禽流感(avian influenza,AI)是禽流感病毒(AIV)感染家禽后引起的各種綜合征,從無臨床癥狀感染到呼吸道疾病和產(chǎn)蛋下降,到死亡率接近100%的嚴重全身性疾病不等。根據(jù)禽流感病毒的致病性和毒力的不同,可將其分為高致病性禽流感(HPAI),低致病性禽流感(LMPAI)。高致病性禽流感可導(dǎo)致嚴重的家禽群體發(fā)病和死亡,不僅給家禽養(yǎng)殖業(yè)帶來毀滅型的打擊,還可以不斷地跨種間傳播感染人類,人感染后死亡率高達60%。其中H5N1與H7N9就是近年兩種常見人禽共患禽流感病毒亞型。且H7N9流感病毒已由原來的對禽的低致病性變異為高致病性,自2016年12月~2017年5月,兩廣地區(qū)出現(xiàn)暴發(fā)式禽流感H7N9疫情,并且多地有人感染H7N9的報道。我國決定從2017年秋季起,在家禽全面免疫禽流感H5的基礎(chǔ)上,逐步全面開展H7N9免疫。為了解重組禽流感病毒(H5+H7)二價滅活苗免疫在不同地區(qū)不同養(yǎng)殖場的免疫效果,本試驗團隊于2017年10月,在賀州市隨機選取了4個三黃雞養(yǎng)殖場開展了疫苗免疫與血清抗體檢測試驗。本試驗的完成不僅可以了解賀州市不同地區(qū)三黃雞養(yǎng)殖場的H5及H7亞型禽流感抗體水平,還可以根據(jù)檢測結(jié)果,了解抗體消長規(guī)律,指導(dǎo)養(yǎng)殖場制定合理的免疫程序,為有效的防控禽流感的發(fā)生與流行提供參考依據(jù)。
1.試驗雞群。在賀州市選擇4家飼養(yǎng)水平良好的三黃雞規(guī)?;B(yǎng)殖場,分別標記為A場、B場、C場、D場,全部采用全進全出養(yǎng)殖模式,養(yǎng)殖規(guī)模為9000-27000只。
2.試驗疫苗。重組禽流感病毒(H5+H7)二價滅活疫苗,簡稱(H5+H7)二價滅活苗(下同),為國內(nèi)某廠家生產(chǎn),生產(chǎn)批號為:2017103。
3.檢測試劑。禽流感H5亞型、H7亞型血凝抑制(HI)試驗抗原及標準陽性血清購自哈爾濱維科生物技術(shù)有限責任公司。雞紅細胞混懸液(1%)及磷酸鹽緩沖液(PBS)由本實驗室自行配制。
4.試驗分組與采樣。A、B、C、D四家養(yǎng)殖場雞只均在60日齡時進行第一次免疫,一免后第21 d進行第二次免疫,兩次免疫的免疫劑量均為0.5 ml/羽,采取頸部皮下注射進行免疫接種。各場分別在免疫后第0 d、第15 d、第30 d、第45 d、第60 d隨機選擇60只雞,翅靜脈采血2 ml/羽,分離血清后-20℃保存,統(tǒng)一檢測。
5.抗體測定。檢測方法及結(jié)果判定參照GB/T18936-2003高致病性禽流感診斷技術(shù)進行。
1.H5亞型血清抗體檢測結(jié)果。1500份血清樣品的H5亞型血清抗體檢測結(jié)果見表1和圖1。結(jié)果表明:該疫苗免疫三黃雞后,可較好的刺激機體產(chǎn)生H5 HI抗體,且四個場的HI抗體消長規(guī)律基本一致,其平均抗體水平均呈現(xiàn)隨日齡增加先上升后下降再平穩(wěn)回升的明顯變化。一免后H5 HI抗體迅速上升,在一免后第15 d時,四個場的抗體均可達到平均抗體滴度5.0 log2以上的合格水平。加強免疫后(一免后第21 d),H5 HI抗體迅速升高,該疫苗在加強免疫后第9 d(一免后第30 d)H5 HI抗體水平達到高峰,此時A、B、C、D四個場的H5 HI抗體滴度分別為9.27 log2、6.88 log2、8.15 log2、9.10 log2;到加強免疫后第39 d(一免后第60 d)H5 HI的抗體水平均保持在6.0 log2以上。此外,在一免后第15~60 d期間四個養(yǎng)殖場的抗體陽性率均高于80%。
表1 H5亞型血清抗體的檢測結(jié)果
圖1 不同日齡H5亞型血清抗體平均值的變化曲線
2.H7亞型血清抗體檢測結(jié)果。1500份血清樣品的H7亞型血清抗體檢測結(jié)果見表2和圖2。結(jié)果表明:該疫苗免疫三黃雞后,可較好的刺激機體產(chǎn)生H7 HI抗體,且四個場的HI抗體消長規(guī)律基本一致,其平均抗體水平均呈現(xiàn)隨日齡增加先上升后下降再平穩(wěn)回升的明顯變化。一免后H7 HI抗體迅速上升,在一免后第15 d時,四個場的平均抗體滴度最高可達到7.03 log2。加強免疫后(一免后第21 d),H7 HI抗體迅速升高,該疫苗在加強免疫后第9 d(一免后第30 d)H7 HI抗體水平達到高峰,此時A、B、C、D四個場的H7 HI抗體滴度分別為8.93 log2、6.22 log2、8.28 log2、9.20 log2;到加強免疫后第 39 d(一免后第60 d)H7 HI的抗體水平均保持在4.5 log2以上的合格水平。此外,在一免后第30~60 d期間四個養(yǎng)殖場的抗體陽性率均高于80%。
表2 H7亞型血清抗體的檢測結(jié)果
圖2 不同日齡H7亞型血清抗體平均值的變化曲線
1.禽流感H5亞型血清抗體消長規(guī)律。對檢測結(jié)果的分析表明,一免后第0 d H5抗體平均水平為0,說明在雞60日齡時母源抗體已經(jīng)消失。此時對幼雞進行第一次免疫,21 d后進行第二次免疫,注射疫苗后逐漸誘導(dǎo)機體產(chǎn)生抗體。一免后第15 d抗體滴度快速上升,加強免疫后第9 d(一免后第30 d)抗體水平持續(xù)上升,但上升速率有所下降。第45 d抗體平均水平降至最低,說明一免產(chǎn)生的抗體水平開始下降,二免誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體上升速度不及下降速度。第60 d抗體水平已表現(xiàn)回升,說明二免后產(chǎn)生的抗體上升速度超過了一免產(chǎn)生的抗體的下降速度,家禽總體抗體水平升高,達到保護狀態(tài)。
從結(jié)果來看,一免后第15 d至肉雞出欄(第60 d)的時間段內(nèi),家禽抗體滴度均達到合格標準,說明該免疫程序可有效抵抗禽流感H5亞型病毒的入侵。
2.禽流感H7亞型血清抗體消長規(guī)律。檢測結(jié)果顯示,一免后0 d時H7抗體平均水平為0,說明此時母源抗體已經(jīng)消失。此時對幼雞進行第一次免疫,21 d后進行第二次免疫,注射疫苗后逐漸誘導(dǎo)機體產(chǎn)生抗體。第15 d抗體迅速升高,第30 d4個場的抗體水表現(xiàn)為持續(xù)快速上升,抗體平均滴度已經(jīng)達到6 log2以上,最高為9.2 log2的較高水平。加強免疫后第24 d(一免后第45 d)抗體水平下降至最低,可見二免產(chǎn)生的抗體上升速度還未及一免后產(chǎn)生的抗體下降的速度。第60 d B、C、D場均表現(xiàn)為回升,表明一免產(chǎn)生的抗體持續(xù)下降,二免后產(chǎn)生的抗體逐漸上升至較高水平,可使機體繼續(xù)保持較高的抗體效價,產(chǎn)生有效的抗體保護。
3.H5+H7二價滅活疫苗的免疫探討。
(1)免疫方案的分析。使用該疫苗一免后第15 d時機體H5、H7抗體水平均明顯上升,第15~30 d時抗體上升緩慢,第30 d(90日齡)后抗體開始下降。若沒有進行第二次免疫,抗體水平持續(xù)下降,在出欄前(120日齡)出現(xiàn)疫情的幾率和風險較高。二免后,機體第二次誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體逐漸升高,使得抗體水平停止下降甚至有所升高,在出欄前得到有效的抗體保護。因此,對肉雞進行禽流感二次免疫是必要的;
(2)疫苗的應(yīng)用推廣。此疫苗在三黃雞中對H5、H7均可產(chǎn)生較高的抗體水平,證明免疫效果確實。禽流感病毒既在家養(yǎng)禽類和野生禽類之間相互傳播,又隨候鳥遷徙,將病毒帶到世界各個角落。對于這種傳播迅速的疫情,H5+H7二價滅活疫苗應(yīng)列入強制免疫計劃,由試點到全國應(yīng)用,加強商品禽和種禽的免疫,切實做好生物安全防護等多方面的防控工作。
(3) H5+H7二價滅活疫苗的優(yōu)點。重組禽流感病毒(H5+H7)二價滅活苗屬于全病毒滅活疫苗,具有制備工藝簡單,免疫效果及安全性好、免疫持續(xù)時間長且不會出現(xiàn)毒力返強和變異的優(yōu)點。選擇二價苗可以減少免疫次數(shù),提高免疫效率;
(4)存在問題。試驗免疫程序首免日齡選擇在60日齡,此時雞只體內(nèi)H5及H7抗體均為零。而本試驗未了解幼雞母源抗體的變化,在幼雞母源抗體最低值時到進行第一次免疫后產(chǎn)生合格抗體水平的時間段內(nèi)是否處于保護狀態(tài)未知,因此免疫程序還有待優(yōu)化。同樣在不同的地域,品種不一致的情況下,合理的選擇首免日齡,免疫劑量,免疫方案都是值得研究探討的內(nèi)容。
參考文獻(略)