王 松,房 芳,魯 冰,籍胤璽,付莉萍
(南陽市中心醫(yī)院,河南 南陽 473009)
糖尿病是常見的一種慢性內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病,其發(fā)病率正在逐年增加[1]。2型糖尿病是常見的糖尿病類型,占糖尿病95%以上。2型糖尿病早期階段主要為胰島素抵抗,且隨著糖尿病病程的延長,胰島β細胞功能減退,導(dǎo)致2型糖尿病病情進一步惡化[2-3]。近年來中醫(yī)藥在2型糖尿病治療中取得了良好效果[4-6]。本文研究清熱益氣中藥對2型糖尿病小鼠胰島細胞凋亡及炎癥因子表達的影響。
由武漢生物制品研究所提供的SPF級ICR小鼠60只,體質(zhì)量(18±2)g,生產(chǎn)許可證號:SCXK(鄂)2008-0003。清熱益氣中藥組成:黃連9 g,黃芩9 g,人參9 g,黃芪9 g,甘草6 g;格列美脲片(國藥準字H20010571,山東新華制藥股份有限公司)。小鼠胰島素(INS)試劑盒(美國Sigma公司),鏈脲菌素(STZ)(美國Sigma公司),小鼠C-反應(yīng)蛋白(CRP)試劑盒(上海恒斐生物科技有限公司),小鼠腫瘤壞死因子-α(TNF-α)試劑盒(上海恒斐生物科技有限公司),小鼠白介素-6(IL-6)試劑盒(上海恒斐生物科技有限公司)。美國Thermo離心機,日本日立7160型全自動生化分析儀,雅培血糖儀。
2.1 清熱益氣中藥制備 取黃連9 g,黃芩9 g,人參9 g,黃芪9 g,甘草6 g,加水300 mL浸泡30 min后煎煮40 min,將藥渣去掉,再繼續(xù)煎煮40 min,以60 ℃恒溫條件下將其濃縮成1 mL含生藥2.5 g,放置于4 ℃條件下保存。
2.2 2型糖尿病小鼠模型建立 60只小鼠晝夜交替12 h,維持室溫23~25 ℃,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。隨機分為5組,每組12只。對照組給予普通飼料,剩余48只小鼠給予高脂高糖飼料(成分:72%普通飼料、3%蛋黃、10%豬油、15%蔗糖),觀察活動狀態(tài)、飲食狀況,喂養(yǎng)第3周后,進食12 h,腹腔注射STZ,劑量為30 mg/kg一次性腹腔注射,喂養(yǎng)1周,于小鼠尾靜脈取血,測定小鼠空腹血糖3次,取空腹血糖>11.1 mmol/L的小鼠為2型糖尿病小鼠。
2.3 實驗分組 48只小鼠造模成功41只,取其中40只用作實驗。12只正常小鼠取10只用作實驗。分為對照組、模型組、格列美脲組、清熱益氣低劑量組、清熱益氣高劑量組,10只/組。對照組給予等劑量生理鹽水灌胃;模型組于造模后給予等劑量生理鹽水灌胃;格列美脲組于造模后給予格列美脲4 g(/kg·d)灌胃,1次/d;清熱益氣低劑量組于造模后按生藥4 g(/kg·d)灌胃,1次/d;清熱益氣高劑量組于造模后按生藥12 g(/kg·d)灌胃,1次/d,每組灌胃4周,灌胃量均為5 mL/次。
2.4 小鼠空腹血糖測定 血糖測定采用尾靜脈取血,應(yīng)用羅氏血糖試紙讀數(shù)法測定。
2.5 血清標本采集 灌胃4周后,取小鼠4只/組,眼球取血0.6 mL,以離心半徑15 cm,轉(zhuǎn)速3 000 r/min,離心10 min,分離血清,放置于-20 ℃下冷凍保存,待測。2.6 血清炎癥因子測定 采用酶聯(lián)免疫吸附法測定CRP、TNF-α和IL-6含量,嚴格按照試劑盒說明書標準測定。
2.7 統(tǒng)計學(xué)處理 以SPSS19.0軟件分析,針對本研究數(shù)據(jù)中計量資料以t檢驗,針對本研究數(shù)據(jù)中計數(shù)資料以卡方檢驗。
3.1 各組小鼠空腹血糖比較 見表1。
3.2 各組小鼠INS和ISI變化比較 見表2。
3.3 各組小鼠血清炎癥因子含量比較 見表3。
表1 各組小鼠空腹血糖比較(x± s ,n = 10)
表2 各組小鼠INS和ISI變化比較(x± s ,n = 10)
表3 各組小鼠血清炎癥因子含量比較(x± s ,n = 10)
中醫(yī)學(xué)認為2型糖尿病屬“消渴病”范疇,認為其基本病機為虛、痰、濁、瘀互結(jié),其中瘀、濁、痰均屬內(nèi)生之毒范疇,內(nèi)生之毒,郁而化熱,造成熱毒郁結(jié)、耗傷[7]。臨床上應(yīng)以清熱解毒,益氣生津為治療法則。本研究采用清熱益氣中藥,其中黃連、黃芩清熱解毒,人參、黃芪益氣,甘草調(diào)和諸藥。本研究結(jié)果表明,清熱益氣中藥可降低空腹血糖,降低INS而提高ISI,從而改善患者胰島功能。
近年來研究證實,炎癥因子與2型糖尿病發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。CRP是一種急性時相蛋白,主要經(jīng)細胞因子刺激肝臟而產(chǎn)生[8]。有學(xué)者研究證實新發(fā)病或已確診2型糖尿病CRP明顯升高[9]。IL-6主要由2條糖蛋白鏈構(gòu)成的一種多肽,是重要的細胞因子之一,主要來源于內(nèi)皮細胞、脂肪細胞和巨噬細胞,已被證實與機體多種病理生理過程相關(guān)[10]。研究證實,心血管疾病及2型糖尿病患者體內(nèi)IL-6含量較高,且胰島素分泌不足和胰島素抵抗導(dǎo)致的高血糖均能夠促進胰島素細胞分泌大量的IL-6,進一步促進T淋巴細胞過度激活和促進B淋巴細胞分化,能夠?qū)е乱葝uβ細胞死亡,以及加重胰島素抵抗[11-12]。TNF-α主要由巨噬細胞、單核細胞和脂肪細胞產(chǎn)生,體內(nèi)TNF-α含量與脂肪組織量成正相關(guān)[13-14]。有學(xué)者研究證實TNF-α可顯著降低胰島素的敏感性[15]。本文研究結(jié)果表明,清熱益氣中藥可降低CRP、TNF-α和IL-6含量,認為其可改善慢性炎癥,提高靶器官對胰島素的敏感性,進一步能夠改善胰島素抵抗癥狀。
綜上所述,清熱益氣中藥可降低2型糖尿病小鼠空腹血糖、胰島素,增加胰島素敏感指數(shù),降低炎癥因子CRP、TNF-α和IL-6表達。