呂愛(ài)婷，馮迎軍，孫琪青，候維納

(鄭州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院血管內(nèi)科，河南 鄭州 450000)

病毒性心肌炎(viral myocarditis，VM)是臨床常見(jiàn)心血管疾病，在所有年齡段中均有發(fā)病，在兒童以及青少年中發(fā)病率最高[1]。有調(diào)查顯示，近年來(lái)VM發(fā)病年齡呈下降趨勢(shì)，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量[2]。部分患兒癥狀較嚴(yán)重，可進(jìn)一步發(fā)展為擴(kuò)張型心肌病、心律失常等，預(yù)后不良。目前，關(guān)于VM的發(fā)病機(jī)制尚無(wú)統(tǒng)一定論，其發(fā)生與多種因素有關(guān)。有研究顯示，凋亡相關(guān)蛋白(factor associated suicide，F(xiàn)as)/凋亡相關(guān)蛋白配體(factor associated suicide ligand，F(xiàn)asL)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡是心肌損傷的重要機(jī)制[3]。近年來(lái)較多研究發(fā)現(xiàn)，微小RNA(micro RNA，miR)與細(xì)胞增殖、分化、凋亡、氧化應(yīng)激有關(guān)，能夠特異結(jié)合靶基因3′非翻譯區(qū)進(jìn)而調(diào)控基因的表達(dá)。關(guān)于miR-98在心肌梗死、哮喘等疾病中的作用均有研究，其表達(dá)水平的異常與疾病的發(fā)生密切相關(guān)，但在VM中的研究較少[4]。本研究通過(guò)檢測(cè)VM患兒外周血中miR-98的表達(dá)，分析其與Fas/FasL的關(guān)系，探究VM的發(fā)生機(jī)制，并通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證miR-98在VM發(fā)病中的作用。

1 資料與方法

1.1一般資料選擇2015年9月至2017年7月鄭州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院收治的VM患兒62例作為研究對(duì)象(VM組)，病程1～3(1.04±0.23)個(gè)月，患兒均符合VM診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡≤12歲；患兒監(jiān)護(hù)人知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：患有肺、腎、肝以及血液系統(tǒng)等原發(fā)性疾??；擴(kuò)張型心肌病患兒；近1個(gè)月內(nèi)服用阿奇霉素等。根據(jù)左心室射血分?jǐn)?shù)(left ventricular ejection fraction，LVEF)及心肌肌鈣蛋白(cardiac troponinI，cTnI)水平，將VM組患兒分為輕度組(EF≥50%，cTnI<0.1 μg·L-1或正常)和重度組(EF<50%，cTnI>0.2 μg·L-1或正常)。輕度組38例，男20例，女18例；年齡 1～12(5.42±1.16)歲；重度組24例，男14例，女10例；年齡 1～12(5.69±1.34)歲。另選取同期體檢健康的56例兒童作為對(duì)照組，其中男30例，女26例；年齡3～11(5.14±0.93)歲。3組受試者的性別、年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2血液樣本收集所有研究對(duì)象在清晨空腹?fàn)顟B(tài)下于肘部曲側(cè)采集靜脈血3 mL，3 000 r·min-1離心10 min，取血清，置于-20 ℃冰箱保存。

1.3主要試劑與儀器人心肌細(xì)胞(human cardiac myocytes，HCM)購(gòu)自美國(guó)Sciencell公司，H9C2心肌細(xì)胞來(lái)源于乳鼠胚胎期心肌組織，RNA提取試劑盒購(gòu)于日本TaKaRa公司，RNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)于美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司，二喹啉甲酸(bicinchoninic acid，BCA)試劑盒、聚偏二氟乙烯(polyvinylidene fluoride，PVDF)膜、TBST緩沖液購(gòu)于美國(guó)BD公司，3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽[3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyltetrazolium bromide，MTT]、二甲基亞楓(dimethyl sulfoxide，DMSO)、碘化丙啶(propidium iodide，PI)購(gòu)于美國(guó)Sigma公司；實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR)儀購(gòu)于美國(guó)Bio-Rad公司。

1.4實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1qRT-PCR檢測(cè)3組受試者外周血中miR-98及Fas、FasLmRNA表達(dá)采用RNA提取試劑盒提取3組受試者外周血總RNA，將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。Fas上游引物序列為5′-AAAAACTGGGGCTGCCCTTA-3′，下游引物序列為5′-CTTTGTGGGGGATGGAACAA-3′；FasL上游引物序列為5′-ACTACCGCCACCACCTCTGA-3′，下游引物序列為5′-GGCCACCAGAACCATGAAAA-3′。miR-98上游引物序列為5′-CGGCTGAGGTAGTAGATTGT-3′，下游引物序列為5′-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTC-3′。β-actin上游引物序列為5′-GAGGGAAATCGTGCGTGAC-3′，下游引物序列為5′-CTGGAAGGTGGACAGTGAG-3′。U6上游引物序列為5′-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3′，下游引物序列為5′-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3′。反應(yīng)體系共20 μL：2×SYBR Green Mix 10 μL，H2O 8 μL，10×cDNA模板1 μL，上下游引物各 0.5 μL。反應(yīng)程序?yàn)椋?5 ℃變性5 min，95 ℃ 15 s、60 ℃ 20 s，72 ℃ 1 min，35個(gè)循環(huán)，72 ℃延伸10 min。以U6作為內(nèi)參基因在CFX manager 軟件上按照2-ΔΔCt算法分析miR-98相對(duì)表達(dá)量，以β-actin作為內(nèi)參基因分析Fas、FasL mRNA相對(duì)表達(dá)量。

1.4.2Westernblot檢測(cè)3組受試者外周血中Fas、FasL蛋白表達(dá)在外周血中加入蛋白裂解液放置冰上反應(yīng)30 min，離心后收集上清提取總蛋白，BCA試劑盒測(cè)定蛋白濃度，分別制備體積分?jǐn)?shù)8.0%、12.5%的分離膠與濃縮膠，統(tǒng)一上樣30 μg蛋白，蛋白樣品進(jìn)入濃縮膠時(shí)電壓為80 V，進(jìn)入分離膠后，電壓升高至120 V，電泳結(jié)束后切除目的條帶蛋白凝膠并轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，置于冰上進(jìn)行轉(zhuǎn)膜反應(yīng)，電壓設(shè)置為100 V，反應(yīng)時(shí)間為1 h，加入TBST清洗3次，加入體積分?jǐn)?shù)5%脫脂牛奶封閉 1 h，TBST清洗后加入Fas、FasL一抗稀釋液(1500)，4 ℃震蕩過(guò)夜，TBST清洗3次，加入二抗稀釋液(110 000)，室溫下孵育2 h，TBST清洗后在凝膠成像儀中觀察蛋白表達(dá)情況。

1.4.3細(xì)胞分組及處理HCM、H9C2心肌細(xì)胞在含有體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清的達(dá)爾伯克改良伊格爾培養(yǎng)基中于37 ℃、體積分?jǐn)?shù)5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期HCM、H9C2心肌細(xì)胞接種至35 mm培養(yǎng)皿，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至培養(yǎng)皿底面積80%時(shí)進(jìn)行分組。將細(xì)胞分為空白組、陰性轉(zhuǎn)染組和miR-98 轉(zhuǎn)染組，空白組細(xì)胞不做任何處理，陰性轉(zhuǎn)染組細(xì)胞轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照小干擾RNA(small interfering RNA，siRNA)(序列為5′-CAGUACUUUUGUGUAGUACAA-3′)，miR-98轉(zhuǎn)染組細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-98 siRNA(序列為5′-AACAAUACAACUUACUACCUCA-3′)。轉(zhuǎn)染后室溫靜置20 min，加入細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，置于 37 ℃、體積分?jǐn)?shù)5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h。

1.4.4MTT法檢測(cè)HCM、H9C2心肌細(xì)胞增殖情況收集轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)48 h的各組細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為1×107L-1接種至細(xì)胞培養(yǎng)板，置于37 ℃、體積分?jǐn)?shù)5%CO2培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng)12、24、48、72 h，培養(yǎng)結(jié)束后加入10 μL MTT孵育4 h，加入100 μL DMSO溶液，在570 nm處測(cè)吸光度。細(xì)胞抑制率=(轉(zhuǎn)染組吸光度-空白吸光度)/空白吸光度×100%。

1.4.5HCM、H9C2心肌細(xì)胞中miR-98及Fas、FasL蛋白表達(dá)參照“1.4.1、1.4.2項(xiàng)”檢測(cè)miR-98及Fas、FasL蛋白表達(dá)的方法進(jìn)行操作。

1.4.6平板細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HCM、H9C2心肌細(xì)胞克隆形成能力將轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)48 h的細(xì)胞置于培養(yǎng)皿中培養(yǎng)7 d后，加入固定劑(甲硫醇冰醋酸=71)反應(yīng)15 min，隨后加入含質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1%結(jié)晶紫的體積分?jǐn)?shù)20%甲醇溶液染色 25 min，拍照并計(jì)算細(xì)胞克隆數(shù)量。以直徑大于 50 μm作為1個(gè)克隆。

1.4.7流式細(xì)胞儀檢測(cè)HCM、H9C2心肌細(xì)胞凋亡情況收集轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)48 h的HCM、H9C2心肌細(xì)胞，加入2.5 g·L-1胰蛋白酶消化細(xì)胞，收集細(xì)胞后采用預(yù)冷磷酸緩沖鹽溶液(phosphate buffer saline，PBS)清洗，加入體積分?jǐn)?shù)70%乙醇溶液固定1 h，PBS清洗細(xì)胞后，空白組加100 μL DMSO溶液，miR-98轉(zhuǎn)染組、陰性轉(zhuǎn)染組加100 μL DMSO和20 μL PI，37 ℃避光反應(yīng)20 min，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。

2 結(jié)果

2.1VM組和對(duì)照組兒童外周血中miR-98及Fas、FasLmRNA表達(dá)結(jié)果見(jiàn)表1。VM組患兒外周血中miR-98相對(duì)表達(dá)量低于對(duì)照組，F(xiàn)as、FasL mRNA表達(dá)量高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。重度組患兒外周血中miR-98相對(duì)表達(dá)量低于輕度組，F(xiàn)as、FasL mRNA相對(duì)表達(dá)量高于輕度組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2VM組和對(duì)照組兒童外周血中Fas、FasL蛋白表達(dá)情況結(jié)果見(jiàn)圖1、圖2、表2。VM組患兒外周血中Fas、FasL蛋白相對(duì)表達(dá)量高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。重度組患兒外周血中Fas、FasL蛋白相對(duì)表達(dá)量高于輕度組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1VM組和對(duì)照組兒童外周血中miR-98及Fas、FasLmRNA表達(dá)比較

組別nmiR-98Fas mRNAFasL mRNA對(duì)照組561.00±0.161.08±0.071.00±0.06VM組620.59±0.08a1.34±0.21a1.52±0.18a 輕度組240.67±0.121.18±0.131.12±0.17 重度組380.46±0.06b1.63±0.27b1.77±0.26b

注：與對(duì)照組比較aP<0.05；與輕度組比較bP<0.05。

圖1VM組和對(duì)照組兒童外周血中Fas和FasL蛋白表達(dá)(Westernblot)

Fig.1ExpressionofFasandFasLproteininperipheralbloodofchildrenintheVMgroupandcontrolgroup(Westernblot)

圖2輕度組和重度組患兒外周血中Fas及FasL蛋白表達(dá)(Westernblot)

Fig.2ExpressionofFasandFasLproteininperipheralbloodofchildreninthemildgroupandseveregroup(Westernblot)

表2VM組和對(duì)照組兒童外周血中Fas及FasL蛋白表達(dá)比較

組別nFas蛋白FasL蛋白對(duì)照組561.00±0.091.00±0.13VM組621.46±0.18a1.52±0.14a 輕度組241.13±0.161.18±0.09 重度組381.67±0.28b1.71±0.23b

注：與對(duì)照組比較aP<0.05；與輕度組比較bP<0.05。

2.3VM患兒外周血miR-98與Fas、FasL蛋白表達(dá)的相關(guān)性Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，VM患兒外周血miR-98與Fas、FasL均呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-516、-463，P<0.05)；見(jiàn)圖3。

圖3VM患兒外周血miR-98與Fas、FasL的相關(guān)性

Fig.3CorrelationbetweenmiR-98andFas，F(xiàn)asLinperipheralbloodofVMpatients

2.4轉(zhuǎn)染后HCM、H9C2心肌細(xì)胞克隆形成情況結(jié)果見(jiàn)圖4和表3。miR-98轉(zhuǎn)染組HCM、H9C2心肌細(xì)胞克隆數(shù)量低于空白組和陰性轉(zhuǎn)染組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

圖4各組HCM、H9C2心肌細(xì)胞克隆形成情況

Fig.4ColonyformationofHCMandH9C2cardiaccellsineachgroup

表3各組HCM和H9C2心肌細(xì)胞克隆數(shù)量比較

組別克隆數(shù)量/個(gè)HCM細(xì)胞H9C2細(xì)胞空白組81.26±15.4784.53±13.79陰性轉(zhuǎn)染組87.26±17.2388.41±14.07miR-98轉(zhuǎn)染組23.48±5.13a26.72±5.62a

注：與空白組和陰性轉(zhuǎn)染組比較aP<0.05。

2.5各組HCM、H9C2心肌細(xì)胞增殖情況結(jié)果見(jiàn)表4。隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，miR-98轉(zhuǎn)染組HCM、H9C2心肌細(xì)胞抑制率逐漸升高。miR-98轉(zhuǎn)染組HCM、H9C2心肌細(xì)胞抑制率在各時(shí)間點(diǎn)均高于空白組和陰性轉(zhuǎn)染組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.6各組HCM、H9C2心肌細(xì)胞中miR-98及Fas、FasL蛋白表達(dá)結(jié)果見(jiàn)表5、表6和圖5。miR-98轉(zhuǎn)染組心肌細(xì)胞中miR-98相對(duì)表達(dá)量低于空白組和陰性轉(zhuǎn)染組，F(xiàn)as、FasL蛋白相對(duì)表達(dá)量高于空白組和陰性轉(zhuǎn)染組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表4各組HCM和H9C2心肌細(xì)胞抑制率比較

組別HCM心肌細(xì)胞抑制率12 h24 h48 h72 hH9C2心肌細(xì)胞抑制率12 h24 h48 h72 h空白組0.17±0.020.16±0.020.19±0.040.21±0.040.14±0.030.16±0.050.19±0.050.20±0.06陰性轉(zhuǎn)染組0.18±0.030.19±0.030.20±0.060.18±0.060.15±0.040.18±0.070.22±0.070.21±0.08miR-98轉(zhuǎn)染組0.46±0.06a0.58±0.09a0.67±0.09a0.78±0.08a0.49±0.08a0.59±0.09a0.68±0.08a0.77±0.09a

注：與空白組、陰性轉(zhuǎn)染組比較aP<0.05。

表5各組HCM、H9C2心肌細(xì)胞中miR-98表達(dá)比較

組別miR-98表達(dá)HCM細(xì)胞H9C2細(xì)胞空白組0.78±0.060.75±0.04陰性轉(zhuǎn)染組0.72±0.090.73±0.08miR-98轉(zhuǎn)染組0.05±0.01a0.06±0.01a

注：與空白組和陰性轉(zhuǎn)染組比較aP<0.05。

表6各組HCM和H9C2心肌細(xì)胞中Fas、FasL蛋白表達(dá)比較

組別HCMFas蛋白表達(dá)FasL蛋白表達(dá)H9C2Fas蛋白表達(dá)FasL蛋白表達(dá)空白組0.25±0.030.31±0.040.24±0.040.33±0.05陰性轉(zhuǎn)染組0.31±0.060.33±0.050.41±0.070.45±0.09miR-98轉(zhuǎn)染組0.71±0.18a0.83±0.15a0.79±0.12a0.89±0.13a

注：與空白組和陰性轉(zhuǎn)染組比較aP<0.05。

注：A：空白組；B：陰性轉(zhuǎn)染組；C：miR-98轉(zhuǎn)染組。

圖5各組HCM和H9C2心肌細(xì)胞中Fas、FasL蛋白表達(dá)(Westernblot)

Fig.5ExpressionofFasandFasLproteininHCMandH9C2cardiaccellsineachgroup(Westernblot)

2.7各組HCM、H9C2心肌細(xì)胞凋亡情況結(jié)果見(jiàn)圖6和表7。miR-98轉(zhuǎn)染組細(xì)胞凋亡率均高于空白組和陰性轉(zhuǎn)染組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

圖6各組HCM、H9C2心肌細(xì)胞凋亡情況

Fig.6ApoptosisofHCMandH9C2cardiaccellsineachgroup

表7各組HCM、H9C2心肌細(xì)胞凋亡率比較

組別凋亡率/%HCM 細(xì)胞H9C2細(xì)胞空白組3.07±0.753.18±0.72陰性轉(zhuǎn)染組3.16±0.873.83±0.76miR-98轉(zhuǎn)染組24.64±5.37a21.13±4.26a

注：與空白組和陰性轉(zhuǎn)染組比較aP<0.05。

3 討論

VM是指毒素或病毒攻擊心肌細(xì)胞后，造成局部性或彌漫性心肌間質(zhì)發(fā)生炎性浸潤(rùn)以及心肌纖維變形、壞死，導(dǎo)致心功能障礙的全身性疾病[6]。部分VM患者首發(fā)癥狀為上腹劇烈疼痛、惡心嘔吐，這些臨床表現(xiàn)較易掩蓋病情，耽誤診斷，延誤治療的最佳時(shí)機(jī)，造成病死率高。關(guān)于VM發(fā)病機(jī)制目前尚無(wú)統(tǒng)一定論。研究顯示，心血管組織中miR表達(dá)上調(diào)或下調(diào)參與調(diào)控心力衰竭、血管增殖、心臟發(fā)育、心肌肥大等疾病的發(fā)生[7]。有研究證實(shí)，F(xiàn)as/FasL誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡在VM的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用[8]。本研究通過(guò)檢測(cè)miR-98在VM患兒外周血中的表達(dá)，探究其在VM發(fā)生中的可能機(jī)制。

miR屬于單鏈小分子RNA，能夠在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控靶基因表達(dá)，進(jìn)而對(duì)機(jī)體的生長(zhǎng)、發(fā)育及疾病的發(fā)生、發(fā)展進(jìn)行調(diào)節(jié)。有研究顯示，對(duì)大鼠心肌細(xì)胞進(jìn)行過(guò)氧化氫處理，miR-98表達(dá)明顯降低，而對(duì)細(xì)胞進(jìn)行miR-98過(guò)表達(dá)處理，則心肌細(xì)胞活性明顯增強(qiáng)[9]。在健康者以及動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)患者血清中進(jìn)行miR基因篩選，結(jié)果顯示，在下調(diào)的miR中，miR-98下調(diào)幅度最大，說(shuō)明其下降與AS的發(fā)生密切相關(guān)[10]。最近有研究報(bào)道，VM患者血清中miR-98水平明顯降低，這一結(jié)果說(shuō)明miR-98水平的異常與VM的發(fā)生有關(guān)[11]。本研究結(jié)果顯示，VM患兒血清中miR-98表達(dá)明顯低于對(duì)照組，且隨著病情程度的加重，其水平逐漸降低，說(shuō)明miR-98與VM的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，與上述結(jié)果一致。

Fas、FasL均為細(xì)胞跨膜蛋白，F(xiàn)as主要在心臟、肝臟、淋巴細(xì)胞中表達(dá)，F(xiàn)asL主要在自然殺傷細(xì)胞中表達(dá)，當(dāng)二者結(jié)合后，F(xiàn)as將細(xì)胞凋亡信號(hào)傳遞至細(xì)胞內(nèi)，致使細(xì)胞凋亡，此外，F(xiàn)as/FasL介導(dǎo)的細(xì)胞毒性，可通過(guò)促進(jìn)自然殺傷細(xì)胞凋亡對(duì)VM進(jìn)行調(diào)控[12-15]。臨床研究顯示，VM患者外周血中Fas水平升高后，心肌細(xì)胞凋亡率明顯增加，表明Fas/FasL誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡與VM的發(fā)生密切相關(guān)[16]。HUANG等[17]研究顯示，VM患兒外周血中Fas蛋白的表達(dá)明顯高于對(duì)照組，并且與淋巴細(xì)胞的凋亡率呈正相關(guān)，提示Fas/FasL介導(dǎo)的淋巴細(xì)胞凋亡與VM的發(fā)生密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，VM患兒外周血中Fas、FasL mRNA及蛋白水平均明顯升高，且隨著病情程度的加重逐漸升高，提示Fas/FasL介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡可能與VM的發(fā)生密切相關(guān)。相關(guān)性分析結(jié)果顯示，miR-98與Fas、FasL呈顯著負(fù)相關(guān)，推測(cè)二者可能以負(fù)調(diào)控參與VM的發(fā)生。

為驗(yàn)證結(jié)論，本研究進(jìn)一步進(jìn)行體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染miR-98 siRNA后HCM、H9C2心肌細(xì)胞抑制率均明顯高于空白組和陰性轉(zhuǎn)染組，細(xì)胞克隆形成數(shù)量也下降，說(shuō)明抑制miR-98表達(dá)后，心肌細(xì)胞活性明顯降低。且轉(zhuǎn)染后HCM、H9C2心肌細(xì)胞凋亡率明顯增加，F(xiàn)as、FasL蛋白表達(dá)明顯增加，進(jìn)一步說(shuō)明抑制miR-98表達(dá)后可引發(fā)心肌細(xì)胞凋亡，其可能通過(guò)Fas/FasL誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。有研究顯示，miR-98可通過(guò)靶向調(diào)控Fas/Caspase-3參與心肌細(xì)胞凋亡[18]。有研究通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告分析法分析miR-98與Fas/FasL靶向關(guān)系，結(jié)果顯示，miR-98可與編碼Fas/FasL的3′非翻譯區(qū)結(jié)合，抑制Fas/FasL的表達(dá)[19-20]。

綜上所述，miR-98在VM患兒外周血中表達(dá)水平下降，可能通過(guò)調(diào)節(jié)Fas/FasL在心肌細(xì)胞中的表達(dá)來(lái)調(diào)控心肌細(xì)胞凋亡，從而參與VM 的發(fā)生。