穆琳琳 鐘 偉 張海華 南韋肖 張新宇 陳雙雙 李光玉*

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所，特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物分子生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，長(zhǎng)春130112；2.河北科技師范學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院，秦皇島066004)

維生素B2(核黃素)作為機(jī)體代謝所必需的水溶性維生素，在體內(nèi)主要以黃素單核苷酸(FMN)和黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD)2種形式存在，維生素B2活性成分FMN和FAD作為黃素酶類的輔基，廣泛參與體內(nèi)糖、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)的吸收與利用，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，影響動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育[1-2]，促進(jìn)機(jī)體免疫器官的發(fā)育及免疫細(xì)胞的增值、分化和成熟，提高機(jī)體抗氧化能力[3-7]。維生素B2缺乏會(huì)導(dǎo)致懷孕母貂出現(xiàn)死胎現(xiàn)象，但對(duì)公貂生育能力影響較小；維生素B2水平不足時(shí)機(jī)體生長(zhǎng)緩慢，血紅蛋白內(nèi)容物減少，下層絨毛出現(xiàn)灰色或者白色癥狀[8]。維生素B2水平過(guò)高時(shí)會(huì)隨尿液排出體外，一般不會(huì)引起中毒癥狀，過(guò)低則會(huì)出現(xiàn)各種缺乏癥。目前，維生素B2在豬、禽上研究較為廣泛。張建海等[9]研究得出，在飼糧中添加14.4 mg/kg的維生素B2，能顯著提高肉雞的平均日增重，降低料重比，促進(jìn)肉雞的生長(zhǎng)發(fā)育。丹麥毛皮育種協(xié)會(huì)推薦的飼糧維生素B2添加水平為2.0～3.5 mg/kg[10]；NRC(1982)[11]推薦的飼糧維生素B2添加水平為1.5 mg/kg，該添加水平是確保水貂不出現(xiàn)維生素B2缺乏癥狀的最低需要量。因國(guó)內(nèi)外水貂品種不同，飼料組成及結(jié)構(gòu)等均有差異，該推薦添加水平并不適用于我國(guó)養(yǎng)殖的水貂品種。因此，本試驗(yàn)旨在通過(guò)研究飼糧維生素B2添加水平對(duì)水貂生長(zhǎng)性能、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率和氮代謝的影響，以期篩選出水貂飼糧中維生素B2適宜添加水平，為我國(guó)水貂飼養(yǎng)行業(yè)維生素營(yíng)養(yǎng)需要提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取(65±5)日齡、體重[(1 213.38±72.72) g]相近的健康雄性短毛黑水貂96只，隨機(jī)分成6組，保證同一窩出生的水貂不在同一組內(nèi)，以消除遺傳因素給試驗(yàn)帶來(lái)的誤差，每組16個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1只。試驗(yàn)采用單因素隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，設(shè)置6個(gè)維生素B2添加水平梯度，分別為0(Ⅰ組，對(duì)照組)、2.5(Ⅱ組)、5.0(Ⅲ組)、10.0(Ⅳ組)、20.0(Ⅴ組)、40.0 mg/kg(Ⅵ組)。預(yù)試期為7 d，正試期為58 d。動(dòng)物飼養(yǎng)試驗(yàn)在農(nóng)業(yè)部長(zhǎng)白山野生生物資源重點(diǎn)野外科學(xué)觀測(cè)站開(kāi)展。

1.2 試驗(yàn)飼糧與試驗(yàn)材料

以魚(yú)粉、雞肉粉、肉粉、膨化玉米、玉米蛋白粉、豆粕等為主要原料，同時(shí)添加水貂生長(zhǎng)發(fā)育所需的礦物質(zhì)和維生素(不含維生素B2)，根據(jù)NRC(1982)[11]和相關(guān)文獻(xiàn)[12-13]中關(guān)于水貂營(yíng)養(yǎng)需要配制成育成期水貂基礎(chǔ)飼糧，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。試驗(yàn)所用維生素B2購(gòu)自于浙江新和成股份有限公司，有效成分含量≥82.8%。

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)開(kāi)始前，對(duì)水貂籠舍、水盒和飯盆進(jìn)行消毒，并給水貂接種相關(guān)疫苗，每只單籠飼養(yǎng)。由飼養(yǎng)場(chǎng)經(jīng)驗(yàn)豐富的飼養(yǎng)員于每天07:00、14:00各飼喂1次，保證自由采食和充足飲水。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1)預(yù)混料為每千克飼糧提供 The premix provided the following per kg of the diet：VA 10 000 IU，VE 60 mg，VK31.6 mg，VB120 mg，VB610 mg，VB120.1 mg，煙酸 nicotinic 40 mg，泛酸 pantothenic acid 20 mg，葉酸 folic acid 1 mg，生物素 biotin 0.5 mg，膽堿 choline 400 mg，F(xiàn)e 80 mg，Zn 60 mg，Mn 15 mg，Cu 10 mg，I 0.5 mg，Se 0.2 mg，Co 0.3 mg。

2)代謝能為計(jì)算值，其余為實(shí)測(cè)值。ME was a calculated value, while the others were measured values.

1.4 測(cè)試指標(biāo)與方法

1.4.1 生長(zhǎng)性能指標(biāo)

試驗(yàn)期間每天記錄給料量和剩料量，試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束時(shí)對(duì)水貂進(jìn)行稱重，并計(jì)算水貂的平均日采食量、平均日增重和料重比。

1.4.2 消化代謝試驗(yàn)

于2017年8月15日到2017年8月17日進(jìn)行消化代謝試驗(yàn)，共計(jì)3 d，采用全收糞法。采集尿液前向收集桶內(nèi)注入10%的硫酸20 mL用于固氮，后期測(cè)定尿中氮含量。每天收集的糞便稱重后按鮮重的5%加入10%硫酸溶液，并加少量甲苯防腐，保存于-20 ℃?zhèn)溆?。? d的尿液和糞便分別混合均勻后取樣，其中糞便先在80 ℃下殺菌2 h，然后降到65 ℃烘干至恒重，磨碎過(guò)40目篩，制成風(fēng)干樣本，以備實(shí)驗(yàn)室分析。

1.4.3 測(cè)定方法及計(jì)算公式

飼料及糞便干物質(zhì)含量采用105 ℃烘干法，參照GB/T 6435—2006；粗脂肪含量采用索氏抽提法測(cè)定，參照GB/T 6435—2006；飼料、糞便及尿液中粗蛋白質(zhì)含量采用凱氏定氮法測(cè)定，參照GB/T 6435—1994；基礎(chǔ)飼糧中維生素B2含量在農(nóng)業(yè)部特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)植物及產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心采用高效液相色譜法檢測(cè)。

營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率及氮代謝相關(guān)指標(biāo)計(jì)算公式如下：

某種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率(%)=[(該種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)攝入量-糞中該種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)總量)/該種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)攝入量]×100；氮沉積(g/d)=食入氮-糞氮-尿氮；凈蛋白質(zhì)利用率(%)=(氮沉積/食入氮)×100；蛋白質(zhì)生物學(xué)價(jià)值(%)=[氮沉積/

(食入氮-糞氮)]×100。

1.5 數(shù)據(jù)處理

結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，數(shù)據(jù)用Excel 2013進(jìn)行整理并用SAS 9.4軟件中的GLM程序進(jìn)行單因素方差分析，采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異極顯著。

2 結(jié) 果

2.1 飼糧維生素B2添加水平對(duì)育成期水貂生長(zhǎng)性能的影響

由表2可知，飼糧維生素B2添加水平極顯著影響水貂的平均日增重(P<0.01)，顯著影響水貂的末重和料重比(P<0.05)，以Ⅴ組末重、平均日增重最大，料重比最小。Ⅴ組平均日增重極顯著高于Ⅰ組(P<0.01)，顯著高于Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組(P<0.05)，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組之間差異不顯著(P>0.05)。Ⅴ組料重比極顯著低于Ⅰ組(P<0.01)，Ⅵ組顯著低于Ⅰ組(P<0.05)，Ⅴ和Ⅵ組之間差異不顯著(P>0.05)。Ⅴ、Ⅵ組末重顯著高于Ⅰ組(P<0.05)。

表2 飼糧維生素B2添加水平對(duì)育成期水貂生長(zhǎng)性能的影響

同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫(xiě)字母表示差異極顯著(P<0.01)，相同或無(wú)字母表示差異不顯著(P>0.05)。下表同。

In the same column, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), and with different capital letter superscripts mean significant difference (P<0.01), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

2.2 飼糧維生素B2添加水平對(duì)育成期水貂營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響

由表3可知，飼糧維生素B2添加水平極顯著影響水貂粗蛋白質(zhì)消化率和粗脂肪消化率(P<0.01)，對(duì)干物質(zhì)采食量、干物質(zhì)排出量和干物質(zhì)消化率影響不顯著(P>0.05)。飼糧維生素B2添加水平在10.0～40.0 mg/kg時(shí)，粗脂肪消化率隨著飼糧維生素B2添加水平的升高呈上升趨勢(shì)；Ⅵ組粗脂肪消化率最高，Ⅰ組最低，Ⅰ組極顯著低于Ⅱ、Ⅴ和Ⅵ組(P<0.01)，與Ⅳ組差異不顯著(P>0.05)。Ⅴ組粗蛋白質(zhì)消化率最高，極顯著高于Ⅰ組(P<0.01)；飼糧維生素B2添加水平在5.0～20.0 mg/kg時(shí)，粗蛋白質(zhì)消化率隨著維生素B2添加水平的升高而呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。

表3 飼糧維生素B2添加水平對(duì)育成期水貂營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響

2.3 飼糧維生素B2添加水平對(duì)育成期水貂氮代謝的影響

由表4可知，飼糧維生素B2添加水平顯著影響育成期水貂氮沉積、凈蛋白質(zhì)利用率和蛋白質(zhì)生物學(xué)價(jià)值(P<0.05)，對(duì)食入氮、糞氮和尿氮影響不顯著(P>0.05)。隨著維生素B2添加水平增加，氮沉積呈升高趨勢(shì)，以Ⅵ組最高，Ⅰ組最低；Ⅰ組氮沉積顯著低于Ⅴ和Ⅵ組(P<0.05)，與Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組差異不顯著(P>0.05)。Ⅴ組凈蛋白利用率最高，顯著高于Ⅰ和Ⅱ組(P<0.05)，與Ⅲ、Ⅳ和Ⅵ組差異不顯著(P>0.05)。飼糧維生素B2添加水平在0～20.0 mg/kg時(shí)，蛋白質(zhì)生物學(xué)價(jià)值隨著飼糧維生素B2添加水平的升高呈上升趨勢(shì)，以Ⅴ組最高，Ⅴ和Ⅵ組顯著高于Ⅰ組(P<0.05)，與Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組差異不顯著(P>0.05)。

表4 飼糧維生素B2水平對(duì)育成期水貂氮代謝的影響

3 討 論

3.1 飼糧維生素B2添加水平對(duì)育成期水貂生長(zhǎng)性能的影響

維生素B2作為一種具有重要調(diào)節(jié)功能的微量物質(zhì)，能促進(jìn)動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育[14]。王艷輝等[15]研究表明，隨著飼糧維生素B2添加水平的升高，可顯著提高籠養(yǎng)蛋雛鴨的平均日增重，提高生長(zhǎng)性能，降低料重比。張建海等[9]和唐淑珍[16]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加維生素B2能顯著提高肉雞的平均日增重，降低料重比。李紹鈺[17]研究發(fā)現(xiàn)，飼喂含10.5 mg/kg維生素B2的飼糧能顯著提高高溫環(huán)境下肉雞體重，改善飼料利用率。本試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著維生素B2添加水平的增加，育成期水貂末重、平均日增重呈增加趨勢(shì)，料重比呈降低趨勢(shì)，其中以維生素B2添加水平20.0 mg/kg組(Ⅴ組)末重、平均日增重最大，料重比最低，這與上述文獻(xiàn)報(bào)道相一致，說(shuō)明適宜的維生素B2添加水平對(duì)水貂的生長(zhǎng)發(fā)育具有促進(jìn)作用。

3.2 飼糧維生素B2添加水平對(duì)育成期水貂營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響

研究表明，飼糧維生素B2添加水平對(duì)12月齡伊犁馬[18]、生長(zhǎng)獺兔[19]的平均日采食量均無(wú)顯著影響，但對(duì)1～14日齡北京鴨平均日采食量有顯著影響[20]。Barile等[21]研究表明，維生素B2主要吸收部位在小腸，部分在大腸，當(dāng)食入蛋白質(zhì)水解變性后，維生素從腸上皮的刷狀緣狀細(xì)胞膜上釋放出來(lái)，進(jìn)一步參加相應(yīng)的生理過(guò)程。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼糧維生素B2添加水平對(duì)育成期水貂粗蛋白質(zhì)消化率、粗脂肪消化率有極顯著影響，整體隨著添加水平的升高而呈增大趨勢(shì)，這可能與維生素B2的活性成分FAD參與脂肪酸的β-氧化，促進(jìn)脂質(zhì)在線粒體內(nèi)的氧化分解，進(jìn)而提高粗脂肪消化率有關(guān)；粗蛋白質(zhì)消化率的升高可能是由于機(jī)體進(jìn)行生理活動(dòng)時(shí)，ATP隨即水解成腺苷二磷酸(ADP)，此時(shí)受到細(xì)胞能荷影響的氨基酸氧化脫氨過(guò)程中谷氨酸脫氫酶活性大大提高，進(jìn)而加速氨基酸的氧化降解[2]，具體營(yíng)養(yǎng)消化機(jī)制有待于進(jìn)一步探究。在本試驗(yàn)條件下，飼糧維生素B2添加水平在20.0 mg/kg時(shí)水貂可獲得較佳的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率。

3.3 飼糧維生素B2添加水平對(duì)育成期水貂氮代謝的影響

氮代謝指標(biāo)反映動(dòng)物機(jī)體對(duì)飼糧中蛋白質(zhì)消化利用的情況，機(jī)體攝入含氮飼糧，在體內(nèi)分解利用和吸收，一部分氮用于合成相關(guān)蛋白質(zhì)儲(chǔ)存在體內(nèi)，一部分則未被吸收利用，轉(zhuǎn)變成糞氮排出體外，維持體內(nèi)氮代謝的平衡。有關(guān)單胃動(dòng)物氮代謝指標(biāo)隨飼糧維生素B2添加水平變化的報(bào)道較少。周小秋[22]指出，隨著飼糧維生素B2添加水平的提高，蛋白質(zhì)沉積率呈增加趨勢(shì)。在本試驗(yàn)中，隨著飼糧維生素B2添加水平的增加，氮沉積隨之增加，凈蛋白質(zhì)利用率和蛋白質(zhì)生物學(xué)價(jià)值呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì)，這與粗蛋白質(zhì)消化率的趨勢(shì)一致，說(shuō)明維生素B2能促進(jìn)機(jī)體對(duì)于蛋白質(zhì)的吸收利用，后期降低可能原因是維生素B2在一定的范圍內(nèi)具有促進(jìn)氮代謝的作用，超過(guò)這個(gè)范圍會(huì)抑制蛋白質(zhì)吸收利用。

4 結(jié) 論

綜合各項(xiàng)指標(biāo)，飼糧維生素B2添加水平為20.0 mg/kg(飼糧中維生素B2水平為23.35 mg/kg)時(shí)，育成期水貂可以獲得較好的生長(zhǎng)性能及較高的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率、氮利用率。