王 松，房 芳，魯 冰，籍胤璽，付莉萍

（南陽市中心醫(yī)院，河南 南陽 473009）

糖尿病是常見的一種慢性內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病，其發(fā)病率正在逐年增加[1]。2型糖尿病是常見的糖尿病類型，占糖尿病95%以上。2型糖尿病早期階段主要為胰島素抵抗，且隨著糖尿病病程的延長，胰島β細胞功能減退，導(dǎo)致2型糖尿病病情進一步惡化[2-3]。近年來中醫(yī)藥在2型糖尿病治療中取得了良好效果[4-6]。本文研究清熱益氣中藥對2型糖尿病小鼠胰島細胞凋亡及炎癥因子表達的影響。

1 實驗材料

由武漢生物制品研究所提供的SPF級ICR小鼠60只，體質(zhì)量（18±2）g，生產(chǎn)許可證號：SCXK（鄂）2008-0003。清熱益氣中藥組成：黃連9 g，黃芩9 g，人參9 g，黃芪9 g，甘草6 g；格列美脲片（國藥準(zhǔn)字H20010571，山東新華制藥股份有限公司）。小鼠胰島素（INS）試劑盒（美國Sigma公司），鏈脲菌素（STZ）（美國Sigma公司），小鼠C-反應(yīng)蛋白（CRP）試劑盒（上海恒斐生物科技有限公司），小鼠腫瘤壞死因子-α（TNF-α）試劑盒（上海恒斐生物科技有限公司），小鼠白介素-6（IL-6）試劑盒（上海恒斐生物科技有限公司）。美國Thermo離心機，日本日立7160型全自動生化分析儀，雅培血糖儀。

2 實驗方法

2.1 清熱益氣中藥制備 取黃連9 g，黃芩9 g，人參9 g，黃芪9 g，甘草6 g，加水300 mL浸泡30 min后煎煮40 min，將藥渣去掉，再繼續(xù)煎煮40 min，以60 ℃恒溫條件下將其濃縮成1 mL含生藥2.5 g，放置于4 ℃條件下保存。

2.2 2型糖尿病小鼠模型建立 60只小鼠晝夜交替12 h，維持室溫23～25 ℃，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。隨機分為5組，每組12只。對照組給予普通飼料，剩余48只小鼠給予高脂高糖飼料（成分：72%普通飼料、3%蛋黃、10%豬油、15%蔗糖），觀察活動狀態(tài)、飲食狀況，喂養(yǎng)第3周后，進食12 h，腹腔注射STZ，劑量為30 mg/kg一次性腹腔注射，喂養(yǎng)1周，于小鼠尾靜脈取血，測定小鼠空腹血糖3次，取空腹血糖＞11.1 mmol/L的小鼠為2型糖尿病小鼠。

2.3 實驗分組 48只小鼠造模成功41只，取其中40只用作實驗。12只正常小鼠取10只用作實驗。分為對照組、模型組、格列美脲組、清熱益氣低劑量組、清熱益氣高劑量組，10只/組。對照組給予等劑量生理鹽水灌胃；模型組于造模后給予等劑量生理鹽水灌胃；格列美脲組于造模后給予格列美脲4 g（/kg·d）灌胃，1次/d；清熱益氣低劑量組于造模后按生藥4 g（/kg·d）灌胃，1次/d；清熱益氣高劑量組于造模后按生藥12 g（/kg·d）灌胃，1次/d，每組灌胃4周，灌胃量均為5 mL/次。

2.4 小鼠空腹血糖測定 血糖測定采用尾靜脈取血，應(yīng)用羅氏血糖試紙讀數(shù)法測定。

2.5 血清標(biāo)本采集 灌胃4周后，取小鼠4只/組，眼球取血0.6 mL，以離心半徑15 cm，轉(zhuǎn)速3 000 r/min，離心10 min，分離血清，放置于-20 ℃下冷凍保存，待測。2.6 血清炎癥因子測定 采用酶聯(lián)免疫吸附法測定CRP、TNF-α和IL-6含量，嚴(yán)格按照試劑盒說明書標(biāo)準(zhǔn)測定。

2.7 統(tǒng)計學(xué)處理 以SPSS19.0軟件分析，針對本研究數(shù)據(jù)中計量資料以t檢驗，針對本研究數(shù)據(jù)中計數(shù)資料以卡方檢驗。

3 結(jié)果

3.1 各組小鼠空腹血糖比較 見表1。

3.2 各組小鼠INS和ISI變化比較 見表2。

3.3 各組小鼠血清炎癥因子含量比較 見表3。

表1 各組小鼠空腹血糖比較（x± s ，n = 10）

表2 各組小鼠INS和ISI變化比較（x± s ，n = 10）

表3 各組小鼠血清炎癥因子含量比較（x± s ，n = 10）

4 討論

中醫(yī)學(xué)認為2型糖尿病屬“消渴病”范疇，認為其基本病機為虛、痰、濁、瘀互結(jié)，其中瘀、濁、痰均屬內(nèi)生之毒范疇，內(nèi)生之毒，郁而化熱，造成熱毒郁結(jié)、耗傷[7]。臨床上應(yīng)以清熱解毒，益氣生津為治療法則。本研究采用清熱益氣中藥，其中黃連、黃芩清熱解毒，人參、黃芪益氣，甘草調(diào)和諸藥。本研究結(jié)果表明，清熱益氣中藥可降低空腹血糖，降低INS而提高ISI，從而改善患者胰島功能。

近年來研究證實，炎癥因子與2型糖尿病發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。CRP是一種急性時相蛋白，主要經(jīng)細胞因子刺激肝臟而產(chǎn)生[8]。有學(xué)者研究證實新發(fā)病或已確診2型糖尿病CRP明顯升高[9]。IL-6主要由2條糖蛋白鏈構(gòu)成的一種多肽，是重要的細胞因子之一，主要來源于內(nèi)皮細胞、脂肪細胞和巨噬細胞，已被證實與機體多種病理生理過程相關(guān)[10]。研究證實，心血管疾病及2型糖尿病患者體內(nèi)IL-6含量較高，且胰島素分泌不足和胰島素抵抗導(dǎo)致的高血糖均能夠促進胰島素細胞分泌大量的IL-6，進一步促進T淋巴細胞過度激活和促進B淋巴細胞分化，能夠?qū)е乱葝uβ細胞死亡，以及加重胰島素抵抗[11-12]。TNF-α主要由巨噬細胞、單核細胞和脂肪細胞產(chǎn)生，體內(nèi)TNF-α含量與脂肪組織量成正相關(guān)[13-14]。有學(xué)者研究證實TNF-α可顯著降低胰島素的敏感性[15]。本文研究結(jié)果表明，清熱益氣中藥可降低CRP、TNF-α和IL-6含量，認為其可改善慢性炎癥，提高靶器官對胰島素的敏感性，進一步能夠改善胰島素抵抗癥狀。

綜上所述，清熱益氣中藥可降低2型糖尿病小鼠空腹血糖、胰島素，增加胰島素敏感指數(shù)，降低炎癥因子CRP、TNF-α和IL-6表達。