蔡傳旭 劉曉清 胡海圣 陳希 李璐 孫寶清

1廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院變態(tài)反應(yīng)科（廣州 510120）；2呼吸疾病國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（廣州 510120）；3廣州市番禺中心醫(yī)院檢驗(yàn)科（廣州 511400）

過(guò)敏是一種由免疫系統(tǒng)異常反應(yīng)引起的疾病，TH2介導(dǎo)的對(duì)無(wú)害抗原的異常免疫反應(yīng)是過(guò)敏炎癥反應(yīng)的中心現(xiàn)象[1]。隨著氣候因素和人們生活方式不斷變化，過(guò)敏性疾病的發(fā)病率日趨上升。sPD?L1是程序性死亡分子1配體（programmed cell death?1 ligand?1，PD?L1）的可溶性形式，兩者具有相似的生物活性[2]。sPD?L1能與T細(xì)胞相互作用，傳遞抑制性信號(hào)，減少T細(xì)胞的增殖[3]。sPD?L1可在健康人的血清中檢測(cè)到，且可能在免疫調(diào)節(jié)中起重要作用[4]。據(jù)報(bào)道，sPD?L1在腫瘤細(xì)胞中的過(guò)度表達(dá)，會(huì)導(dǎo)致癌癥逃避宿主免疫系統(tǒng)的攻擊[5]。盡管已經(jīng)認(rèn)識(shí)到癌癥和過(guò)敏反應(yīng)具有復(fù)雜的關(guān)聯(lián)性，但鮮有關(guān)于血清sPD?L1與過(guò)敏性疾病之間相關(guān)性的研究[6]。

1 資料與方法

1.1 一般資料本研究共篩選來(lái)自廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院過(guò)敏性疾病患者55例。此外，招募25名年齡匹配，性別匹配的健康志愿者作為健康對(duì)照組。過(guò)敏性疾病患者診斷根據(jù)ARIA（Aller?gic Rhinitis and its Impact on Asthma）和 GINA（The Global Initiative for Asthma）指南。

1.2 方法實(shí)驗(yàn)流程如圖1所示，抽取靜脈血2 mL于無(wú)添加劑的試管中，室溫靜置1 h待血凝固后1 000×g離心10 min，取上層血清待測(cè)。通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒（PDCD1LG1ELISA，USCN Life Science，Wuhan，China）檢測(cè)血清sPD?L1水平。sPD?L1的最小可檢測(cè)濃度為0.056 ng/mL，測(cè)定范圍為0.156～10 ng/mL。通過(guò)ImmunoCAP系統(tǒng)（Phadia 1000，ThermoFisher Scientific Inc.，Califor?nia，USA）檢測(cè)血清總IgE（tIgE）和屋塵螨特異性IgE（HDM?sIgE）水平。血清tIgE水平的測(cè)定范圍為2 kU/L至5 000 kU/L。屋塵螨特異性IgE的檢測(cè)范圍為0 kU/L至100 kU/L。sIgE抗體濃度以標(biāo)準(zhǔn)化單位kU/L表示。按照sIgE濃度分為0～6級(jí)：＜0.35 kU/L為0級(jí)，≥0.35且＜0.7 kU/L為1級(jí)，≥0.7且＜3.5 kU/L為2級(jí)，≥3.5且＜17.5 kU/L為3級(jí)，≥17.5且＜50 kU/L為4級(jí)，≥ 50且＜100 kU/L為5級(jí)，≥ 100 kU/L為6級(jí)。1～2級(jí)為輕度，3～4級(jí)為中度，5～6級(jí)為重度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法本研究所有數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)均采用IBM SPSS Statistics for Windows 23.0（IBM Corp，Chi?cago，IL，USA）進(jìn)行處理和分析。計(jì)量資料用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間差異比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)量資料用中位數(shù)（范圍）表示，組間差異比較使用參數(shù)秩和檢驗(yàn)。P值＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究人群的一般資料表1總結(jié)了80名受試者的臨床信息，包括25例健康對(duì)照和55例過(guò)敏性疾病患者。55例過(guò)敏性疾病患者包括過(guò)敏性鼻炎（AR）患者18例（32.7%），過(guò)敏性哮喘（AS）患者17例（30.9%），過(guò)敏性鼻炎合并哮喘（AR&AS）患者16例（29.1%）和其他類型過(guò)敏患者4例（7.3%）。各組間性別、年齡、差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 患者與對(duì)照組的基本臨床信息Tab.1 Characteristics of patients and healthy controls

2.2 患者與健康對(duì)照的血清sPD?L1水平對(duì)比研究結(jié)果顯示過(guò)敏性疾病組（1.48±0.08）ng/mL血清sPD?L1水平顯著低于健康對(duì)照組[（2.53±1.37）ng/mL，P＜ 0.001]（圖2A）。在過(guò)敏患者中，過(guò)敏性鼻炎患者（1.79±0.13）ng/mL和過(guò)敏性哮喘患者平均（1.51±0.14）ng/mL血清sPD?L1水平均顯著高于過(guò)敏性鼻炎合并哮喘患者（1.09±0.10）ng/mL（均P＜0.05）。然而，過(guò)敏性鼻炎組和過(guò)敏性哮喘組間血清sPD?L1水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖2B）。

如圖3所示，根據(jù)Youden指數(shù)的最大值（J=1），得到sPD?L1預(yù)測(cè)過(guò)敏性疾病的ROC曲線，其最佳的診斷界限值為1.93 ng/mL，靈敏度和特異性分別為80.0%和72.0%，曲線下面積AUC為0.81（P＜ 0.001）。

圖2 過(guò)敏性疾病組與對(duì)照組的血清sPD?L1水平Fig.2 Serum sPD?L1 levels in healthy controls and allergic patients.Each spot represents one study subject and lines indicate the mean deviation

圖3 ROC曲線預(yù)測(cè)過(guò)敏性疾病的最佳血清sPD?L1診斷濃度Fig.3 ROC curve analysis for the optimal cut?off point of serum sPD?L1 concentration

2.3 血清sPD?L1水平與血清IgE水平之間的相關(guān)性表2總結(jié)了過(guò)敏性疾病組的屋塵螨特異性IgE和總IgE的陽(yáng)性率，結(jié)果顯示過(guò)敏性鼻炎組（279，2.78～2 201 kU/L），過(guò)敏性哮喘組（598，100～2 504 kU/L），過(guò)敏性鼻炎合并哮喘組（561.5，35.7～3 433 kU/L）血清總IgE水平依次增高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在過(guò)敏性鼻炎合并哮喘組中，屋塵螨特異性IgE重度過(guò)敏患者占56.25%（9/16），而過(guò)敏性鼻炎組和過(guò)敏性哮喘組傾向于較低級(jí)別的屋塵螨致敏，重度過(guò)敏分別只有41.18%（7/17）和38.89%（7/18）（圖4A）。

屋塵螨特異性IgE輕度過(guò)敏組血清sPD?L1水平較重度過(guò)敏組明顯升高（P＜0.05），輕度過(guò)敏組血清sPD?L1水平介于輕度過(guò)敏組和重度過(guò)敏組，但組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)圖4B。不同級(jí)別tIgE的血清sPD?L1水平變化與屋塵螨sIgE類似（輕度過(guò)敏組1.82±0.65 ng/mL，中度過(guò)敏組1.53±0.67 ng/mL，重度過(guò)敏組1.34±0.48 ng/mL；圖4B）。此外，過(guò)敏性疾病患者血清tIgE水平與血清sPD?L1水平呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.29，P＜0.038），見(jiàn)圖5。

圖4 血清IgE與sPD?L1水平的關(guān)系Fig.4 sPD?L1 levels within different levels of IgE

3 討論

前期研究已經(jīng)證明，腫瘤會(huì)使血清sPD?L1水平上升[7]，本研究發(fā)現(xiàn)，與健康受試者相比，過(guò)敏性疾病患者血清sPD?L1水平顯著降低（P＜0.001），且診斷過(guò)敏性疾病的最佳診斷臨界值為1.93 ng/mL。由于sPD?L1對(duì)T細(xì)胞的刺激活化和細(xì)胞因子均有抑制作用，筆者推測(cè)血清sPD?L1水平可能代表T細(xì)胞的功能狀態(tài)和機(jī)體的免疫反應(yīng)，癌癥患者血清sPD?L1水平升高，T細(xì)胞免疫功能受抑制，而過(guò)敏性疾病患者血清sPD?L1水平降低，T細(xì)胞功能活躍，這可能也是大部分報(bào)道稱過(guò)敏會(huì)減少腫瘤發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的原因[8]。

圖5 過(guò)敏性疾病患者血清sPD?L1水平與總IgE水平的相關(guān)性分析Fig.5 Correlation between soluble programmed death?1 ligand 1（sPD?L1）and tIgE in the allergy patients（r=-0.29，P=0.038）

眾所周知過(guò)敏性鼻炎和過(guò)敏性哮喘之間有緊密的聯(lián)系，ARIA指南稱之為“一個(gè)氣道，一種疾病”，有足夠理由相信，大部分過(guò)敏性鼻炎合并哮喘是由單獨(dú)的過(guò)敏性鼻炎或過(guò)敏性哮喘發(fā)展而來(lái)[9]。本研究發(fā)現(xiàn)，在過(guò)敏性疾病患者中，相對(duì)與過(guò)敏性鼻炎組和過(guò)敏性哮喘組，過(guò)敏性鼻炎合并哮喘組的血清sPD?L1水平顯著降低（均P＜0.05），而過(guò)敏性鼻炎組和過(guò)敏性哮喘組組間血清sPD?L1水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。哮喘的晚期反應(yīng)，由嗜酸性粒細(xì)胞釋放介質(zhì)引起，其依賴于TH2細(xì)胞的激活，如果T細(xì)胞和PD?L1相互作用，則過(guò)敏反應(yīng)晚期的血清sPD?L1水平會(huì)降低。因此，筆者推測(cè)血清sPD?L1水平可能隨著過(guò)敏性疾病的發(fā)展而下降。

PD?L1的表達(dá)與T細(xì)胞密切相關(guān)，T細(xì)胞是一種抗原呈遞細(xì)胞，其在過(guò)敏反應(yīng)早期引起I型超敏反應(yīng)。該反應(yīng)導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生大量的IgE抗體，這些抗體可以與肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞表面上的IgE特異性受體結(jié)合，一旦與過(guò)敏原接觸，就會(huì)導(dǎo)致肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞釋放炎性化學(xué)介質(zhì)，過(guò)敏性疾病患者的血清IgE水平，可達(dá)正常水平的數(shù)倍[20]。本研究結(jié)果顯示，過(guò)敏性疾病患者血清tIgE水平與血清sPD?L1水平之間呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.29，P=0.038），此外，對(duì)于屋塵螨這種引起呼吸道過(guò)敏最常見(jiàn)的過(guò)敏原，過(guò)敏性鼻炎合并哮喘組的屋塵螨特異性IgE水平，比過(guò)敏性鼻炎組和過(guò)敏性哮喘組更低，這表明sPD?L1在過(guò)敏性疾病的病程進(jìn)展中可能具有保護(hù)作用，然而不清楚sPD?L1的表達(dá)上調(diào)與IgE有沒(méi)有直接關(guān)系。

本研究與既往PD?L1的免疫抑制作用報(bào)道結(jié)果一致。NASIRI等[10]發(fā)現(xiàn)，過(guò)敏性鼻炎患者中血清sPD?L1水平與嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)和鼻炎臨床癥狀評(píng)分呈顯著的負(fù)相關(guān)。KOOL等[11]研究顯示PD?L1在過(guò)敏性氣道炎癥中具有抗炎作用。PICONI等[12]也報(bào)道在免疫治療后PD?L1的表達(dá)顯著升高。PD?L1對(duì)T細(xì)胞的抑制性調(diào)節(jié)早已被報(bào)道過(guò)[13]?？梢酝茰y(cè)，血清sPD?L1水平的變化可能反應(yīng)T細(xì)胞的免疫狀態(tài)。相反，有報(bào)道稱，在過(guò)敏性哮喘中，與血清IgE濃度呈負(fù)相關(guān)的是PD?1而非PD?L1[14]。SINGH等[15]報(bào)道，通過(guò)PD?1/PD?L1相互作用可促進(jìn)Th2應(yīng)答。這些相互矛盾的研究結(jié)果可能歸因于sPD?L1的功能復(fù)雜性?？偠灾狙芯拷Y(jié)果表明，sPD?L1可以通過(guò)抑制T細(xì)胞而抑制過(guò)敏反應(yīng)，防止過(guò)敏的進(jìn)一步發(fā)展，然而sPD?L1在過(guò)敏性疾病中的作用機(jī)制，需深入研究。

這項(xiàng)研究有幾點(diǎn)不足。首先，本研究的樣本量較小，進(jìn)一步研究需加大樣本量。其次，本研究沒(méi)考慮到同時(shí)患有過(guò)敏性疾病和癌癥的患者。另外，本研究的血清免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)，缺乏關(guān)于患者T細(xì)胞免疫功能的數(shù)據(jù)，后續(xù)研究應(yīng)結(jié)合流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。同時(shí)，本研究結(jié)果顯示sPD?L1水平可以減緩過(guò)敏性疾病的進(jìn)展，但sPD?L1對(duì)過(guò)敏性疾病的臨床價(jià)值需進(jìn)一步深入研究。

綜上所述，血清sPD?L1與個(gè)體免疫狀態(tài)密切相關(guān)，可能反映了癌癥與過(guò)敏之間的關(guān)系，并在過(guò)敏性疾病病程的發(fā)展中起重要作用，成為過(guò)敏反應(yīng)的保護(hù)因素。因此，sPD?L1調(diào)節(jié)治療可能成為減緩過(guò)敏疾病研究的一個(gè)新方向。