代聰偉 李娜 楊艷艷 王蓓 閆萍

河北省人民醫(yī)院婦科（石家莊 050051）

IGFs家族包括IGF?1和IGF?2兩類生長因子及其相應(yīng)受體，IGF?1基因結(jié)構(gòu)上與胰島素原具有高度的同源性［1-2］，當(dāng)IGF?1及其受體的分泌和表達發(fā)生異常時就有可能導(dǎo)致子宮內(nèi)膜的異常增生，誘發(fā)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生［3-4］。有研究表明IGF?2具有腫瘤抑制效應(yīng)，而腫瘤組織中IGF?2的非功能性突變也潛在的抑制了主體的免疫功能［5］。胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白（insulin?1ike growth factor binding Protein，IGFBP）也屬于 IGFs家族，其中IGFBP?3在血液中的濃度很多，與胃癌、肝癌等惡性腫瘤有密切的關(guān)系［6-7］，但是與子宮內(nèi)膜癌的關(guān)系還無相關(guān)報道。本試驗采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測IGF?1、IGF?2、IGFBP?3在子宮內(nèi)膜癌組織與癌旁組織中的表達，探討其與子宮內(nèi)膜癌患者臨床病理特征參數(shù)的相關(guān)性?，F(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源 采用回顧性、總結(jié)研究方法，2015年9月至2017年12月選擇在我院進行手術(shù)診治的子宮內(nèi)膜癌患者120例的癌組織標本與癌旁組織標本作為研究對象，納入標準：術(shù)前未接受放療、化療及激素治療；有完整的臨床病理資料；病理檢查診斷為子宮內(nèi)膜癌；癌旁組織與離癌組織距離≥3 cm；手術(shù)方式為子宮內(nèi)膜癌分期手術(shù)（廣泛子宮切除術(shù)、雙附件切除及盆腔淋巴結(jié)清掃術(shù)）；醫(yī)院倫理委員會批準了此次研究。排除標準：婦科內(nèi)分泌疾病及生殖道炎癥；妊娠與哺乳期婦女標本。

在120例患者的組織標本中，年齡最小45歲，最大78歲，平均（65.33±4.21）歲，年齡≥ 60歲60例；分化程度：高分化80例，中分化20例，低分化20例；臨床分期：Ⅰ期60例，Ⅱ期40例，Ⅲ期20例；病理類型：子宮內(nèi)膜腺癌70例，漿液性乳頭狀腺癌30例，透明細胞癌20例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移30例；肌層浸潤50例；形態(tài)：局灶型50例，彌漫型70例。

1.2 免疫組化方法 所有患者的癌組織標本與癌旁組織標本取材后，甲醛固定、石蠟包埋，制成石蠟切片（4 μm厚）。兔抗人IGF?1、IGF?2、IGFBP?3多克隆抗體來自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，DAB酶底物顯色劑來自廣州深達生物制品技術(shù)有限公司，超敏鏈霉菌抗生物素蛋白?過氧化酶染色法（S?P免疫組化法）廣譜免疫組化試劑盒來自廣州深達生物制品技術(shù)有限公司。將切片組織37℃烤24 h，3%H2O2封閉內(nèi)源性過氧化物酶10 min，抗原修復(fù)后加入一抗，濕盒內(nèi)4℃過夜，二抗37℃孵育30 min。DAB顯色，脫水封片后在光學(xué)顯微鏡觀察。取已知陽性組織切片作為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 觀察指標 IGF?1蛋白表達陽性為胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色細顆粒，IGF?2蛋白表達陽性為胞漿或胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒，IGFBP?3蛋白表達陽性染色為黃色或者棕黃色顆粒位于細胞質(zhì)中。染色強度陰性為0分、染色強為3分、染色清晰為2分、染色弱但強于陰性對照為1分。陽性細胞數(shù)＜10%為0分，＞60%為3分，31%～60%為2分，10%～30%為1分。上述二種評分相加0～1分為（-），2分為（+），3～4分為（++），5～6分為（+++）。鏡下順序放大200倍，每張切片隨機選取10個視野，（++）例數(shù)+（+++）例數(shù)/組內(nèi)例數(shù)× 100.0%=陽性率，都由病理科醫(yī)院進行判定。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 22.00統(tǒng)計軟件包整理錄入資料，計數(shù)數(shù)據(jù)采用率、百分比等表示，計數(shù)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表示，對比方法為χ2檢驗與t檢驗等，應(yīng)用Spearman等級相關(guān)分析進行相關(guān)性分析，檢驗顯著性水平α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 IGF?1、IGF?2、IGFBP?3表達陽性率情況 癌組織中IGF?1、IGF?2、IGFBP?3表達陽性率分別為90.8%、74.2%和30.0%，癌旁組織分別為28.3%、36.7%和93.3%，對比都有顯著差異（P＜0.05）。見表1與圖1、2、3。負相關(guān)（P＜ 0.05），IGF?2也與IGFBP?3呈負相關(guān)（P＜0.05）。見表3。

表1 不同組織的IGF?1、IGF?2、IGFBP?3表達陽性率情況Tab.1 The positive expression rates of IGF?1，IGF?2 and IGFBP?3 in different tissues 例（%）

圖1 IGF?1表達的免疫組化情況Fig.1 IGF?1 immunohistochemical expression

圖2 IGF?2表達的免疫組化情況Fig.2 IGF?2 immunohistochemical expression

圖3 IGFBP?3表達的免疫組化情況Fig.3 IGFBP?3 immunohistochemical expression

2.2 IGF?1、IGF?2、IGFBP?3 表達與臨床病理特征參數(shù)的相關(guān)性 在子宮內(nèi)膜癌組織中，IGF?1、IGF?2蛋白的表達陽性率隨著分化程度的降低、臨床分期的增加、肌層浸潤深度的加深、淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移而增高（P＜0.05），IGFBP?3剛好相反（P＜0.05）；IGF?1、IGF?2、IGFBP?3表達陽性率與患者年齡、大體類型、組織類型無關(guān)（P＞0.05）。見表2。

2.3 IGF?1、IGF?2、IGFBP?3的相關(guān)性分析 在子宮內(nèi)膜癌組織中，Spearman等級相關(guān)分析顯示IGF?1與IGF?2呈正相關(guān)（P＜ 0.05），與IGFBP?3呈

表2 IGF?1、IGF?2、IGFBP?3表達與臨床病理特征參數(shù)的相關(guān)性Tab.2 Correlation between expression of IGF?1，IGF?2 and IGFBP?3 and clinicopathological parameters 例（%）

3 討論

IGFs家族能刺激細胞有絲分裂，促進細胞生長分化及抑制細胞凋亡；也可促進加強機體組織攝糖、糖異生、糖酵解等糖的的代謝，促使蛋白質(zhì)、脂肪的合成增加，還能使得糖元合成增加，分解減少［8-9］。IGF?1是生長調(diào)節(jié)素的一種，子量為7.5 kD，分子中含有3個二硫鍵，由70個氨基酸的單鏈多肽組成，多存在于血液中。IGF?2基因?qū)儆≯E基因，其是一種強有力的促有絲分裂劑，可以直接作用于細胞而導(dǎo)致分裂和增殖，抑制腫瘤細胞的凋亡［10］。IGFBP?3占IGFBPs的絕大多數(shù)，可通過自分泌、旁分泌的方式對進入組織，IGFBP?3可與IGF?1形成復(fù)合物，延長IGF?1的半衰期，從而影響IGF?1的生物學(xué)效應(yīng)［11］。本研究顯示子宮內(nèi)膜癌組織中IGF?1、IGF?2、IGFBP?3表達陽性率分別為90.8%、74.2%和30.0%，癌旁組織分別為28.3%、36.7%和93.3%，對比都有顯著差異。有學(xué)者檢測了子宮內(nèi)膜癌、子宮內(nèi)膜不典型增生及正常對照人群血清中IGF?1濃度，顯示患者中血清IGF?1濃度顯著高于正常對照人群［12］。IGF?1、IGF?2過度表達，能夠激活增生子宮內(nèi)膜的蛋白激酶B途徑，提示IGF?1、IGF?2的高表達會增加子宮內(nèi)膜病變的可能性［13］。本研究顯示在子宮內(nèi)膜癌組織中，IGF?1、IGF?2蛋白的表達陽性率隨著分化程度的降低、臨床分期的增加、肌層浸潤深度的加深、淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移而顯著增高，IGFBP?3剛好相反。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)子IGF?1、IGF?2也在多種腫瘤組織中均呈高表達，且與腫瘤的分化程度、預(yù)后有關(guān)［14］。

表3 子宮內(nèi)膜癌組織IGF?1、IGF?2、IGFBP?3表達的相關(guān)性分析Tab.3 Correlation analysis of expression of IGF?1，IGF?2 and IGFBP?3 in endometrial carcinoma

IGFBPs可與絕大多數(shù)的IGF結(jié)合，IGFBPs可作為IGFs的載體，形成一個IGFs循環(huán)池與IGFs緩慢釋放組織，從而對IGFs的濃度起著重要的調(diào)節(jié)作用［13］。本研究顯示在子宮內(nèi)膜癌組織中，Spearman等級相關(guān)分析分析顯示IGF?1與IGF?2呈顯著正相關(guān)性，與IGFBP?3呈顯著負相關(guān)，IGF?2也與IGFBP?3呈顯著負相關(guān)。有研究通過轉(zhuǎn)染不能結(jié)合IGFs的IGFBP?3突變體到乳腺癌細胞后，其依然能抑制細胞中DNA的合成，并促進細胞的凋亡［8］。不過對于IGF?1、IGF?2及IGFBP?3與子宮內(nèi)膜癌關(guān)系的研究還很有限，具體的機制還有待進一步分析。

綜上所述，IGF?1、IGF?2、IGFBP?3與子宮內(nèi)膜癌的臨床病理特征參數(shù)密切相關(guān)，IGFBP?3可與IGF?1、IGF?2 形成復(fù)合物，進而阻止激活 IGF?1、IGF?2受體以及由此誘導(dǎo)的細胞增殖，從而抑制子宮內(nèi)膜癌的形成。