孫曉巖 韓臨曉 陳博

近年來, 臨床上加強了對基因多態(tài)性和同型半胱氨酸(Hcy)代謝、葉酸的研究, 但受研究方法與研究對象影響后,各研究結(jié)果均在不同程度上存在差異性［1,2］。本研究主要針對東莞市漢族女性MTHFR(hvlenetetrahvdrofolate reductase)和MTRR(methionine synthase reductas)的基因多態(tài)性分布特點進行探究, 以此為該地區(qū)心腦血管疾病與出生缺陷預防方案的制定提供依據(jù), 報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2015年7月～2016年3月在東莞市第三人民醫(yī)院進行備孕、孕前和孕期檢查的漢族女性718例為研究對象, 平均年齡(30.02±1.59)歲。所有女性均自愿簽署知情同意書, 且均接受了口腔黏膜細胞采樣與遺傳檢驗, 將DNA抽提不符合要求的女性排除。

1. 2 方法 所有受檢者進行空腹抽取外周靜脈血5 ml, DNA提取通過柱式抽提試劑盒進行抽提, 提取結(jié)束后并進行DNA濃度測定。MTRR A66G、MTHFR A1298C、MTHFR C677T的基因多態(tài)性采用Mass ARRAY技術(shù)進行SNP分型檢測, 利用MASS ARRAY的引物設計平臺設計PCR引物, 包括一對多重PCR擴增引物及一條MASS EXTEND延時引物。然后進行聚合酶鏈反應, 每個反應體系總體積為5 μl, 1 μl包含濃度為 20 ng/μl的 DNA模板 , 1.8 μl無酶水 , 0.5 μl 10× PCR buffer, 0.4 μl 25 μM MgC12, 0.1 μl 25 μM dNTP Mix, 1 μl 0.5 μM Primer Mix, 0.2 μl 5 U/μl PCR Enzyme。設定反應條件為：95℃2 min, 然后再完成20個循環(huán)的擴增(95℃30 s, 56℃ 30 s, 72℃1 min)與45個循環(huán)的擴增。結(jié)束整個反應過程之后得到的PCR產(chǎn)物經(jīng)過樹脂純化后在Nanodispenser Spectro CHIP芯片上點樣, 然后進行Mass ARRAY 分析, 每個檢測點只需3～5 s,全自動分析, 通過TYPPER4.0軟件分析實驗結(jié)果。

1. 3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計學軟件分析數(shù)據(jù), 采用基因計數(shù)法計算基因頻率, χ2檢驗法完成等位基因頻率、基因型、Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗, 相對風險采用95%可信區(qū)問(CI)表示, α=0.05為檢驗水準。

2 結(jié)果

2. 1 各地區(qū)基因型頻率與頻數(shù)對比 MTRR A66G、MTHFR A1298C、MTHFR C677T分別接受H-w遺傳平衡檢驗之后,發(fā)現(xiàn)其均能和H-w平衡高度符合, 表示該樣本能夠有效代表本區(qū)域群體。本研究對東莞市漢族女性MTHFR、MTRR基因多態(tài)性分布情況與海南、德陽、鄭州、濰坊等4個地方進行對比, MTRR A66G的基因型構(gòu)成和海南對比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05), 和德陽、鄭州、濰坊對比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05), 純合突變基因GG頻率低于海南(P＜0.05)；MTHFR A1298C基因型構(gòu)成和海南、德陽對比, 差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05), 和鄭州、濰坊對比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05), 純合突變基因型CC高于鄭州、濰坊(P＜0.05)；東莞性MTHFR C677T基因型構(gòu)成和海南地區(qū)對比, 差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05), 和德陽、鄭州、濰坊對比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),純合突變基因型TT頻率高于德陽, 低于鄭州、濰坊。見表1。

2. 2 各地區(qū)等位基因頻率與頻數(shù)對比 東莞市漢族女性MTHFR C677T突變等位基因頻率和德陽對比, 差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05), 低于海南, 高于鄭州、濰坊, 差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；MTHFR A1298C突變等位基因頻率和德陽、海南對比, 差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05), 高于濰坊、鄭州, 差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；MTRR A66G突變等位基因頻率和德陽、鄭州、濰坊對比, 差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05), 低于海南差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。濰坊、鄭州、德陽、東莞和海南地區(qū)的MTHFR C677T突變等位基因頻率從北到南遞減。見表2。

表1 各地區(qū)基因型頻率與頻數(shù)對比［n(%)］

表2 各地區(qū)等位基因頻率與頻數(shù)對比［n(%)］

3 討論

妊娠期高血壓綜合征、復發(fā)性流產(chǎn)、先天性心臟病、唇腭裂、神經(jīng)管缺陷等疾病發(fā)展過程中, 血漿Hcy均具有十分重要的作用［3］。受到營養(yǎng)因素與遺傳因素的共同作用之后, 便會促使血漿Hcy水平在一定程度上升高。葉酸代謝中, MTRR與MTHFR屬于兩種關(guān)鍵酶, 編碼酶活性、血漿Hcy濃度、血清和紅細胞葉酸濃度均會受到MTRR A66G、MTHFR C677T和MTHFR A1298C的影響。本研究中, 濰坊、鄭州、德陽、東莞和海南地區(qū)的MTHFR C677T突變等位基因頻率從北到南遞減, 可知對MTRR與MTHFR進行分子流行病學調(diào)查有利于我國深入化的研究出生缺陷病因?qū)W, 基因多態(tài)性地域分布差異在一定程度上反映了我國出生缺陷發(fā)病率南低北高情況。其次, 東莞市漢族女性具有自身獨特的MTHFR和MTRR基因多態(tài)性分布特點, 為此, 制定健康干預方案時, 應該嚴格遵循“因人而異、因地制宜”的原則, 最大程度上對出生缺陷進行有效預防［4-6］。

綜上所述, 東莞市漢族女性具有自身獨特的MTHFR和MTRR基因多態(tài)性分布特點, 要根據(jù)該地區(qū)實際情況制定針對性的預防措施。