◎ 王紫昕，朱 捷，馮秀娟

（寧夏食品檢測研究院，寧夏 銀川 750000）

草甘膦（Glyphosate）純品為非揮發(fā)性白色固體，大約在230 ℃熔化，并伴隨分解。25 ℃時(shí)在水中的溶解度為1.2%，不溶于一般有機(jī)溶劑，其異丙胺鹽完全溶解于水。不可燃、不爆炸，常溫貯存穩(wěn)定，是一種非選擇性、無殘留滅生性除草劑，對多年生根雜草非常有效，廣泛用于種植行業(yè)。其殘留含量的檢測原理是通過試樣用水提取，經(jīng)固相萃取柱凈化，與9-芴基甲基三氯甲烷衍生化反應(yīng)后，用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定，內(nèi)標(biāo)法定量。

1 實(shí)驗(yàn)參數(shù)與條件

1.1 設(shè)備、試劑

材料：各大商超及小型店鋪售賣的面粉。設(shè)備：超高相液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（Waterstqsmicro）。標(biāo)準(zhǔn)品：草甘膦標(biāo)準(zhǔn)品99.0%；氨甲基膦酸標(biāo)準(zhǔn)品98.0%；同位素內(nèi)標(biāo)1,2-C13N15標(biāo)準(zhǔn)溶液，100 μg/mL。

試劑：二氯甲烷（AR）、甲醇（AR）、鹽酸（AR）、9-芴基甲基三氯甲烷（FMOC-CL）≥99.0%、丙酮（AR）。

1.2 檢測方法

1.2.1 液相色譜洗脫條件

表1 液相色譜洗脫條件表

1.2.2 質(zhì)譜條件

離子源，ESI；模式，正模式；檢測方式，MRM；干燥器溫度：325 ℃；干燥器流量：7 L/min；噴霧器壓力：275.8 kPa；EMV（+），300；鞘氣溫度：350 ℃；鞘氣流量：11 L/min。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)使用液

準(zhǔn)確稱取各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于10 mL聚乙烯容量瓶中，用水溶解，加入2滴鹽酸，并用水定容至刻度，配制為1.0 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

準(zhǔn)確吸取濃度為100.0 μg/mL的1,2-13C15N草甘膦內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0 mL至10 mL聚乙烯容量瓶中，用水定容至刻度，配制成10.0 μg/mL的同位素標(biāo)準(zhǔn)工作液。

準(zhǔn)確吸取適量混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液和同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液，用水配制成5.0、10.0、20.0、50.0、100.0、200.0 ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，其中同位素內(nèi)標(biāo)濃度為25 ng/mL。

1.3 樣品前處理

稱取5 g樣品于100 mL離心管中，加入0.25 mL內(nèi)標(biāo)工作液，加入40 mL水、20 mL二氯甲烷，高速勻質(zhì)2 min，4 000 r/min離心5 min，取上清液于100 mL聚乙烯容量瓶中，殘?jiān)偌尤?0 mL水重復(fù)提取一次，合并上層水溶液并定容至100 mL，帶凈化。C18小柱用5 mL甲醇、10 mL水活化后加入上述水溶液，棄去1～2 mL初濾液后接收。準(zhǔn)確移取1.0 mL濾液與標(biāo)準(zhǔn)溶液一同加入200 μL 5%硼酸鹽緩沖液，混勻，加入200 μL 1.0 g/L的FMOC-Cl溶液，混勻，40 ℃下衍生化反應(yīng)，放置過夜，衍生后的溶液過濾膜，供超高相液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。

2 不確定度的來源

2.1 數(shù)學(xué)模型的建立

面粉中草甘膦含量測定按公式（1）計(jì)算：

式（1）中，X為面粉中草甘膦的含量，mg/kg；C為由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的樣液中待測物的濃度，ng/mL；C0為試劑空白，ng/mL；V為試樣定容體積，mL；m為試樣的質(zhì)量，g。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度引入的不確定度

草甘膦標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

2.3 標(biāo)準(zhǔn)儲備液配制過程中稱量引入的不確定度

草甘膦標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

氨甲基膦酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

2.4 稀釋過程引入的不確定度

標(biāo)準(zhǔn)工作曲線是由準(zhǔn)確吸取適量混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液和同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液，用水配制成5.0、10.0、20.0、50.0、100.0、200.0 ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，其中同位素內(nèi)標(biāo)濃度為25 ng/mL。

繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線過程中使用了一系列玻璃量具，按照J(rèn)JG 196-2006《常用玻璃量具檢定規(guī)程》的要求，均有相應(yīng)的最大允差，按照三角分布考慮，k=，由此估算相對不確定度分量，見表1。

表1 標(biāo)準(zhǔn)系列配制過程中量具校準(zhǔn)引起的不確定度表

草甘膦標(biāo)準(zhǔn)系列配制中引入的不確定度：

2.5 線性擬合得出質(zhì)量濃度的不確定度

草甘膦最小二乘法擬合標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度-峰面積結(jié)果，見表2。

表2 草甘膦最小二乘法擬合標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度-峰面積結(jié)果表

采取面粉提取液測試10加標(biāo)回收值，方程求得的平均質(zhì)量濃度為D1=21.18 ng /mL時(shí)，則D1的標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

式（2）中：

標(biāo)準(zhǔn)系列的平均濃度水平；

則X0的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

最小二乘法擬合氨甲基膦酸標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度-峰面積結(jié)果，見表3。

表3 最小二乘法擬合氨甲基膦酸標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度-峰面積結(jié)果表

本例中對面粉測定液進(jìn)行了10次加標(biāo)回收測定，由直線方程求得的平均質(zhì)量濃度為D2=27.16 ng/mL時(shí)，則X2的標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

式（3）中：

標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均濃度；

n為18；N為10次。

則X2的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

2.6 樣品制備

2.6.1 取樣

按SN/T 1923-2007的規(guī)定，準(zhǔn)確稱量至0.01 g，稱樣量為5.0 g，JJG 1036-2008《電子天平檢定規(guī)程》規(guī)定，兩次稱量天平不確定度：

2.6.2 定容體積的標(biāo)準(zhǔn)不確定度

稱取5 g樣品于100 mL離心管中，加入0.25 mL內(nèi)標(biāo)工作液，加入40 mL水、20 mL二氯甲烷，高速勻質(zhì)2 min，4 000 r/min離心5 min，取上清液于100 mL聚乙烯容量瓶中，殘?jiān)偌尤?0 mL水重復(fù)提取一次，合并上層水溶液并定容至100 mL，帶凈化。C18小柱用5 mL甲醇、10 mL水活化后加入上述水溶液，棄去1～2 mL初濾液后接收。準(zhǔn)確移取1.0 mL濾液與標(biāo)準(zhǔn)溶液一同加入200 μL 5%硼酸鹽緩沖液，混勻，加入200 μL 1.0 g/L的FMOC-Cl溶液，混勻，40 ℃下衍生化反應(yīng)，放置過夜，衍生后的溶液過濾膜，供超高相液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。

100 mL容量瓶校準(zhǔn)引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

1 mL刻度試管由校準(zhǔn)引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

1 000 μL移液器由校準(zhǔn)引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

1 000 μL移液器由校準(zhǔn)引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

2.6.3 樣品制備過程中的不確定度

2.7 復(fù)現(xiàn)性

同等條件下，對草甘膦試樣中所含含量進(jìn)行了10次獨(dú)立性檢測，結(jié)果見表4。

表4 草甘膦含量10次測定結(jié)果表

在同等條件下，對草甘膦樣品進(jìn)行10次檢測，其含量算數(shù)平均值為：

單次測定的標(biāo)準(zhǔn)偏差為：

算數(shù)平均值不確定度：

3 草甘膦各不確定度來源結(jié)果

草甘膦含量不確定度來源結(jié)果表，見表5。

表5 草甘膦含量不確定度來源結(jié)果表

3.1 合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度

面粉中草甘膦測量的合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度基于公式計(jì)算如下：

3.2 擴(kuò)展不確定度

試樣中草甘膦的擴(kuò)展不確定度的取K=2，擴(kuò)展不確定度為：

相對擴(kuò)展不確定度：

結(jié)果：當(dāng)K=2時(shí)，Y=(0.955 8±0.086 2)mg/kg

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)通過對面粉中草甘膦殘留量不確定度的來源進(jìn)行分析，并對各個(gè)分量進(jìn)行了精細(xì)的計(jì)算，從結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，由于實(shí)驗(yàn)需采取衍生法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，在衍生化的過程中，線性相關(guān)性的不確定來源相對較大，在同等條件下的復(fù)現(xiàn)性測試過程中所引起的不確定度次之。所以，通過草甘膦的不確定度的計(jì)算，可以促使在實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)該更加精細(xì)化、精準(zhǔn)化操作，使草甘膦殘留量的不確定度降低。此外，在實(shí)驗(yàn)過程中，草甘膦的不確定來源分析與結(jié)果，提示工作人員在操作過程相對復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)中，需操作人員的耐心與專業(yè)才能更好地完成實(shí)驗(yàn)?？偟膩碚f，本方法為更好地進(jìn)行食品中草甘膦殘留量的測定提供了有效的數(shù)據(jù)分析與結(jié)論。