賈一賓，祖衛(wèi)東

(商丘市中心血站，商丘 476100)

隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，輸血已經(jīng)在出血性疾病、手術(shù)、創(chuàng)傷及糾正慢性貧血等的治療中都發(fā)揮著不可替代的作用，是挽救患者生命的重要治療手段。目前，輸血安全管理受到廣大醫(yī)務(wù)工作者的重視，通過交叉配血、免疫合血以及信息比對等措施，溶血性輸血反應(yīng)已經(jīng)大幅度降低[1，2]。但值得注意的是，非溶血性輸血反應(yīng)仍然是臨床導(dǎo)致患者輸血反應(yīng)甚至致死的主要原因之一。有研究報(bào)道[3，4]，非溶血性輸血反應(yīng)和供血者血液中人類白細(xì)胞抗原(HLA)抗體密切相關(guān)，且對有生育史的婦女，體內(nèi)產(chǎn)生HLA的幾率較高，其血液不可直接用于臨床輸血。近期，我們對商丘市無償獻(xiàn)血人群中HLA抗體分布進(jìn)行了調(diào)查，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取商丘市2016年無償獻(xiàn)血者200例為研究對象。其中有男性獻(xiàn)血者60例，年齡18～55 歲，平均年齡（25.5±4.0）歲；有女性無償獻(xiàn)血者140例，其中未生育女性64例，年齡18～30歲，平均年齡（24.6±2.7）歲；已生育女性 76 例，年齡25～55 歲，平均年齡（25.8±4.3 歲）。

1.2 試劑和儀器 本研究所采用的HLA試劑盒購買自美國One Lambda公司抗體篩選試劑(LSM12，LABScreen Mixed，Lot021)，該試劑盒能夠同時(shí)檢測HLA-Ⅰ類、Ⅱ類抗體。

1.3 檢測方法 抽取所有入選的體檢者靜脈血3～5ml，置于EDTA抗凝管中，3000r/min離心10min，分離出血漿，-20℃待用。試驗(yàn)原理為試劑盒中磁珠包被有HLA-Ⅰ類、Ⅱ型號糖蛋白，于血漿孵育后可以結(jié)合血漿中的HLA抗體，然后和藻紅蛋白節(jié)后抗人IgG抗體，通過儀器比對，判斷結(jié)果。具體操作如下：96 孔板中加入 2μl磁珠，14μl PBS，7μl血漿樣本，充分混勻后在室溫條件下避光孵育30min。然后加入180μl的洗液，充分混勻后在水平離心機(jī)上離以3500r/min離心5min。待磁珠沉在96孔板孔底部，則棄去上清液。連續(xù)2次后，加入50μl二抗，充分混勻，室溫條件下避光孵育30min，棄上清液，用洗液清晰3次。最后加入PBS 50μl并充分混勻，在酶標(biāo)儀上讀板。

1.4 觀察指標(biāo) 觀察比較三類獻(xiàn)血者(男性、未育女性和已育女性)的HLA分布情況和特異性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理，計(jì)量資料均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s），計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，如有理論T值＜5則使用校正χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三類無償獻(xiàn)血者HLA抗體分布情況比較 在全部200例獻(xiàn)血者中，HLA抗體陽性主要分布在已育女性人群中。已育女性HLA抗體陽性率顯著高于未育女性和男性，且以HLA-Ⅰ類抗體為主，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

2.2 HLA-Ⅰ類抗體特異性分析 由表1可知，本研究中共有HLA-Ⅰ類抗體陽性者22例 (包含HLA-Ⅰ/Ⅱ同時(shí)陽性者)，一般均以多種HLA-Ⅰ類抗混合存在為主。HLA-Ⅰ類抗體出現(xiàn)頻率較高的是 A*11、23、02、04，B*07、27、40、81、15 以 及Cw*07。見表2。

2.3 HLA-II類抗體特異性分析 由表1可知，本研究中共有HLA-II類抗體陽性者9例 (包含HLA-Ⅰ/Ⅱ同時(shí)陽性者)，一般均以多種HLA-II類抗混合存在為主。HLA-II類抗體出現(xiàn)頻率較高的是DRB1*04、02、03、01，DQB1*06、02、01 和 DPB1*04、03。 見表3。

3 討論

在醫(yī)療界高度重視用血安全的現(xiàn)在，非溶血性輸血反應(yīng)已經(jīng)成為臨床安全用血的重大隱患，造成輸血不良反應(yīng)，嚴(yán)重者可導(dǎo)致相關(guān)急性肺損傷等并發(fā)癥，直接威脅患者生命安全。HLA抗體是引起輸血相關(guān)急性肺損傷的主要原因之一，研究證實(shí)65～90%的HLA抗體陽性獻(xiàn)血者血液可引起受血者相關(guān)急性肺損傷的發(fā)生[5]。HLA是目前所知人體最復(fù)雜的多態(tài)系統(tǒng)，是具有高度多態(tài)性的同種異體抗原，其化學(xué)本質(zhì)為一類糖蛋白，按其分布和功能分為Ⅰ類抗原和Ⅱ類抗原。有研究證實(shí)[6，7]，已育女性獻(xiàn)血者HLA抗體出現(xiàn)的頻率較高，會增加臨床用血的HLA同種免疫的風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)對HLA抗體陽性者的血液進(jìn)行去血漿和去血小板處理。Triulzi等人[8]也認(rèn)為妊娠、生育過程就是一次免疫刺激，會導(dǎo)致孕婦體內(nèi)有高含量的HLA抗體，且抗體濃度和患者妊娠次數(shù)呈正相關(guān)，此類抗體進(jìn)入受血這體內(nèi)后會導(dǎo)致HLA同種免疫，誘發(fā)非溶血性輸血反應(yīng)。

表1 三類無償獻(xiàn)血者HLA抗體分布情況比較

表2 24例HLA-Ⅰ類抗體陽性獻(xiàn)血者HLA-Ⅰ類抗體特異性分析

表3 HLA-II類抗體特異性分析

臨床用血不僅要加強(qiáng)交叉配血等常規(guī)檢查，也要加強(qiáng)HLA抗體檢測。本研究選取2016年的200例獻(xiàn)血人群，并進(jìn)行了HLA抗體篩查，結(jié)果表明已育女性HLA抗體陽性率顯著高于未育女性和男性，且以HLA-Ⅰ類抗體為主，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。據(jù)報(bào)道[9]，歐美發(fā)達(dá)國家已經(jīng)制定了相關(guān)規(guī)章制定，要求醫(yī)療機(jī)構(gòu)在進(jìn)行輸血治療時(shí)有限使用女性獻(xiàn)血者血液，我國尚無相關(guān)規(guī)定。在本研究中，未育女性和男性獻(xiàn)血者中也有個(gè)別HLA抗體陽性者，這可能和環(huán)境中HLA抗原和機(jī)體HLA抗原表位具有一定相似度，從而導(dǎo)致的交叉反應(yīng)刺激，導(dǎo)致HLA抗體產(chǎn)生，但這種現(xiàn)象是少見的，發(fā)生率較低[10]。根據(jù)HLA抗體產(chǎn)生的原因可知，多次輸血者體內(nèi)也會產(chǎn)生HLA抗體，但本研究未選取有輸血史患者，有待進(jìn)一步研究。HLA抗原和種族、遺傳等因素有關(guān)，因此不同區(qū)域HLA的特異性也有所不同[11]，而高發(fā)的HLA抗原可誘發(fā)高發(fā)抗體。我們根據(jù)本地區(qū)獻(xiàn)血者血小板HLA基因庫，將基因頻率在0.02以上的認(rèn)為是常見基因。我們發(fā)現(xiàn)本地區(qū) HLA-I類抗體以 A*11、23、02、04，B*07、27、40、81、15 以及 Cw*07 多見；HLA-II類抗體以DRB1*04、02、03、01，DQB1*06、02、01 和 DPB1*04、03常見。

綜上所述，本地區(qū)已育女性獻(xiàn)血者HLA抗體頻率較高，要加強(qiáng)對已育女性獻(xiàn)血者血液篩選，排除其血漿和血小板成分，加強(qiáng)臨床用血安全。