化鈉均為分析純；水(自制超純水)。

2 方法與結果

2.1色譜條件Thermo Hypersil Aps-2 氨基柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以0.1 mol·L-1磷酸二氫鉀緩沖液(1.0 mol·L-1氫氧化鈉溶液調 pH調至4.7)-乙腈(35∶65)為流動相，流速為1.0 mL·min-1，柱溫30 ℃，檢測波長205 nm。

2.2樣品溶液制備

2.2.1對照品貯備液 精密稱取鹽酸丙酰佐卡尼汀對照品適量，加流動相溶解并稀釋制成5.050 2 g·L-1作為鹽酸丙酰左卡尼汀對照品貯備液。

2.2.2對照品溶液 精密量取對照品貯備液4 mL置于10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.2.3供試品溶液 取供試品10片，研細，精密稱取細粉適量(約相當于鹽酸丙酰左卡尼汀20 mg)，置10 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。

2.2.4空白輔料溶液制備 稱取鹽酸丙酰左卡尼汀片所用空白輔料(按處方配比)適量，加流動相振搖并稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.2.5雜質貯備溶液 精密稱取巴豆甜菜堿、乙酰左卡尼汀、左卡尼汀[5]適量，用流動相溶解并稀釋制成含巴豆甜菜堿252 mg·L-1、乙酰左卡尼汀244 mg·L-1和左卡尼汀261 mg·L-1的混合溶液，搖勻即得。

2.2.6系統(tǒng)適用性試驗溶液 精密稱取鹽酸丙酰左卡尼汀50.3 mg，置于10 mL量瓶中，先加少量流動相溶解，再加入1.0 mL雜質貯備溶液，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3方法學考察

2.3.1專屬性 分別取空白輔料溶液與系統(tǒng)適用性溶液20 μL，在上述色譜條件下進樣分析，結果顯示制劑中各輔料組分與各雜質在205 nm的波長下不干擾主成分的測定，鹽酸丙酰左卡尼汀峰與相鄰雜質峰分離度為5.8，系統(tǒng)適用性符合要求。結果見表1，高效液相色譜圖見圖1。

表1 試驗溶液的系統(tǒng)適用性結果

注：A為空白輔料溶液;B為對照品溶液；C為系統(tǒng)適應性溶液;1為鹽酸丙酰左卡尼?。?為乙酰左卡尼??；3為左卡尼??；4為巴豆甜菜堿圖1 HPLC含量測定色譜圖

2.3.2定量限的考察 取對照品溶液濃溶液，稀釋20 000倍后，進樣20 μL，計算鹽酸丙酰左卡尼汀定量限(S/N≈10)為0.253 mg·L-1。

2.3.3線性關系的考察 分別精密吸取“2.2.1”項下對照品貯備液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL置于10 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取20 μL注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，以峰面積對進樣濃度(g·L-1)進行線性回歸，得鹽酸丙酰左卡尼汀回歸方程Y=808 112X+19 954，r=0.999 9。結果表明：鹽酸丙酰左卡尼汀在0.505 0～5.050 2 g·L-1范圍內(nèi)，峰面積與進樣濃度呈良好的線性關系。

2.3.4精密度試驗 取“2.2.2”項下對照品溶液，精密吸取20 μL注入液相色譜儀中，重復進樣6次，鹽酸丙酰左卡尼汀峰面積RSD為0.34%，結果表明方法精密度良好。

2.3.5重復性試驗 取鹽酸丙酰左卡尼汀片(批號:20150101)10片，按“2.2.3”項下方法處理并測定，鹽酸丙酰左卡尼丁的平均標示含量為100.6%(n=6)，RSD為0.83%，結果表明測定重復性好。

2.3.6穩(wěn)定性試驗 精密吸取“2.2.3”項下供試品溶液于0、2、4、6、8、12 h進樣測定，鹽酸丙酰左卡尼汀峰面積RSD為0.87%，結果表明在室溫放置條件下12 h內(nèi)對照品溶液基本穩(wěn)定。

2.3.7加樣回收率試驗 按處方量稱取空白輔料(按處方配比)適量，加入80%處方量的鹽酸丙酰左卡尼汀對照品，混合均勻。同法稱取空白輔料適量，按處方配比加入100%處方量，120%的鹽酸丙酰左卡尼汀對照品。精密稱取以上供試品適量(以空白輔料為固定量)，置于10 mL量瓶中，計算含量?；厥章势骄鶠?00.1%，RSD為0.9%，具體數(shù)據(jù)見表2。結果表明測定方法準確、可靠。

表2 加樣回收率試驗(n=9)

2.4樣品測定取鹽酸丙酰左卡尼汀片3批，按照“2.2.3”項下方法處理并測定鹽酸丙酰左卡尼汀片的含量，結果見表3。

表3 鹽酸丙酰左卡尼汀片含量測定結果(n=3)

3 討論

取鹽酸丙酰左卡尼汀對照品(批號：20141001)適量，用流動相溶解稀釋成適宜濃度(100 mg·L-1)，在190～400 nm的波長范圍內(nèi)進行紫外掃描，結果溶液在205 nm波長處有最大吸收值，因此選擇205 nm為檢測波長。

在選擇色譜系統(tǒng)的過程中，參考了文獻[6-8]所使用的色譜系統(tǒng)，發(fā)現(xiàn)在使用的過程中鹽酸丙酰左卡尼汀峰峰形較差，拖尾因子較大，達到1.5以上，理論塔板數(shù)僅能達到2 000左右，滿足不了本研究的要求，后參考歐洲藥典9.0收載的左卡尼汀有關物質檢測項下的色譜系統(tǒng)[9]，其結果鹽酸丙酰左卡尼汀峰峰形較好，拖尾因子可以達到1.3以內(nèi)，理論塔板數(shù)達5 000以上，與相鄰的乙酰左卡尼汀雜質峰分離度達到5.0以上，各雜質峰的分離度也均符合要求，可以滿足本研究的要求，最終選擇本試驗所用的條件為鹽酸丙酰左卡尼汀片含量測定的方法。