楊士杰，占軍平

（1.宜春學(xué)院生命科學(xué)與資源環(huán)境學(xué)院，江西 宜春 336000；2.江西新龍生物科技股份有限公司，江西 宜春 336000）

化學(xué)農(nóng)藥的頻繁與無節(jié)制使用，會(huì)造成農(nóng)副產(chǎn)品農(nóng)藥殘留污染，對(duì)人類身體健康構(gòu)成潛在威脅；導(dǎo)致病蟲草產(chǎn)生抗藥性，增加農(nóng)業(yè)生產(chǎn)成本[1]等。因此，科學(xué)選用農(nóng)藥、正確使用農(nóng)藥備受人們的關(guān)注[2]。

戊唑醇（tebuconazole） 為一種羥乙基三唑衍生物，屬三唑類內(nèi)吸性殺菌劑，是20世紀(jì)80年代德國拜耳公司最早開發(fā)的一種殺菌劑。20世紀(jì)60年代末，德國拜耳公司和比利時(shí)Janssen公司報(bào)道了1-取代唑類衍生物對(duì)植物病原菌的高度抑制活性并開發(fā)出系列的N-三苯甲基唑類衍生物后，有關(guān)人員對(duì)三唑類殺菌劑產(chǎn)生了極大興趣，并引起了不斷關(guān)注；之后拜耳公司研發(fā)人員還發(fā)現(xiàn)三唑類的生物活性可以保持不變或者得到提高，隨后相關(guān)研究人員合成了具有高效、低毒、廣譜等特點(diǎn)的包括戊唑醇在內(nèi)的三唑類化合物，目前三唑類殺菌劑的產(chǎn)品數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了以往任何一種殺菌劑[3]。戊唑醇具有保護(hù)、治療、鏟除三大功能[4，5]，對(duì)谷物、果樹、蔬菜和其他一些重要經(jīng)濟(jì)作物上由擔(dān)子菌、半知菌和子囊菌引起的主要病害有較好的治療與鏟除作用，而且用量低[6，7]。

許多學(xué)者對(duì)戊唑醇的田間防病效果進(jìn)行了研究。王瑋等[8]研究表明，43%戊唑醇SC對(duì)辣椒菌核病的防治效果優(yōu)于50%速克靈WP和甲基硫菌靈WP?？紫橛⒌萚9]在小麥上的研究顯示，戊唑醇能較好地防治小麥赤霉病，且不干擾小麥的安全生長(zhǎng)，可以作為防治小麥病害的替代藥物種類。周建輝等[10]發(fā)現(xiàn)，用戊唑醇拌種對(duì)小麥紋枯病具有明顯的防治效果，且藥效比較持久，對(duì)小麥生長(zhǎng)安全。盧方林等[11]采用2%戊唑醇濕拌劑15 g拌小麥種子10 kg的劑量進(jìn)行了小麥主要病害的防效示范試驗(yàn)，結(jié)果顯示，對(duì)小麥紋枯病、銹病、散黑穗病、全蝕病的防治效果分別為75.79%、63.05%、45.60%和73.60%。王克龍[12]分別在4月23日（小麥銹病發(fā)生初期） 和31日2次施藥，研究了430 g/L戊唑醇懸浮劑第2次施藥后第10天對(duì)小麥銹病的防治效果，結(jié)果表明，戊唑醇的防效隨著施藥劑量的增加而逐漸提高，96.75～129.00 g.a.i/hm2劑量處理的防效為92.80%～98.47%，其中，129.00 g.a.i/hm2劑量處理的防效極顯著優(yōu)于其他劑量處理，而96.75和112.9 g.a.i/hm2劑量處理的防效與對(duì)照處理（20%三唑酮乳油180 g.a.i/hm2，防效94.13%）差異不顯著，且試驗(yàn)劑量條件下均對(duì)小麥生長(zhǎng)安全。紀(jì)祥龍等[13]在花生上的研究結(jié)果顯示，25%戊唑醇可濕性粉劑可有效控制花生白絹病的發(fā)生，明顯提高花生產(chǎn)量。張彩萍[14]研究了戊唑醇等4種抗真菌藥劑對(duì)桑椹菌核病的防治效果，發(fā)現(xiàn)430 g/L戊唑醇懸浮劑3 000倍稀釋藥液對(duì)桑椹菌核病的防治效果最好，校正防效可以達(dá)到95.74%。劉剛[15]在使用43%戊唑醇SC 2 000倍液和40%氟硅唑EC 6 000倍液等防治采果期枸杞炭疽病時(shí)發(fā)現(xiàn)，只有戊唑醇藥劑符合高效、低殘留農(nóng)藥的篩選標(biāo)準(zhǔn)，可用于采果期枸杞炭疽病的防治。

隨著戊唑醇使用年份的增長(zhǎng)，不少病原菌對(duì)其產(chǎn)生了抗藥性。為了了解江西省宜春市一些作物主要病害病菌對(duì)戊唑醇的敏感性，以辣椒菌核病菌、番茄綿腐病菌和蘋果青霉菌為研究對(duì)象，測(cè)試了戊唑醇的抑菌效果，旨為更好地指導(dǎo)當(dāng)?shù)剞r(nóng)業(yè)生產(chǎn)合理、規(guī)范地使用農(nóng)藥。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 菌株 2016年在宜春市郊蔬菜種植基地，從感菌核病的辣椒和感綿腐病的番茄上采集病菌樣品，在室內(nèi)進(jìn)行單孢分離純化，分別得到辣椒菌核病菌和番茄綿腐病菌的單孢菌株；在水果批發(fā)市場(chǎng)，從感青霉菌的蘋果上采集病菌樣品，在室內(nèi)進(jìn)行單孢分離純化，得到蘋果青霉菌的單孢菌株。以上菌株通過斜面（坡度4°） 和濾紙片法，低溫（-20℃） 保存在宜春學(xué)院植物保護(hù)實(shí)驗(yàn)室。

1.1.2 藥劑和培養(yǎng)基 97%戊唑醇原藥：湖北康寶泰精細(xì)化工有限公司生產(chǎn)。原藥用丙酮溶解，配制成1×104μg/mL的母液，置4℃冰箱中保存，備用。

PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂15～20 g，蒸餾水 1 000 mL。

1.1.3 儀器及常用器皿 YXQ-LS-50 SII型滅菌器：上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠生產(chǎn)；SW-CJ-2F型雙人雙面超凈工作臺(tái)：蘇州凈化設(shè)備有限公司生產(chǎn)；250B型生化培養(yǎng)箱：蘇州威爾實(shí)驗(yàn)用品有限公司生產(chǎn)；BCD-539WT冰箱：青島海爾股份有限公司生產(chǎn)；ME204G電子天平：梅特勒-托利多儀器-上海有限公司生產(chǎn)；鑷子、挑針、打孔器、接種環(huán)、電爐、三角瓶、封口膜、直尺等。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 含藥培養(yǎng)基的制備 取戊唑醇母液，先用少量丙酮溶解，然后用蒸餾水分別稀釋成0.01、0.1、1、5、10和100 μg/mL的藥液。置于45℃的PDA培養(yǎng)基中，制成梯度含藥平板。

1.2.2 抑菌效果的測(cè)定 采用菌絲生長(zhǎng)速率法[16]，測(cè)定戊唑醇對(duì)番茄綿腐病菌、蘋果青霉菌和辣椒菌核病菌的抑制效果。

在新鮮的供試病菌菌落邊緣打取直徑6 mm的菌餅，接種于含藥培養(yǎng)基平板的中央，試驗(yàn)藥劑濃度設(shè) 0.01、0.1、1、5、10 和 100 μg/mL 計(jì) 6 個(gè)處理，以不加藥劑的培養(yǎng)基平板為空白對(duì)照。在23℃黑暗條件下培養(yǎng)72 h，測(cè)量菌落直徑。根據(jù)公式，計(jì)算抑菌率：

利用DPS軟件，分別求出戊唑醇對(duì)番茄綿腐病菌、蘋果青霉菌和辣椒菌核病菌的毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)（r）和有效抑制中濃度（EC50）。依據(jù)紀(jì)明山等[17]的敏感基線值判別菌株的抗性水平，其中，EC50＜0.45 μg/mL時(shí)為敏感菌株，0.45 μg/mL≤EC50＜0.90 μg/mL 時(shí)屬中抗菌株，EC50≥0.90 μg/mL時(shí)為高抗菌株。

2 結(jié)果與分析

2.1 戊唑醇對(duì)3種病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制效果

不同濃度的戊唑醇均可抑制病菌菌絲的生長(zhǎng)，抑菌率基本隨藥劑濃度的提高而逐漸提高（圖1）。方差分析結(jié)果（表1）顯示，藥劑濃度對(duì)抑菌率的影響達(dá)到了極顯著水平。對(duì)不同濃度戊唑醇的抑菌率進(jìn)行多重比較，結(jié)果（表2） 顯示，戊唑醇10與100 μg/mL濃度處理的抑菌率差異不顯著，但二者指標(biāo)值均顯著＞其他濃度處理，其中，與≤1 μg/mL濃度處理的指標(biāo)值差異均達(dá)到了極顯著水平。表明戊唑醇使用濃度為10和100 μg/mL時(shí)抑菌效果較好，且二者對(duì)病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制效果基本相當(dāng)。

圖1 戊唑醇對(duì)番茄綿腐病菌、蘋果青霉菌和辣椒菌核病菌的抑菌率Fig.1 The inhibition rate of tebuconazole on the Pythium aphanidermatum，Penicillium sp.and Sclerotinia sclerotiorum

方差分析結(jié)果顯示，菌種對(duì)抑菌率的影響達(dá)到了顯著水平。表明戊唑醇對(duì)番茄綿腐病菌、蘋果青霉菌和辣椒菌核病菌的抑制效果存在顯著差異。對(duì)不同菌種的抑菌率進(jìn)行多重比較，結(jié)果（表3）顯示，戊唑醇對(duì)蘋果青霉菌的抑菌率明顯較高，而對(duì)辣椒菌核病菌與番茄綿腐病菌的抑菌率差異不顯著。

表1 抑菌率的方差分析Table 1 Analysis of variance of inhibition rate

表2 不同濃度間的抑菌率多重比較Table 2 Multiple comparisons of inhibition rate between different concentrations

表3 不同菌種間的抑菌率多重比較Table 3 Multiple comparisons of inhibition rate between different strains

使用濃度為0.01～10 μg/mL時(shí)，相同濃度條件下，戊唑醇對(duì)蘋果青霉菌的抑制效果明顯較高，對(duì)其他2種病菌的抑菌率比較接近，其中，0.01 μg/mL濃度處理時(shí)對(duì)蘋果青霉菌的抑菌率是番茄綿腐病菌和辣椒菌核病菌的2倍以上，1 μg/mL濃度處理時(shí)對(duì)3種病菌的抑菌率均＞60%；使用濃度為100 μg/mL時(shí)，對(duì)3種病菌的抑菌率均＞90%，表現(xiàn)出明顯的抑制作用，其中，對(duì)辣椒菌核病菌的抑菌率較高，對(duì)其他2種病菌的抑菌率基本相當(dāng)。

綜上分析可以看出，不論是低濃度條件下還是從總體情況看，均表現(xiàn)為戊唑醇對(duì)蘋果青霉菌的抑制效果最好。

2.2 3種病原菌對(duì)戊唑醇的敏感性分析

番茄綿腐病菌、蘋果青霉菌和辣椒菌核病菌的EC50為 0.030 0～0.230 0 μg/mL，均＜敏感菌株的 EC50（0.455 μg/mL），指標(biāo)值順序?yàn)樘O果青霉菌＜番茄綿腐病菌＜辣椒菌核病菌（表4）。表明番茄綿腐病菌、蘋果青霉菌和辣椒菌核病菌均對(duì)戊唑醇敏感，其中，蘋果青霉病菌的敏感性更強(qiáng)，而番茄綿腐病菌和辣椒菌核病菌對(duì)戊唑醇的敏感性均相對(duì)較弱且差異不大。

表4 番茄綿腐病菌、蘋果青霉菌和辣椒菌核病菌對(duì)戊唑醇的敏感性分析Table 4 Sensitivity analysis of P.aphanidermatum,Penicillium sp.and S.sclerotiorum to tebuconazole

3 結(jié)論與討論

戊唑醇懸浮劑是一種高效、低毒殺菌劑。本研究結(jié)果表明，戊唑醇在較低使用濃度（≤10 μg/mL） 時(shí)對(duì)蘋果青霉菌的抑制效果明顯優(yōu)于對(duì)辣椒菌核病菌和番茄綿腐病菌的抑制效果，使用濃度為100 μg/mL時(shí)對(duì)3種病菌菌絲生長(zhǎng)均具有明顯的抑制效果。

低濃度時(shí)戊唑醇對(duì)蘋果青霉菌的抑制效果優(yōu)于其他2種病菌，原因之一可能是生產(chǎn)中農(nóng)民使用戊唑醇防治貯藏期蘋果青霉病的次數(shù)較少，因此，蘋果青霉菌對(duì)低濃度的戊唑醇就表現(xiàn)得比較敏感；而用于防治番茄綿腐病和辣椒菌核病的次數(shù)相對(duì)較多，2種病菌對(duì)戊唑醇藥劑產(chǎn)生了抗藥性，導(dǎo)致番茄綿腐病菌和辣椒菌核病菌對(duì)低濃度的戊唑醇敏感性相對(duì)下降。

本研究條件下，不同濃度的戊唑醇均對(duì)番茄綿腐病菌、辣椒菌核病菌和蘋果青霉菌菌絲生長(zhǎng)具有抑制作用，其中，對(duì)蘋果青霉菌的抑菌效果最好。在實(shí)際生產(chǎn)中可以選用戊唑醇進(jìn)行蘋果青霉菌的防治，使用濃度10 μg/mL即可產(chǎn)生明顯的防治效果。