□ 謝有發(fā) 馬曉娟 熊艷霞 楊凌宇 呂毅斌（通訊作者） 江中藥業(yè)股份有限公司

藍莓因富含豐富的花青素，對保護視力、緩解眼睛疲勞等具有良好效果，被譽為“美瞳之果”?，F(xiàn)代藥理學研究表明，花青素具有抗氧化、抗腫瘤、防治心腦血管疾病、促進視力等作用[1]，在臨床上廣泛應用于治療高血壓性視網(wǎng)膜病變等疾病，是眼科藥物的主要活性成分[2]。藍莓提取物是一種略帶酸味的深紫色粉末，其由新鮮或冷凍的藍莓果經(jīng)提取精制而成。目前，藍莓提取物在歐洲作為藥物使用，在美國和日本則作為保健食品使用。

藍莓果實中存在的花青素種類主要有5種—矢車菊素（Cy）、飛燕草素（Dp）、芍藥素（Pn）、牽牛花素（Pt）和錦葵素（Mv），他們以單糖苷形式（阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖）存在[3]，其中3-糖苷在自然界中最豐富，而高效液相色譜（HPLC）法測定花青素以矢車菊素-3-O-葡萄糖苷為對照品居多。

隨著人們生活水平的提高和對視力保護意識的增強，藍莓提取物日益受到消費者的關注和青睞，也引起了不少生產企業(yè)的聚焦。本研究采用高效液相色譜法，以矢車菊素-3-O-葡萄糖苷作為對照品，對兩個不同廠家的藍莓提取物與藍莓鮮果中花青素的含量和種類進行了對比研究，為選購藍莓提取物提供了有力的質量依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

新鮮藍莓：貴州麻江產地；藍莓提取物：廠家提供（分別編號A、B）；矢車菊素-3-O-葡萄糖苷標準品（≥99%）：成都曼思特生物科技有限公司；甲醇：國產色譜純；甲酸、鹽酸等為國產分析純。

1.2 儀器與設備

Agilent1260型高效液相色譜儀：Agilent公司；HH-2型數(shù)顯恒溫水浴鍋：國華電器有限公司；AB204-N型電子天平：METTLERTOLEDO公司；320p H計：Meter METTLER TOLEDO公司；超聲清洗器：南昌科昌達超聲波設備廠；離心機：長沙湘智離心機儀器有限公司；超純水儀：Heal Force DevelopmentLtd。

1.3 供試品溶液的制備

1.3.1 藍莓供試品溶液制備

精確稱取新鮮藍莓6.1924g，研碎，加入5 0 m L 2%的鹽酸甲醇溶液（V/V），常溫超聲提取1h，4000 r/min離心15min后取上清液，加2%的鹽酸甲醇溶液（V/V）定容至100mL，用 0.45μ m濾膜過濾即得藍莓樣品。

1.3.2 藍莓提取物供試品溶液制備

分別精確稱取兩種提取物樣品各10.0mg，加3%的甲酸水溶液（V/V）定容至1 0 m L，用0.45μ m濾膜過濾，即得藍莓提取物樣品。

1.3.3 標準品溶液的制備

取矢車菊素-3-O-葡萄糖苷標準品，精密稱定，加2%的鹽酸甲醇溶液（V/V）制成濃度為0.049m g/m L標準品溶液，用 0.4 5 μ m濾膜過濾，即得標準品樣品。

1.4 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18 5μm 250×4.6mm；檢測波長：525nm；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃；進樣量：10μL，梯度條件見表1。

表1 色譜柱梯度條件

2 結果與分析

2.1 矢車菊素—3—O—葡萄糖苷標準品測定結果（見圖1）

圖1 矢車菊素-3-O-葡萄糖苷標準品色譜圖

圖2 樣品A色譜圖

圖3 樣品B色譜圖

2.2 藍莓提取物樣品A、B與藍莓的測定結果（見圖2、圖 3、圖 4）

由圖2、圖3、圖4可知，樣品A的花色苷種類單一，同圖1標準品的圖譜類似，矢車菊素的峰面積明顯較大，使其他小峰面積均可忽略不計；樣品B的花色苷種類相對豐富，其中含有矢車菊素的峰。天然藍莓果的花青素圖譜是由多個峰組成，矢車菊素只占其中一部分。

圖4 藍莓色譜圖

2.3 藍莓、樣品A、樣品B的花色苷種類及含量對比（見圖 5、表 2）

圖5 藍莓、樣品A、樣品B的對比結果

表2 樣品A、B、C花青素的測定結果

表2的結果表明，按總峰面積計算花青素含量，樣品A的總峰面積主要來源于矢車菊素，含量40.96%雖已達到了所謂的規(guī)格（花青素≥25%），但來源不真實。樣品B的花青素含量結果則是多個峰面積的總和，同樣達到了產品規(guī)格。藍莓果的花青素含量0.445%，即4.45mg/g，符合一般藍莓果花青素的含量范圍[4-8]。

圖5的結果表明，與天然、新鮮的藍莓果相比較，樣品A花色苷種類單一，以矢車菊素-3-O-葡萄糖為主，樣品B與鮮藍莓原料中花色苷種類較一致。因樣品A花色苷種類只有矢車菊素一個大峰，不符合天然藍莓提取物的特點，不建議購買使用。

3 結論

藍莓提取物被廣泛應用于食品、藥品、化妝品和保健產品等領域，具有巨大的市場潛力。正因其產品附加值高，利潤空間相當巨大，多家企業(yè)都在生產、銷售藍莓提取物，其安全性和真實性成為人們，以及相關企業(yè)關注的焦點之一。本研究為鑒別藍莓提取物提供了研究思路和方法，采用高效液相色譜法測定更準確、高效，但其分析方法尚需進一步優(yōu)化、完善。