王曉婉，楊祎琦，王若綺，韓曉東，徐方方，劉 博

(1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院，廣東廣州510006； 2.吉林工程職業(yè)學(xué)院，吉林四平136001)

大鼠是醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究中常用的實(shí)驗(yàn)動物，廣泛應(yīng)用于藥物研究、行為學(xué)研究、腫瘤學(xué)研究及其他急慢性實(shí)驗(yàn)研究。大鼠清醒狀態(tài)下尾靜脈注射是動物實(shí)驗(yàn)中最常用也是難度相對較高的技能操作之一，單人操作更是考驗(yàn)試驗(yàn)者的技能水平。因此，較好的掌握此項(xiàng)技術(shù)也顯得尤為重要。大鼠清醒狀態(tài)下單人尾靜脈注射的成功以大鼠固定、靜脈暴露、進(jìn)針、注射等一系列操作的成功為前提。任何一個環(huán)節(jié)出錯都會導(dǎo)致注射失敗，影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)度及實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。我們在長期實(shí)驗(yàn)動物技能操作過程中，總結(jié)出大鼠清醒狀態(tài)下單人尾靜脈注射的方法及技巧。具體操作方法介紹如下。

1 材料與方法

1.1 材料 1 mL(0.45號，26 G針頭)或2 mL(0.5號，25 G針頭)一次性注射器，大鼠固定器，75%酒精，無菌棉簽、棉球，乳膠手套(圖1. A; B)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動物 SPF級健康雄性SD大鼠10只，體重180～220 g，1.5～2月齡，來源于廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心【SCXK(粵)2013-0002】，由廣東省中醫(yī)藥科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心飼養(yǎng)【SYXK(粵)2013-0094】。按照動物實(shí)驗(yàn)的“3R”原則給予人道主義關(guān)懷。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后開始實(shí)驗(yàn)。

1.3 方法

1.3.1 固定前準(zhǔn)備 將大鼠從籠具中拿出，置于籠具上30 s，輕拖大鼠尾部刺激其排便排尿，減少其在固定過程中的排泄量。

1.3.2 固定 采用大鼠固定器固定大鼠(圖1. B)，待大鼠鉆入固定器中(圖1. C)，將鼠體固定，尾部暴露于固定器外。大鼠尾部左右兩側(cè)及背腹側(cè)的血管清晰可見，每側(cè)均有伴行的動靜脈。其中，左右兩側(cè)靜脈比較易于暴露及固定，為尾靜脈注射首選。進(jìn)針部位一般選擇兩側(cè)尾靜脈下段1/4～1/3處為宜。大鼠尾部表皮角質(zhì)厚硬，操作時，先用75%酒精棉簽以一定力度由近心端至遠(yuǎn)心端反復(fù)擦拭注射部位，既可消毒注射部位，又可軟化表皮使其脫落，還可使血管擴(kuò)張便于辨認(rèn)(圖1. D)。左手拇指在上、中指在下，固定大鼠尾尖部，控制鼠尾角度。食指墊于注射部位下方，輔助調(diào)整進(jìn)針角度。

圖1 大鼠尾靜脈注射操作

A：實(shí)驗(yàn)用品； B：大鼠固定器； C：大鼠自動鉆入固定器； D：酒精棉簽反復(fù)擦拭； E：擠壓尾根部擴(kuò)張血管； F：準(zhǔn)備進(jìn)針； G：進(jìn)針后回抽有回血； H：固定針頭、推注液體； I：按壓止血

1.3.3 進(jìn)針 進(jìn)針前，將尾部稍向下拉，右手輕壓尾根部暫時阻斷血液流通，充分暴露進(jìn)針部位的靜脈血管(圖1. E)。操作者右手持1 mL一次性注射器(0.45號，26 G針頭)，使針頭與靜脈成小于15°夾角，針尖斜面朝上(圖1. F)，對準(zhǔn)血管快速刺入皮膚，待針頭進(jìn)入皮下(斜面完全進(jìn)入皮膚)后，左手食指輔助針尖抬起與血管平行進(jìn)針約0.5 cm，有落空感后，再繼續(xù)進(jìn)針約1 cm。右手回抽注射器見有回血(圖1. G)，則證明針頭已準(zhǔn)確刺入靜脈，輕推無阻力即可開始注射。注射時，拇指在上、食指在下在進(jìn)針點(diǎn)處捏住針頭，防止其從靜脈滑脫(圖1. H)。若回抽無回血或見回血后推注有阻力，則說明針頭未進(jìn)入血管內(nèi)，此時應(yīng)將針頭退回皮下重新進(jìn)針，或退針止血后重新選擇進(jìn)針點(diǎn)注射。注射時，應(yīng)從遠(yuǎn)心端至近心端依次進(jìn)針。一根尾靜脈自遠(yuǎn)心端至近心端注射3次，兩根血管交替進(jìn)行。

1.3.4 注射 尾靜脈穿刺成功后，左手拇指及中指固定進(jìn)針點(diǎn)處針頭，防止針頭滑脫及液體回流，右手將藥液按一定速度緩慢推入。大鼠的尾靜脈注射量一般為0.5～2 mL。嚴(yán)格控制注射速度，不要太快，一般2 mL/min。推注完畢后，操作者左手持醫(yī)用棉球按壓進(jìn)針點(diǎn)(圖1. I)，右手輕退針頭。按壓止血1 min后，將大鼠放回籠具。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

我們對采用經(jīng)驗(yàn)方法對10只健康雄性SD大鼠清醒狀態(tài)下進(jìn)行單人尾靜脈注射，結(jié)果顯示，第1針成功9只，成功率90%；穿刺成功10只，總成功率100%；固定及注射時間平均89 s(表1)。

表1 10只SD大鼠尾靜脈注射完成情況

3 討論

3.1 大鼠的固定 大鼠固定器利用大鼠的鉆孔習(xí)性，讓大鼠自覺鉆入固定器，固定大鼠軀干，露出鼠尾易于操作[1]。使用大鼠固定器固定大鼠，可有效節(jié)省人力，避免操作者被大鼠咬傷，大鼠可保持清醒狀態(tài)，減少對大鼠尾部損傷，減少應(yīng)激反應(yīng)，提高實(shí)驗(yàn)效率，減少誤差[2]。本方法中使用的大鼠固定器為不銹鋼桶狀結(jié)構(gòu)，堅(jiān)固可靠，有無毒、無味、柔韌、耐腐蝕、耐高溫的特點(diǎn)，可在無特定病原體環(huán)境中使用，即可減少應(yīng)激，又可避免抓捕過程中對實(shí)驗(yàn)人員造成的傷害。前端為錐形網(wǎng)狀可視區(qū)，透氣性好，不影響大鼠呼吸，又便于觀察大鼠狀態(tài)。后端為入口，連接以360°轉(zhuǎn)動的帶缺口的圓門，以螺絲固定。大鼠鉆入后，調(diào)整圓門位置，露出尾部，擰動螺絲關(guān)閉圓門并固定，便于對尾部進(jìn)行操作。本方法可單人進(jìn)行大鼠的固定、消毒、注射等一系列操作，不必再另設(shè)輔助者，節(jié)約人力，提高效率，事半功倍。

我們在長期動物實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，固定后的大鼠排便排尿量會增加，影響實(shí)驗(yàn)操作，對實(shí)驗(yàn)環(huán)境造成污染，而輕扯大鼠尾部可刺激排便排尿。故建議在固定大鼠前，輕扯大鼠尾部30 s，刺激其排泄，以減少其在固定過程中的排泄量，保證尾靜脈注射操作的順利進(jìn)行。

3.2 大鼠尾部皮膚及血管處理 關(guān)于血管擴(kuò)張的方法，文獻(xiàn)中常提及用40 ℃～60 ℃溫水浸泡大鼠尾部，達(dá)到軟化表皮，擴(kuò)張血管的作用[3-6]。然而，相關(guān)試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，鼠尾加熱會增強(qiáng)大鼠機(jī)體代謝，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如不慎，更會導(dǎo)致大鼠尾部燙傷，造成損害[7]。且準(zhǔn)備溫水及擦拭過程繁瑣，不建議使用。我們在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，用75%酒精棉簽以一定力度擦拭數(shù)次即可較好的軟化鼠尾表皮并使血管擴(kuò)張，簡單快捷，又不影響大鼠生理狀態(tài)。

3.3 穿刺點(diǎn) 大鼠尾部共有3根靜脈血管，背部及左右兩側(cè)各一根。文獻(xiàn)顯示，左右兩側(cè)靜脈因其易于暴露及固定，成為尾靜脈注射中首選[8]。在試驗(yàn)過程中我們也發(fā)現(xiàn)兩側(cè)血管易于操作，因此，建議選用鼠尾兩側(cè)尾靜脈作為進(jìn)針血管。大鼠尾部下段1/4～1/3 處皮膚角化程度相對較低，易于進(jìn)針，靜脈血管清晰可辨，且大鼠的肌肉骨骼系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)逐漸減少至尾部的末端，而血管大小不減少，故在此處進(jìn)針成功率高[9]。需要注意的是，選擇注射點(diǎn)應(yīng)先尾后根，左右兩側(cè)血管交替進(jìn)針。另外，應(yīng)勤練提高準(zhǔn)確率，同一時間段內(nèi)單根血管連續(xù)注射次數(shù)不得超過3次，以減少對鼠尾的損傷。

以往文獻(xiàn)建議，在尾靜脈注射進(jìn)針過程中，待針尖進(jìn)入皮下后，便使針頭沿血管方向水平進(jìn)針[10-12]。但實(shí)際操作中，針尖進(jìn)入皮下后，靠單手調(diào)整針頭角度進(jìn)針的結(jié)果往往是針尖不易進(jìn)入血管或者扎穿血管，影響后續(xù)操作，尤其對新手來說，更難把握針頭角度。且大鼠尾靜脈細(xì)小、位置表淺，增加了進(jìn)針難度。我們在尾靜脈注射操作過程中發(fā)現(xiàn)，借助墊在注射點(diǎn)下方的左手食指，可更好的調(diào)整針頭方向。左手食指與持針的右手配合引導(dǎo)針頭緊貼尾部皮下，更利于成功進(jìn)針。

另外，針頭在靜脈血管中行進(jìn)時，滑利感非常強(qiáng)烈，且推注藥液時阻力很小。若進(jìn)針非常艱難，但回抽可見少量血液，這說明血管已被扎穿，此時應(yīng)退針止血后，靠近近心端或者對測血管再次進(jìn)針。若推注藥液時阻力很大，則說明藥液進(jìn)入了皮下，可看到尾部皮膚腫脹發(fā)白，此時亦應(yīng)退針止血后重新進(jìn)針。

3.4 推注劑量及速度 大鼠單次尾靜脈注射最大劑量不得超過2 mL，注射速度應(yīng)保持在2 mL/min[13]。如注射過量或速度過快，則會造成大鼠心力衰竭、肺水腫等，嚴(yán)重者導(dǎo)致死亡。此外，在推注過程中應(yīng)緊壓進(jìn)針點(diǎn)及針身，一方面防止注射液流出造成浪費(fèi)，另一方面避免大鼠躁動導(dǎo)致針頭滑脫。

4 結(jié)論

大鼠尾靜脈注射是動物實(shí)驗(yàn)中非常重要的操作技能，有時甚至是試驗(yàn)成功的關(guān)鍵步驟。所以，必須按照正確的方法勤練習(xí)、多體會，才能更好的掌握這門技術(shù)。借助固定器在大鼠清醒狀態(tài)下行單人尾靜脈注射，嚴(yán)格規(guī)定注射部位、進(jìn)針次數(shù)，掌握進(jìn)針技巧，控制給藥劑量及速度，方法簡單易行，省時省力，可操作性強(qiáng)，在動物實(shí)驗(yàn)技能操作中具有較高的應(yīng)用價值，推薦給廣大科研工作者。