◎ 黎 東

（南充市食品藥品檢驗所，江西 南充 637000）

隨著人們生活水平的提高，各種外形新奇、口味鮮美的食品成為市場主角。食品添加劑在食品生產(chǎn)加工中具有重要作用。GB 2760-2014中規(guī)定了2 000種以上的食品添加劑限量要求。山梨酸、苯甲酸、脫氫乙酸作為廣譜防腐劑，能抑制多種霉菌細菌生長繁殖。安賽蜜及糖精鈉是人工合成甜味劑，是糕點中常用的食品添加劑。一些廠商為改善口味，延長保質(zhì)期，常違規(guī)使用這些防腐劑與甜味劑，其對人體健康有不同程度的危害。為保證食品質(zhì)量安全，建立快速高效的檢測方法具有重要意義。

本文研究了液相色譜法測定食品中的5種添加劑的方法，探索了色譜條件對檢測結果的影響，建立了相應的檢測方法。研究結果：采用液相色譜法能同時定性定量分析食品中的山梨酸、苯甲酸、脫氫乙酸、糖精鈉、安賽蜜。測定條件：色譜柱ZORBAX SB-C18柱分離，甲醇∶0.02 mol/L乙酸銨溶液=5∶95為流動相，流速1.0 mL/min，紫外檢測波長為230 nm。5種添加劑為400 μg/mL時相關性良好。最小檢出限介于0.196～1.452 mg/kg。相對標準偏差＜5%，回收率＞90%，該方法檢測快捷高效，便于檢測人員對食品中5種添加劑含量情況作出快速判斷。

1 食品添加劑簡述

食品添加劑是為改善食品品質(zhì)，為防腐與加工工藝需要加入的人工或天然物質(zhì)。目前，我國食品添加劑有2 000多種。

防腐劑在食品加工中主要用于防止食品腐敗變質(zhì)，防腐劑超量使用會對人體產(chǎn)生毒副作用?？紤]到食品安全，食品防腐劑的定性定量檢測非常重要。國內(nèi)目前對食品防腐劑檢測為針對某一類食品的一種防腐劑進行檢測，而對超范圍添加的非法添加物不能有效檢測。目前，我國糧食損失約占10%，肉類食品損失在30%左右。食品帶菌嚴重，致使疾病蔓延。傳統(tǒng)食品保藏技術能夠延長食品保質(zhì)期，但破壞了食品營養(yǎng)成分。隨著能源的大量使用，產(chǎn)生了環(huán)境污染問題。防腐劑能有效延緩食品變質(zhì)，保護食品資源不受損失，保證食品在市面流通時不因微生物污染而危害人體健康。食品防腐劑能防止由微生物引起的腐敗變質(zhì)，兼有防止微生物繁殖引起食物中毒的作用。衛(wèi)生部頒布的《食品添加劑使用衛(wèi)生標準》嚴格規(guī)定了食品添加劑的添加范圍，為食品生產(chǎn)企業(yè)提供了食品生產(chǎn)技術規(guī)范，為保證食品添加劑的安全使用發(fā)揮了重要作用。嚴格遵循標準使用添加劑，會減輕微生物污染與營養(yǎng)不均衡的危害[1]。

人們對健康的要求越來越高，希望食品中的甜味劑盡可能低甚至為零。甜味劑指賦予食品或飼料以甜味，滿足人們對食品要求的食物添加劑。合格的甜味劑對人體沒有影響，但是長期攝入甜味劑會對人體產(chǎn)生危害。甜味劑應具備安全性高、穩(wěn)定性好、價格合理等特點。

食品樣品前處理是食品檢測的關鍵環(huán)節(jié)。高效快速的樣品制備與檢測技術研究成為現(xiàn)代分析化學的熱點之一。目前，食品添加劑檢測方法主要是色譜法，因為色譜方法成本低，易操作。

2 高效液相色譜法

液相色譜法最早出現(xiàn)于1903年，20世紀60年代，氣相色譜理論技術應用到液相色譜中。高效液相色譜法可以分析用氣相色譜難以分析的物質(zhì)，其應用范圍遠超氣相色譜。液相色譜檢測器具有多樣性，其基本原理為溶質(zhì)物理化學性質(zhì)與流動相有差異，在色譜圖上以色譜峰的形式記錄，當溶質(zhì)從色譜柱流出時，會導致流動相背景值發(fā)生變化。

高效液相色譜法采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑等流動相泵入色譜柱，由流動相帶入柱內(nèi)，各成分被分離后進入檢測器檢測。僅根據(jù)保留時間對未知樣品定性較為困難，僅靠色譜本身不能對未知的化合物進行定性，相應信號缺乏典型的分子結構特征，只能鑒定已知的化合物。

定量分析目的是求出樣品中被分析物的含量，組分在流動相中濃度與檢測器相應信號成正比。樣品中雜質(zhì)定量檢測方法，驗證需測定其準確性、精密性、線性等5個指標[2]。

3 檢測實驗

3.1 實驗材料與實驗方法

3.1.1 實驗材料

①實驗原料為市售飲料、調(diào)味品等。②實驗儀器包括安捷倫1260高效液相色譜儀，自動進樣器，PURELAB flex超純水機，高速冷凍離心機，超聲波清洗儀。③主要試劑包括甲醇、乙酸銨、乙酸鋅、亞鐵氰化鉀。標準樣品為苯甲酸、糖精鈉、山梨酸、脫氫乙酸（生產(chǎn)廠家德國Dr.Ehrenstorfer GmbH，純度=99.9%），安賽蜜（生產(chǎn)廠家德國Dr.Ehrenstorfer GmbH，純度=99%）。相關參數(shù)見表1。

表1 5種添加劑的相關計算數(shù)據(jù)表

3.1.2 標準溶液配制

①脫氫乙酸標準溶液。稱取脫氫乙酸標準品0.101 0 g，以NaOH溶液（20 g/L）溶解，得到濃度為1.0 mg/mL的脫氫乙酸標準溶液。②混合標準溶液。將含苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉等添加劑的溶液稀釋配制成待用混合標準溶液。③亞鐵氰化鉀溶液。在燒杯中取106 g亞鐵氰化鉀，轉(zhuǎn)移至1 000 mL容量瓶中，定容備用。④乙酸鋅溶液。在燒杯中稱取220 g乙酸鋅，轉(zhuǎn)移至1 000 mL容量瓶中，定容備用，0.02 mol/L。⑤乙酸銨溶液。稱取1.54 g乙酸銨，轉(zhuǎn)移至1 000 mL溶液瓶中，經(jīng)抽濾超聲波脫氣后備用。相關參數(shù)見表2。

表2 不同食品中5種添加劑參數(shù)表

3.1.3 色譜條件

色譜柱，ZORBAX SB-C18柱，檢測器掃描提取230 nm波長。柱溫30 ℃，甲醇-0.02 mol/L乙酸銨溶液。進樣量10 μL，流速1.0 mL/min。

3.1.4 樣品前處理

稱取5 g（精確至0.001 g）樣品至小燒杯中，轉(zhuǎn)移到50 mL的容量瓶中。3次清洗燒杯后將樣品置入容量瓶中。先后加入乙酸鋅及亞鐵氰化鉀3 mL，超聲波提取15 min，4 000 r/min離心5 min，吸取上清液濾膜至進樣瓶中待檢。

3.1.5 定性定量方法

將配制好的5種添加劑混合標準溶液稀釋至不同濃度。經(jīng)液相色譜分析，由出峰時間定性，峰面積為縱坐標，標準品濃度作為橫坐標制作標準曲線，計算目標樣品物含量為5 g[3]。

3.2 實驗結果

3.2.1 色譜柱的選擇

試驗考察了ZORBA× SB-C18（5 μm，4.6 mm×150 mm）液相色譜柱，ZORBA× SB-C18（5 μm，4.6 mm×150 mm）液相色譜柱色譜柱長分析時間長，色譜柱過短，導致5種添加劑分離不完全。最終選擇ZORBA×SB-C18柱（5 μm，4.6 mm×150 mm）進行實驗。

3.2.2 檢測波長的選擇

安捷倫1260高效液相色譜儀DAD二極管陣列檢測器可全波長掃描目標化合物。將波長設置在190～400 nm，最終確定5種食品添加劑檢測波長為230 nm。

3.2.3 流動相的優(yōu)化

甲醇-0.02 mol/L乙酸銨溶液為流動相，（甲醇 ∶ 乙 酸 銨 溶 液 =80∶ 20、85∶ 15、90∶ 10、5∶95），最終確定甲醇乙酸銨溶液為5∶95時5種添加劑分離效果最好。

3.2.4 標準曲線與線性范圍

繪制標準曲線，以檢測結果的3倍信噪比計算檢出限80%。該方法比中國國家液相色譜法標準有更高的靈敏度。

3.2.5 加標回收實驗精密度

選取糕點、飲料為檢測對象，作加標回收實驗。采用該方法檢測以上基質(zhì)均有良好的回收率，相對標準偏差（n=6）值均小于7%。該方法具有較高的精密度及較廣泛的適用范圍。

3.2.6 基質(zhì)適用性分析

選用市售飲料等具有代表性的食品樣品進行防腐劑和甜味劑檢測，可同時檢測多種類型樣品中的防腐劑和甜味劑。

3.3 實驗討論

提取需確定所有目標分析物在分層提取中的分配系數(shù)，確保目標分析物在液液萃取時有較高回收率。將防腐劑、甜味劑標準品混合溶液加入互不溶的溶劑中，用液相色譜檢測不互溶防腐劑含量，檢測各萃取溶劑中目標分析物濃度比，估算防腐劑和甜味劑溶劑分配。利用亞鐵氰化鉀和乙酸鋅溶液除去食品基質(zhì)中的蛋白質(zhì)雜質(zhì)，發(fā)現(xiàn)對防腐劑和甜味劑的回收率影響不大。

4 結論

本實驗建立了同時檢測多類型食品中苯甲酸、安賽蜜、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸的方法。采用ZORBAX SB-C18柱（5 μm，4.6 mm×150 mm）分析，流動相為甲醇∶乙酸銨溶液（0.02 moL/L）=5∶95，流速為1.0 mL/min，230 nm波長下檢測，該方法檢測食品類別涵蓋范圍較廣，具有經(jīng)濟高效安全等特點，能同時檢測不同食品中的防腐劑和甜味劑。