趙 崗，杜 偉，魏新亭，王進(jìn)忠，程振國(guó)

(1.新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院神經(jīng)外科，河南 新鄉(xiāng) 453000；2.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)外科，河南 鄭州 451000)

膠質(zhì)瘤是惡性程度最高的中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，其增殖能力強(qiáng)、浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，且與周邊腦組織邊界不清，患者中位生存時(shí)間約1 a[1]。目前，盡管臨床診斷及治療膠質(zhì)瘤的技術(shù)不斷進(jìn)步，但患者預(yù)后并未明顯改善[2]。研究表明，膠質(zhì)瘤的發(fā)生與進(jìn)展是多基因、多步驟共同作用的結(jié)果[3]。Bcl-2相關(guān)抗凋亡基因(Bcl-2-associated anti-apoptotic gene，BAG)作為可與熱休克蛋白70結(jié)合的一組伴侶蛋白家族，其與組織發(fā)育、細(xì)胞自噬、遷移、凋亡、骨架形成等多種生物學(xué)功能密切相關(guān)[4]。BAG3是BAG家族的主要成員，研究表明，BAG3在多種惡性腫瘤組織中呈高表達(dá)，在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、抗凋亡、多藥耐藥等過程中發(fā)揮重要作用[5]。本研究進(jìn)一步探討B(tài)AG3蛋白在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)，分析其與膠質(zhì)瘤臨床病理特征的關(guān)系，并利用小分子RNA干擾(small interfering RNA，siRNA)技術(shù)特異性沉默人膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞中BAG3基因，觀察其對(duì)細(xì)胞增殖、凋亡和侵襲能力的影響，以期為膠質(zhì)瘤發(fā)病機(jī)制研究提供基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本來源選取2011年4月至2017年4月于新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院神經(jīng)外科手術(shù)切除的膠質(zhì)瘤組織及癌旁組織(距瘤旁邊緣>2 cm)標(biāo)本各73例，男39例，女34例；年齡19～77(51.2±10.4)歲；腫瘤分級(jí)[6]：Ⅰ級(jí)6例，Ⅱ級(jí)22例，Ⅲ級(jí)17例，Ⅳ級(jí)28例。所有患者術(shù)前未接受放射治療和化學(xué)治療，術(shù)后經(jīng)病理學(xué)檢查確診。膠質(zhì)瘤組織及癌旁組織經(jīng)甲醛固定，石蠟包埋保存。本研究通過醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者簽署知情同意書。

1.2試劑與儀器免疫組織化學(xué)試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司，兔抗人BAG3多克隆抗體購自美國(guó)Santa Cruz公司，人膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞由新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院提供，達(dá)爾伯克改良伊格爾培養(yǎng)基(Dulbecco′s modified Eagle′s medium，DMEM)和胎牛血清購自美國(guó)Gibco公司，RNA提取試劑盒和Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑盒購自美國(guó)Invitrogen公司，反轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增試劑盒購自日本TaKaRa公司，BAG3和內(nèi)參引物由上海生工生物工程股份有限公司設(shè)計(jì)合成，siRNA-BAG3和siRNA-對(duì)照序列由上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司合成，細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8(cell counting kit-8，CCK-8)購自南京凱基生物科技股份有限公司，膜聯(lián)蛋白V-異硫氰酸熒光素標(biāo)記/碘化丙啶(annexin V-flourescein isothiocyanate/propidium iodide，Annexin V-FITC/PI)凋亡檢測(cè)試劑盒購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司，Transwell小室購自美國(guó)Coster公司；倒置相差顯微鏡購自上海繪統(tǒng)光學(xué)儀器有限公司，實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR)儀購自美國(guó)ABI公司，全自動(dòng)凝膠電泳分析系統(tǒng)購自美國(guó)Bio-Rad公司。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1免疫組織化學(xué)法檢測(cè)膠質(zhì)瘤組織和癌旁組織中BAG3蛋白表達(dá)取石蠟標(biāo)本，連續(xù)切片，厚度約 5 μm，二甲苯脫蠟，梯度乙醇脫水，浸入30 g·L-1過氧化氫溶液中20 min以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶；置于乙二胺四乙酸溶液中，微波加熱至98 ℃持續(xù) 15 min，冷卻后加入山羊血清，室溫下孵育 10 min；加入一抗(兔抗人BAG3多克隆抗體，稀釋比例11 200)，4 ℃過夜，磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline，PBS)沖洗3次；加入二抗，室溫孵育60 min；二氨基聯(lián)苯胺染色，蘇木精復(fù)染，脫水、透明、中性樹脂封片；以PBS替代一抗作為陰性對(duì)照，光學(xué)顯微鏡下觀察。每張切片均由2位病理科副主任醫(yī)師獨(dú)立完成閱片，BAG3蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜。根據(jù)染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞比例采用半定量法進(jìn)行評(píng)估[7]：(1)陽性細(xì)胞比例≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分；(2)染色強(qiáng)度：無染色為0分，呈淡黃色為1分，呈黃棕色為2分，呈棕黃或黃褐色為3分；(3)以陽性細(xì)胞比例得分和染色強(qiáng)度得分的乘積對(duì)結(jié)果進(jìn)行判定，0分為陰性，1～6分為弱陽性，>6分為強(qiáng)陽性；以陰性或弱陽性作為BAG3蛋白低表達(dá)，以強(qiáng)陽性作為BAG3蛋白高表達(dá)。

1.3.2U87細(xì)胞培養(yǎng)及分組將U87細(xì)胞置于含體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清的DMEM中，于含體積分?jǐn)?shù)5%CO2的37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，胰蛋白酶消化，接種于6孔板中培養(yǎng)，待細(xì)胞融合度達(dá)70%以上時(shí)進(jìn)行分組，并利用Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑盒轉(zhuǎn)染：(1)siRNA-BAG3組：轉(zhuǎn)染BAG3干擾序列5′-AAGGUUCAGACCAUCUUGGAA-3′；(2)siRNA-對(duì)照序列組：轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照序列5′-CCGUAUCGUAAGCAGUACU-3′；(3)空白對(duì)照組：不作任何處理。轉(zhuǎn)染后繼續(xù)培養(yǎng)48 h，完成后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.3.3實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)各組U87細(xì)胞中BAG3mRNA表達(dá)取各組轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)48 h的細(xì)胞，胰蛋白酶消化，加入細(xì)胞裂解液，用TRIzol法獲得各組細(xì)胞中總RNA，并檢測(cè)總RNA純度。取10 μg總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，以cDNA為模板進(jìn)行擴(kuò)增。引物序列：BAG3上游引物序列為5′-CATCCAGGAGTGCTGAAAGTG-3′，下游引物序列為5′-TCTGAACCTTCCTGACACCG-3′；β-actin上游引物序列為5′-GAGACCTTCAACACCCCAGCC-3′，下游引物序列為5′-GGATCTTCATGAGGTAGTCAG-3′。PCR反應(yīng)條件：95 ℃ 10 min，94 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，74 ℃ 30 s，連續(xù)循環(huán)38次，每個(gè)樣本均設(shè)3個(gè)平行反應(yīng)復(fù)孔。采用2-△△Ct法獲得各組細(xì)胞中BAG3 mRNA相對(duì)表達(dá)量。

1.3.4Westernblot法檢測(cè)U87細(xì)胞中BAG3蛋白表達(dá)取各組轉(zhuǎn)染培養(yǎng)48 h的細(xì)胞，加入細(xì)胞裂解液，用總蛋白提取試劑盒獲得總蛋白，用二喹啉甲酸法蛋白濃度檢測(cè)試劑盒測(cè)定總蛋白濃度。取 60 μg 總蛋白，應(yīng)用120 g·L-1十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，電轉(zhuǎn)移至聚偏氟乙烯膜上，室溫下以50 g·L-1脫脂奶粉封閉60 min，將一抗兔抗人BAG3多克隆抗體按1500稀釋后加入，4 ℃過夜孵育，含Tween-20的三羥甲基氨基甲烷緩沖液洗滌3次，將二抗按15 000稀釋后加入，室溫下孵育 60 min，含Tween-20的三羥甲基氨基甲烷緩沖液洗滌3次；內(nèi)參為磷酸甘油醛脫氫酶(glyceraldehyde-phosphate dehydrogenase,GAPDH)。利用Image J圖像分析軟件對(duì)各條帶灰度值進(jìn)行分析，獲得細(xì)胞中BAG3蛋白相對(duì)表達(dá)量。

1.3.5CCK-8法檢測(cè)U87細(xì)胞增殖情況取各組轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)48 h的細(xì)胞，胰蛋白酶消化，接種于96孔板，調(diào)整細(xì)胞密度為每孔2×103個(gè)，每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔，加入含體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清的DMEM，37 ℃ 恒溫培養(yǎng)，分別于培養(yǎng)12、24、48、72、96 h時(shí)加入CCK-8液10 μL，搖晃均勻，避光孵育 120 min，應(yīng)用酶標(biāo)儀于450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔吸光度。

1.3.6克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)U87細(xì)胞克隆能力取各組轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)48 h的細(xì)胞，胰蛋白酶消化，接種6孔板，調(diào)整細(xì)胞密度為每孔200個(gè)，每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)10 d后，多聚甲醛固定20 min，5 g·L-1結(jié)晶紫染色25 min，以≥50個(gè)細(xì)胞作為1個(gè)克隆，計(jì)數(shù)各組細(xì)胞克隆數(shù)量。

1.3.7流式細(xì)胞儀檢測(cè)U87細(xì)胞凋亡情況取各組轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)48 h的細(xì)胞，胰蛋白酶消化，接種于96孔板，調(diào)整細(xì)胞密度為1×109L-1，取1 mL細(xì)胞懸液，置于離心管內(nèi)，4 ℃下1 000 r·min-1離心10 min，留取沉淀，PBS沖洗3次，加入結(jié)合緩沖液200 μL，充分混勻，分別加入Annexin V和PI各 5 μL，避光反應(yīng)15 min，加入結(jié)合緩沖液400 μL，60 min 內(nèi)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。

1.3.8Transwell小室檢測(cè)U87細(xì)胞侵襲能力將Matrigel膠平鋪于Transwell小室上室，風(fēng)干后備用。取各組轉(zhuǎn)染培養(yǎng)48 h的細(xì)胞，胰蛋白酶消化，PBS重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為2.5×109L-1，取 200 μL 細(xì)胞懸液加入小室上室，500 μL含體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清的培養(yǎng)液加入下室，于37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h，取出小室，棄去多余的培養(yǎng)液，多聚甲醛固定，結(jié)晶紫染色，用棉簽將散落細(xì)胞輕輕除去，利用倒置顯微鏡觀察，隨機(jī)取10個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)穿膜細(xì)胞數(shù)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

2 結(jié)果

2.1膠質(zhì)瘤組織和癌旁組織中BAG3蛋白表達(dá)比較結(jié)果見圖1。膠質(zhì)瘤組織中BAG3蛋白高表達(dá)率為73.97%(54/73)，低表達(dá)率為26.03%(19/73)；癌旁組織中BAG3蛋白高表達(dá)率為36.99%(27/73)，低表達(dá)率為63.01%(46/73)；膠質(zhì)瘤組織中BAG3蛋白高表達(dá)率顯著高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=20.215，P<0.05)。

A：癌旁組織；B：Ⅰ級(jí)膠質(zhì)瘤；C：Ⅱ級(jí)膠質(zhì)瘤；D：Ⅲ級(jí)膠質(zhì)瘤；E：Ⅳ級(jí)膠質(zhì)瘤。

圖1膠質(zhì)瘤組織和癌旁組織中BAG3蛋白表達(dá)(免疫組織化學(xué)，×400)

Fig.1ExpressionofBAG3proteiningliomatissuesandadjacenttissues(immunohistochemistry，×400)

2.2BAG3蛋白表達(dá)與膠質(zhì)瘤患者臨床參數(shù)的關(guān)系結(jié)果見表1。膠質(zhì)瘤組織中BAG3蛋白表達(dá)與患者的年齡、性別、腫瘤位置、腫瘤直徑及Karnofsky評(píng)分無關(guān)(P>0.05)，而與腫瘤分級(jí)有關(guān)(P<0.05)。

表1BAG3蛋白表達(dá)與膠質(zhì)瘤患者臨床參數(shù)之間的關(guān)系

Tab.1RelationshipbetweenBAG3proteinexpressionandclinicalparametersinpatientswithglioma

臨床參數(shù)nBAG3蛋白高表達(dá)/例(%)低表達(dá)/例(%)χ2P年齡 ≥50歲4734(72.34)13(27.66)0.1830.669 <50歲2620(76.92)6(23.08)性別 男3930(76.92)9(23.08)0.3790.538 女3424(70.59)10(29.41)腫瘤位置 小腦幕上5945(76.27)14(23.73)0.8440.358 小腦幕下149(64.29)5(35.71)腫瘤直徑 >3 cm3827(71.05)11(28.95)0.3510.554 ≤3 cm3527(77.14)8(22.86)Karnofsky評(píng)分 >801913(68.42)6(31.58)0.4110.521 ≤805441(75.93)13(24.07)腫瘤分級(jí) Ⅰ～Ⅱ級(jí)2816(57.14)12(42.86)6.6820.010 Ⅲ～Ⅳ級(jí)4538(84.44)7(15.56)

2.33組U87細(xì)胞中BAG3mRNA表達(dá)比較siRNA-BAG3組、siRNA-對(duì)照序列組和空白對(duì)照組U87細(xì)胞中BAG3 mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為1.42±0.11、2.17±0.12和2.31±0.18；siRNA-BAG3組U87細(xì)胞中BAG3 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著低于siRNA-對(duì)照序列組和空白對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=11.236、10.480，P<0.05)；siRNA-對(duì)照序列組與空白對(duì)照組U87細(xì)胞中BAG3 mRNA相對(duì)表達(dá)量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.708，P>0.05)。

2.43組U87細(xì)胞中BAG3蛋白表達(dá)比較結(jié)果見圖2。siRNA-BAG3組、siRNA-對(duì)照序列組和空白對(duì)照組U87細(xì)胞中BAG3蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為0.20±0.12、0.84±0.13和0.92±0.12；siRNA-BAG3組U87細(xì)胞中BAG3蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著低于siRNA-對(duì)照序列組和空白對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=8.956、10.460，P<0.05)；siRNA-對(duì)照序列組與空白對(duì)照組U87細(xì)胞中BAG3蛋白相對(duì)表達(dá)量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.074，P>0.05)。

圖23組U87細(xì)胞中BAG3蛋白表達(dá)(Westernblot)

Fig.2ExpressionsofBAG3proteininU87cellsinthethreegroups(Westernblot)

2.53組U87細(xì)胞增殖能力比較結(jié)果見圖3和表2。培養(yǎng)12 h時(shí)3組U87細(xì)胞增殖能力比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。培養(yǎng)24、48、72、96 h時(shí)siRNA-BAG3組U87細(xì)胞增殖能力顯著低于siRNA-對(duì)照序列組和空白對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；siRNA-對(duì)照序列組與空白對(duì)照組U87細(xì)胞增殖能力比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

圖33組U87細(xì)胞增殖能力比較

Fig.3ComparisonoftheproliferationabilityofU87cellsamongthethreegroups

表23組U87細(xì)胞增殖能力比較

組別n細(xì)胞增殖能力(吸光度)培養(yǎng)12 h培養(yǎng)24 h培養(yǎng)48 h培養(yǎng)72 h培養(yǎng)96 h空白對(duì)照組60.11±0.020.43±0.030.51±0.020.67±0.120.79±0.03siRNA-對(duì)照序列組60.14±0.070.39±0.040.49±0.050.70±0.070.82±0.12siRNA-BAG3組60.12±0.020.27±0.05a0.36±0.03a0.50±0.07a0.60±0.06aF0.68724.35628.9759.15213.797P0.5180.0000.0000.0030.000

注：與siRNA-對(duì)照序列組和空白對(duì)照組比較aP<0.05。

2.63組U87細(xì)胞克隆形成能力比較結(jié)果見圖4。克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，siRNA-BAG3組、siRNA-對(duì)照序列組和空白對(duì)照組U87細(xì)胞克隆形成數(shù)分別為30.76±6.19、81.32±3.55、85.07±3.05；siRNA-BAG3組U87細(xì)胞克隆形成數(shù)顯著少于siRNA-對(duì)照序列組和空白對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=17.349、19.278，P<0.05)；siRNA-對(duì)照序列組與空白對(duì)照組U87細(xì)胞克隆形成數(shù)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.968，P>0.05)。

A：siRNA-BAG3組；B：siRNA-對(duì)照序列組；C：空白對(duì)照組。

圖43組U87細(xì)胞克隆形成能力比較

Fig.4ComparisonofthecolonyformingabilityofU87cellsamongthethreegroups

2.73組U87細(xì)胞凋亡率比較siRNA-BAG3組、siRNA-對(duì)照序列組和空白對(duì)照組細(xì)胞凋亡率分別為(21.43±6.89)%、(5.50±2.95)%、(7.37±3.31)%；siRNA-BAG3組細(xì)胞凋亡率顯著高于siRNA-對(duì)照序列組和空白對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.208、4.508，P<0.05)；siRNA-對(duì)照序列組與空白對(duì)照組細(xì)胞凋亡率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.031，P>0.05)。

2.83組U87細(xì)胞侵襲能力比較結(jié)果見圖5。siRNA-BAG3組、siRNA-對(duì)照序列組和空白對(duì)照組侵襲細(xì)胞數(shù)分別為116.92±8.82、179.00±11.64、172.48±18.16；siRNA-BAG3組侵襲細(xì)胞數(shù)顯著少于siRNA-對(duì)照序列組和空白對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=10.410、6.740，P<0.05)；siRNA-對(duì)照序列組與空白對(duì)照組侵襲細(xì)胞數(shù)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.740，P>0.05)。

A：siRNA-BAG3組；B：siRNA-對(duì)照序列組；C：空白對(duì)照組。

圖53組U87細(xì)胞侵襲能力比較(結(jié)晶紫染色，×400)

Fig.5ComparisonoftheinvasiveabilityofU87cellsamongthethreegroups(crystalvioletstaining，×400)

3 討論

膠質(zhì)瘤是惡性腦腫瘤的主要類型，具有發(fā)病率高、生存率低等特點(diǎn)，5 a病死率僅次于胰腺癌和肺癌[8]，現(xiàn)有的治療手段并不能明顯延長(zhǎng)患者生存時(shí)間[9-10]。研究表明，侵襲性生長(zhǎng)是膠質(zhì)瘤難以根治且易復(fù)發(fā)的主要因素[11]。因此，積極探討影響膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖及侵襲力的相關(guān)機(jī)制，有望為改善患者預(yù)后提供思路。BAG3作為一種抗凋亡蛋白，是熱休克蛋白70重要的伴侶蛋白，可通過與熱休克蛋白70結(jié)合而在多種病理生理過程中發(fā)揮重要作用，在維持及促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、生存及遷移等過程中起關(guān)鍵性作用[5]，與白血病[12]、乳腺癌[13]、卵巢癌[14]等多種惡性腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，膠質(zhì)瘤組織中BAG3蛋白表達(dá)顯著高于癌旁組織，說明BAG3蛋白可能參與了膠質(zhì)瘤的發(fā)生與發(fā)展。本研究結(jié)果顯示，BAG3蛋白表達(dá)與膠質(zhì)瘤分級(jí)有關(guān)，分級(jí)越高，BAG3蛋白表達(dá)越高，提示BAG3蛋白表達(dá)與膠質(zhì)瘤惡性程度有關(guān)，其可能參與了膠質(zhì)瘤的發(fā)展過程。

為進(jìn)一步探討B(tài)AG3與膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)特性的關(guān)系，本研究利用siRNA技術(shù)特異性沉默BAG3基因，實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，siRNA-BAG3組U87細(xì)胞中BAG3 mRNA和蛋白相對(duì)表達(dá)量均降低，提示人膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞中BAG3基因表達(dá)被成功沉默。有研究指出，BAG3可通過促進(jìn)熱休克蛋白70與細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Bax結(jié)合而阻斷Bax介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，從而促進(jìn)細(xì)胞存活[15]。本研究CCK-8和克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與siRNA-對(duì)照序列組和空白對(duì)照組相比，24、48、72、96 h 時(shí)siRNA-BAG3組U87細(xì)胞增殖能力下降，且細(xì)胞克隆形成數(shù)量減少，說明特異性沉默BAG3基因表達(dá)可抑制U87細(xì)胞的增殖能力，提示BAG3可能參與了膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖及生長(zhǎng)過程。本研究結(jié)果顯示，與siRNA-對(duì)照序列組和空白對(duì)照組相比，siRNA-BAG3組U87細(xì)胞凋亡率增加，說明特異性沉默BAG3基因可促進(jìn)細(xì)胞凋亡發(fā)生。本研究結(jié)果顯示，與siRNA-對(duì)照序列組和空白對(duì)照組比較，siRNA-BAG3組侵襲細(xì)胞數(shù)減少，說明特異性沉默BAG3基因可抑制U87細(xì)胞的侵襲能力，提示BAG3可能參與了膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲過程。

綜上所述，BAG3蛋白在膠質(zhì)瘤組織中呈高表達(dá)，且與腫瘤惡性程度有關(guān)，其可能通過促進(jìn)人膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞增殖與侵襲、減少細(xì)胞凋亡而參與膠質(zhì)瘤的發(fā)生和發(fā)展過程，有望為膠質(zhì)瘤靶向治療提供新的靶位。