鄭姣妮 張穎 劉玲

中圖分類號 R961；R969 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2018）17-2360-05

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.17.13

摘 要 目的：研究復方胃炎膠囊對胃炎模型大鼠胃液游離酸度、胃蛋白酶活性及胃動力障礙模型小鼠胃排空的影響，為其開發(fā)利用提供參考。方法：將72只大鼠隨機分為正常組（n=12）和造模組（n=60），造模組大鼠采用60%乙醇聯(lián)合熊去氧膽酸制備大鼠胃炎模型。造模成功后，將55只大鼠隨機分為模型組、雷尼替丁組（40 mg/kg）和復方胃炎膠囊高、中、低劑量組（相當于原生藥16、8、4 g/kg），每組11只。各給藥組大鼠每天灌胃給藥1次，正常組和模型組大鼠灌胃等體積0.5%羧甲基纖維素鈉（0.5%CMC）溶液，連續(xù)給藥28 d。給藥結束后，檢測各組大鼠胃液游離酸度和胃蛋白酶活性，蘇木精-伊紅染色后觀察各組大鼠胃組織病理學變化并進行炎癥評分。將60只小鼠隨機分為正常組、模型組、多潘立酮組（50 mg/kg）和復方胃炎膠囊高、中、低劑量組（相當于原生藥20、10、5 g/kg），每組10只。各給藥組小鼠灌胃相應藥液，正常組和模型組小鼠灌胃等體積0.5%CMC溶液。末次給藥50 min后，除正常組外，其余各組小鼠均腹腔注射阿托品3 mg/kg制備胃動力障礙模型。造模20 min后，測定小鼠胃內(nèi)殘留率。結果：與正常組比較，模型組大鼠胃液游離酸度和胃蛋白酶活性顯著降低（P<0.05），胃黏膜上皮細胞排列紊亂、有大量炎性細胞浸潤，炎癥評分顯著升高（P<0.05）；模型組小鼠胃內(nèi)殘留率顯著升高（P<0.05）。與模型組比較，雷尼替丁組和復方胃炎膠囊高劑量組大鼠胃液游離酸度和胃蛋白酶活性顯著升高（P<0.05），胃組織病理學損傷明顯減輕，炎癥評分顯著降低（P<0.05）；多潘立酮片組和復方胃炎膠囊高劑量組小鼠胃內(nèi)殘留率顯著降低（P<0.05）。結論：復方胃炎膠囊可提高胃炎模型大鼠的胃液游離酸度和胃蛋白酶活性，改善胃組織病理變化，并可促進胃動力障礙模型小鼠的胃排空。

關鍵詞 復方胃炎膠囊；胃炎模型；胃液酸度；胃蛋白酶活性；胃動力障礙模型；胃排空；小鼠；大鼠

ABSTRACT OBJECTIVE： To study the effects of Compound gastritis capsule on free acidity and protease activity of gastric juice in gastritis model rats and gastric emptying in gastric motility disorder model mice， and to provide reference for its development and utilization. METHODS： Totally 72 rats were randomly divided into normal group （n=12） and model group （n=60）. Model group was given 60% ethanol combined with ursodeoxycholic acid to induce gastritis model of rats. After modeling， 55 rats were randomly divided into model group， ranitidine group （40 mg/kg） and Compound gastritis high-dose， medium-dose and low-dose groups （equivalent to 16， 8， 4 g/kg crude drug）， with 11 rats in each group. Rats of administration groups were given relevant drug intragastrically once a day. Normal group and model group were given constant volume of 0.5% carboxymethylcellulose sodium （0.5% CMC） solution for consecutive 28 d. After medication， free acidity and protease activity of gastric juice in gastritis model rats were determined； after HE staining， the pathological changes of gastric tissue were observed and the inflammatory score was observed. Totally 60 mice were randomly divided into normal group， model group， domperidone group （50 mg/kg）， Compound gastritis capsule high-dose， medium-dose and low-dose groups （equivalent to 20， 10， 5 g/kg crude drug）， with 10 mice in each group. Administration groups were given relevant medicine liquid intragastrically， and mice of normal group and model group were given constant volume of 0.5% CMC solution intragastrically. 50 min after last medication， except for normal group， other groups were given atropine 3 mg/kg intraperitoneally to induce gastric motility disorder model. The residual rate of drug in the stomach of mice was determined 20 min after modeling. RESULTS： Compared with normol group，the free acidity and protease activity of gastric juice in rats in model group were increased significantly （P<0.05），and the epithelial cells in the gastric mucosa were in disorder， a large number of inflammatory cells were infiltrated， the score of inflammation was increased significantly （P<0.05）； the residual rate of drug in the stomach of mice in model group was increased significantly （P<0.05）. Compared with model group， the free acidity and protease activity of gastric juice in rats in in ranitidine group and Compound gastritis capsule high-dose group was significantly decreased （P<0.05）， the histopathological injury of stomach was obviously reduced and the score of inflammation was significantly decreased （P<0.05）； the residual rate in the stomach of mice in domperidone group and Compound gastritis capsule high-dose group was significantly decreased （P<0.05）. CONCLUSIONS： Compound gastritis capsule can improve the free acidity and protease activity of gastric juice in gastritis model rat and improve the pathological changes of gastric tissue， and can promote the gastric emptying of the gastric motility disorder model mice.

KEYWORDS Compound gastritis capsule； Gastritis model； Acidity of gastric juice； Protease activity of gastric juice； Gastric motility disorder model； Gastric emptying； Mice； Rat

胃炎早期其癥狀與體征變化不明顯，常在腺體萎縮后才能夠感知到胃炎病癥，臨床表現(xiàn)為腹脹、暖氣、惡心嘔吐、消化不良及便溏等。中醫(yī)將胃炎歸屬到“胃脘痛”“痞證”等范疇，是本虛標實之證，其本為脾胃虛弱，其標則為氣滯血瘀[1]。西醫(yī)則認為，胃炎的發(fā)生主要與胃黏膜上皮受到各種致病因子（如藥物、微生物、毒素和膽汁返流等）經(jīng)常、反復地侵襲有關，雖然病因不同，但病理過程基本相似，即上皮損傷、黏膜炎癥反應和上皮再生[2-3]。從現(xiàn)代醫(yī)學病理生理學角度分析，胃炎患者常因胃黏膜慢性炎性反應，組織充血水腫而產(chǎn)生胃動力障礙[4]。中醫(yī)藥治療該病時具有辨證論治、靈活加減、毒副作用小等特點，尤其是活血化瘀法的應用，對此病的治療顯示出獨特的優(yōu)勢[5]。

復方胃炎膠囊為重慶市第四人民醫(yī)院的經(jīng)驗方，原劑型為湯劑，主要由白芍、黨參、白術、茯苓、麥冬、丹參、香附、高良姜和甘草等九味中藥材組成，具有健脾補氣、和胃活血等功效，主治脾氣不足、脾胃虛寒兼氣滯血瘀的慢性胃炎和胃脹氣[6]。前期筆者在對本院消化內(nèi)科109例胃炎且具有脹氣等消化不良癥狀患者的臨床觀察中發(fā)現(xiàn)，給予復方胃炎膠囊的原方湯劑進行治療3個月后，總有效率達到98.2%，治療效果明顯。但是湯劑具有服用量大、攜帶不方便、保質(zhì)期短、患者依從性差等特點，不利于推廣使用。筆者在前期研究中，對復方胃炎膠囊的提取工藝進行了優(yōu)化[6]，本研究在工藝優(yōu)化基礎上，進一步考察復方胃炎膠囊對胃炎模型大鼠胃液游離酸度、胃蛋白酶活性、胃組織炎癥以及胃腸動力障礙模型小鼠胃排空的影響，初步探討復方胃炎膠囊對胃炎的療效，為其進一步開發(fā)利用提供實驗參考。

1 材料

1.1 儀器

EB-3200電子天平、UV-1800紫外分光光度計（日本島津公司）；BH-2光學顯微鏡（日本Olympus公司）。

1.2 藥品與試劑

復方胃炎膠囊（重慶市第四人民醫(yī)院自制，批號：20130301，規(guī)格：0.5 g/粒，每粒相當于原生藥4.4 g）；鹽酸雷尼替丁膠囊（南京金陵制藥廠，批號：20130324，規(guī)格：0.15 g/粒）；去氧膽酸鈉（上海江萊生物科技有限公司，批號：20130615，分析純）；羧甲基纖維素鈉（CMC，南京化學試劑有限公司，批號：20130705，化學純）；絡氨酸（中國食品藥品檢定研究院，批號：140708-2013011，分析純）；阿托品注射液（上海禾豐制藥有限公司，批號：20130319，規(guī)格：1 mL ∶ 10 mg）；氫氧化鈉（NaOH，南京化學試劑有限公司，批號：20130608，化學純）。

1.3 動物

KM小鼠60只（SPF級，7周齡，體質(zhì)量20～22 g，♀♂各半）和SD大鼠72只（SPF級，3～5周齡，體質(zhì)量180～220 g ，♀♂各半）均由四川省中醫(yī)藥科學院實驗動物中心提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（川）2013-19。大鼠購入后飼養(yǎng)于溫度為20～22 ℃、相對濕度約為52%，12 h明亮/12 h黑暗交替環(huán)境下。標準飼料由四川省中醫(yī)藥科學院實驗動物中心提供。

2 方法

2.1 復方胃炎膠囊的制備

按處方比例稱取各飲片（黨參100 g、白術 100 g、茯苓60 g、麥冬60 g 、白芍50 g、丹參50 g、香附30 g、高良姜50 g、甘草30 g），共530 g，分別用10倍量水煎3次、每次120 min，收集流浸膏，減壓干燥后粉碎成細粉，加入適量輔料，過篩，混勻，裝入膠囊后即得[6]。臨用前用0.5%CMC溶液制備成所需質(zhì)量濃度的混懸液。

2.2 復方胃炎膠囊對胃炎模型大鼠的影響

2.2.1 分組、造模與給藥 將72只大鼠隨機分為造模組（n=60）和正常組（n=12）。造模組大鼠在造模第1～30天每間隔5 d，第31～60天每間隔7 d灌胃給予60%乙醇溶液2 mL，期間用10 mmol/ L的去氧膽酸鈉溶液作為飲用水隨意飲用；造模第61～90 d，分別用40%乙醇溶液與10 mmol/ L的去氧膽酸鈉溶液每隔3天輪換作為飲用水隨意飲用[7]。在整個造模期間，造模組有5只大鼠、正常組有1只大鼠死亡。在造模完成后，將55造模大鼠隨機分為5組，分別為模型組、雷尼替丁組和復方胃炎膠囊高、中、低劑量組，每組11只。雷尼替丁組大鼠灌胃雷尼替丁40 mg/kg[8]（0.5%CMC溶液溶解），復方胃炎膠囊高、中、低劑量組大鼠灌胃以生藥量計分別為16、8、4 g/kg（分別根據(jù)臨床用量的2、1、0.5倍劑量換算而得），正常組和模型組大鼠灌胃等體積0.5%CMC溶液，每天給藥1次，連續(xù)給藥28 d。

2.2.2 大鼠胃液游離酸度測定 末次給藥后，大鼠禁食不禁水24 h，麻醉后放血處死，立即剖腹，結扎賁門、幽門，剪取全胃，用蒸餾水洗去表面血污，濾紙吸干水分。將大鼠胃置于直徑約5 cm培養(yǎng)皿內(nèi)，沿胃小彎剖開胃腔，用吸管吸取其胃液并測量胃液體積，將胃液轉入5 mL試管中，然后加2 mL蒸餾水浸洗胃壁，浸洗液轉入同一5 mL 試管中，并用蒸餾水補充至5 mL。取每只大鼠稀釋胃液各1 mL，以酚酞為指示劑，用0.01 mol/L的NaOH溶液滴定（溶液變?yōu)榧t色，且2 s內(nèi)不褪色即為滴定終點），記錄消耗的NaOH體積（V）并計算胃液游離酸度：胃液游離酸度=V×0.01/0.05[9]。

2.2.3 大鼠胃蛋白酶活性測定 移取“2.2.2”項下胃液200 ?L，置于離心管中，用1.0 mol/L鹽酸溶液將胃液稀釋至5 mL，離心取上清液，作為供試品溶液。采用血紅蛋白底物法[9-10]，以0.5 mg/mL絡氨酸溶液為對照品溶液，在37 ℃孵育1 min，使用紫外分光光度計在275 nm波長處測定吸光度，計算胃液每分鐘能催化水解血紅蛋白生成1 μmol絡氨酸的酶量，即蛋白酶活力單位數(shù)。每1 mL溶液中含胃蛋白酶單位（U）=A×Ws×n/（As×W×10×181.19），公式中As為對照品溶液的平均吸光度，A為供試品溶液的平均吸光度，Ws為每1 mL對照品溶液中含絡氨酸的量（μg），W為供試品溶液的取樣量（mL），n為供試品溶液稀釋倍數(shù)，181.19為胃蛋白酶的分子量。

2.2.4 大鼠胃組織病理學觀察 取浸洗后的全胃，用10%甲醛溶液固定，沿每只大鼠胃大彎自前胃至幽門取一寬約0.5 cm的全層胃壁，常規(guī)脫水、石蠟包埋、切片（5 μm），然后采用蘇木精-伊紅（HE）染色。光學顯微鏡下觀察大鼠胃組織病理學變化，并對炎癥程度進行評分，評分標準[11]：高倍視野下單個核細胞（包括光鏡下無法區(qū)分的淋巴細胞、漿細胞等）不超過5個，計為0分；慢性炎性細胞較少并局限于黏膜淺層（計算密集程度時應避開淋巴濾泡及其周圍的小淋巴細胞區(qū)，下同），不超過黏膜層的1/3，計為1分；慢性炎性細胞較密集，但不超過黏膜層的2/3，計為2分；慢性炎性細胞較密集，占據(jù)黏膜全層，計為3分。

2.3 復方胃炎膠囊對胃動力障礙模型小鼠胃排空的影響

將60只小鼠隨機分為正常組、模型組、多潘立酮組（50 mg/kg）[12]和復方胃炎膠囊高、中、低劑量組（以生藥量計為 20、10、5 g/kg，分別根據(jù)臨床用量的2、1、0.5倍劑量換算而得），每組10只。禁食不禁水24 h后，均按0.4 mL/只灌胃相應藥液，正常組和模型組小鼠灌胃等體積0.5%CMC溶液。末次給藥50 min后，除正常組外，其余各組小鼠腹腔注射阿托品3 mg/ kg建立胃動力障礙模型，10 min后按0.8 mL/只灌服營養(yǎng)半固體糊（將10 g CMC溶于250 mL生理鹽水中，分別加入奶粉18 g、葡萄糖8 g、淀粉8 g和活性炭末2 g，攪拌均勻，稀釋至300 mL，得到約300 g的黑色半固體糊狀物；冰箱冷藏，用時恢復至室溫）制備小鼠胃動力障礙模型[13]。造模20 min后，脫頸處死小鼠，開腹，結扎胃賁門和幽門，取全胃，用濾紙拭干后稱全胃質(zhì)量，沿胃大彎剪開胃體，洗去胃內(nèi)容物后拭干，稱胃凈質(zhì)量，計算胃內(nèi)殘留率：胃內(nèi)殘留率（%）=（胃全質(zhì)量-胃凈質(zhì)量）/所給營養(yǎng)半固體糊質(zhì)量×100%[14]。

2.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計分析。數(shù)據(jù)以x±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用t 檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

3 結果

3.1 大鼠胃液游離酸度和胃蛋白酶活性測定結果

與正常組比較，模型組大鼠胃液游離酸度和胃蛋白酶活性顯著降低（P<0.05）；與模型組比較，雷尼替丁組和復方胃炎膠囊高劑量組大鼠胃液游離酸度和胃蛋白酶活性顯著升高（P<0.05），復方胃炎膠囊中、低劑量組大鼠胃液游離酸度、胃蛋白酶活性差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。各組大鼠胃液游離酸度和胃蛋白酶活性測定結果見表1。

3.2 各組大鼠胃組織病理學觀察結果

正常組大鼠胃黏膜上皮細胞排列整齊，腺體排列緊密規(guī)則，未見炎性細胞，黏膜無充血、水腫。模型組大鼠胃黏膜上皮排列紊亂，有大量炎性細胞浸潤、淋巴細胞聚集，炎癥評分較正常組顯著升高（P<0.05）。復方胃炎膠囊高劑量組大鼠胃黏膜上皮排列比較整齊，偶有淋巴細胞浸潤，黏膜無充血、水腫，黏膜基層增厚明顯減輕，炎性細胞數(shù)量明顯少于模型組，炎癥評分較模型組顯著降低（P<0.05）。與模型組比較，復方胃炎膠囊中、低劑量組減少了淋巴細胞浸潤和炎性細胞數(shù)量，炎癥評分差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與模型組比較，雷尼替丁組大鼠胃黏膜上皮排列比較整齊，有淋巴細胞浸潤，炎性細胞數(shù)量明顯減少，炎癥評分較模型組顯著降低（P<0.05）。各組大鼠胃組織病理學觀察結果見圖1，炎癥評分結果見表2。

3.3 各組小鼠胃內(nèi)殘留率測定結果

與正常組比較，模型組小鼠胃內(nèi)殘留率顯著升高（P<0.05）；與模型組比較，多潘立酮組、復方胃炎膠囊高劑量組小鼠胃內(nèi)殘留率顯著降低（P<0.05），復方胃炎膠囊中、低劑量組小鼠胃內(nèi)殘留率差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。各組小鼠胃內(nèi)殘留率測定結果見表3。

4 討論

在前期研究中，筆者對復方胃炎膠囊進行了急性毒性實驗考察，發(fā)現(xiàn)復方胃炎膠囊160 g/kg（以生藥量計）灌胃給藥后，雖可顯著增加小鼠脾指數(shù)（P<0.05），但對小鼠心、肝、肺、腎等主要臟器均無明顯影響。解剖肉眼觀察，其主要臟器亦未見明顯異常，說明其安全性較好。

本處方中白芍和丹參共為君藥，其中白芍中的主要有效成分芍藥苷具有抗炎、調(diào)節(jié)免疫、抗病毒等作用，丹參中的主要有效成分丹酚酸B具有抗炎、抗氧化、抗癌等作用[15]。方中甘草有健脾益氣之功效[16]。胃炎病變常為局灶性的，多以竇部小彎側為重，早期的病理變化主要為淺被覆上皮變性，固有膜水腫、充血，進而可出現(xiàn)腺體變短、間距增寬，大量的慢性炎性細胞浸潤，黏膜基層明顯增厚。胃液中含有胃酸、胃蛋白酶等多種成分，胃液中游離酸度降低將會促進胃炎的進展，胃蛋白酶活性的降低將會影響胃的消化功能[7]。

在本研究中，筆者采用一種較為成熟的方法——60%乙醇聯(lián)合去氧膽酸灌胃誘發(fā)大鼠實驗性胃炎[7]，采用阿托品誘發(fā)小鼠胃動力障礙，分別采用臨床常用于治療胃炎的H2受體拮抗藥雷尼替丁和治療消化不良的多巴胺受體阻滯藥多潘立酮作為陽性對照藥。結果表明，復方胃炎膠囊對胃炎模型大鼠具有較好的改善作用，特別是高劑量復方胃炎膠囊，可顯著提高胃炎模型大鼠胃液的游離酸度、升高胃蛋白酶活性，顯著改善胃組織的病理變化；同時，高劑量復方胃炎膠囊對胃動力障礙模型小鼠的胃排空也起到了積極作用，可顯著降低胃動力障礙模型小鼠的胃內(nèi)殘留率。

綜上所述，復方胃炎膠囊中的高劑量可有效降低胃炎模型大鼠胃液游離酸度，升高其胃蛋白酶活性，并可顯著促進胃動力障礙模型小鼠的胃排空，故復方胃炎膠囊具有較好的開發(fā)前景。

參考文獻

[ 1 ] 潘應芳.健脾通絡湯治療慢性萎縮性胃炎的臨床效果觀察[J].臨床醫(yī)學研究與實踐，2018，3（3）：115-116.

[ 2 ] 陸再英.內(nèi)科學[M]. 8版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：382-386.

[ 3 ] 陳灝珠.實用內(nèi)科學[M]. 14版.北京：高等教育出版社，2013：1976-1980.

[ 4 ] 段云燕，成映霞，王強，等.香砂六君子湯對脾胃虛弱型萎縮性胃炎大鼠胃排空功能及胃蛋白酶活性和缺氧誘導因子1α表達的影響[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2016，23（1）：47-51.

[ 5 ] 殷玉靜，劉冬梅，王偉.從毒論治慢性萎縮性胃炎中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究進展[J].山西中醫(yī)，2015，31（6）：61-62.

[ 6 ] 鄭姣妮，劉玲，何道惠.正交試驗優(yōu)化復方胃炎膠囊中藥材的水提工藝[J].中國藥房，2017，28（31）：4438-4440.

[ 7 ] 唐熠，謝子精，李道.復胃膠囊對大鼠實驗性慢性胃炎的作用[J].中藥藥理與臨床，2003，19（1）：32-33.

[ 8 ] 王雨波，余麗梅，姚觀平，等.精制胃樂膠囊促進大鼠乙酸性胃潰瘍修復的作用與機制[J].中成藥，2014，36（7）：1533-1535.

[ 9 ] 常明泉，陳芳，朱建成，等.顛胃酸口服液的消化活力測定[J].中國藥事，2012，26（8）：888-890.

[10] 徐雯，王楠，丁浩然，等.廣藿香對濕阻中焦證大鼠胃腸功能的影響[J].中國中藥雜志，2017，42（23）：4649-4655.

[11] 郭渝新，楊鵬，張三印.復方陳香胃片對慢性胃炎大鼠胃黏膜病理形態(tài)學的影響[J].中藥新藥與臨床藥理，2013，24（3）：244-246.

[12] 陳鎮(zhèn)，夏泉，黃趙剛，等.白術揮發(fā)油對小鼠胃腸功能的影響[J].中國實驗方劑學雜志，2009，15（8）：66-68.

[13] 李偉，鄭天珍，瞿頌義，等.陳皮對小鼠胃排空及腸推進的影響[J].中藥藥理與臨床，2002，18（2）：22-23.

[14] 張慧敏，任虹，何瑤，等.藿香正氣制劑中厚樸不同提取工藝對胃腸活動的影響研究[J].中藥與臨床，2014，5（6）：30-32.

[15] 王風霞，袁捷，謝良友，等.多指標正交優(yōu)選丹參木耳降脂復方提取工藝[J].廣東藥學院學報，2014，30（5）：564- 568.

[16] 郭金秀，劉孟安，王慧凱.中藥胃腸舒片對胃腸動力障礙小鼠胃排空及腸推進影響的實驗研究[J].遼寧中醫(yī)雜志，2010，37（4）：751-752.

（收稿日期：2017-11-07 修回日期：2018-02-05）

（編輯：林 靜）