郭霞 ，劉麗紅 ，宋治榮 ，李巖 ，楊春霞 ，劉秀梅 ，梁新桃

1.蘭州市計劃生育服務(wù)中心，甘肅蘭州 730000；2.甘肅省中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科，甘肅蘭州 730000；3.蘭州市食品藥品檢驗所，甘肅蘭州 730000；4.蘭州佛慈制藥有限公司質(zhì)量部，甘肅蘭州 730000

孕子保胎膠囊由菟絲子、陳皮等13味中藥組成，自2013年1月—2016年1月門診的312例患者進(jìn)行臨床研究臨床發(fā)現(xiàn)，孕子保胎方在治療不孕癥和保胎方面效果顯著。該研究依據(jù)組方原則、藥材的主要活性成分和主要藥理作用[1,2-6]研制成方制劑膠囊劑，藥材分為菟絲子等9味中藥水提；陳皮等4味中藥醇提兩部分，分別以菟絲子中金絲桃苷含量、陳皮中橙皮苷含量、干膏率為考察指標(biāo)，優(yōu)選處方最佳提取工藝。

1 儀器、藥材與試藥

1.1 儀器

Agilent1260高效液相色譜儀，Agilent C18色譜柱 （4.6 mm×250 mm,5 mm）;ELSD-380 檢測器；BSA224S型十萬分之一電子天平；YZF-6250型臺式真空干燥箱；RE-2000A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

1.2 試劑

金絲桃苷對照品（批號：111521-201708）、橙皮苷對照品（批號：110721-201617）均購自中國食品藥品檢定研究院，含量測定用；甲醇、乙腈為色譜純，三重蒸餾水，其它試劑均為分析純。

1.3 藥材

菟絲子、陳皮 、熟地等13味中藥均購于甘肅冠蘭中藥飲片公司，按《中國藥典》2015年版一部檢驗均符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。

2 提取工藝研究

2.1 水提藥材工藝考察

2.1.1 金絲桃苷含量測定 色譜條件：Agilent C18色譜柱（4.6 mm×250 mm,5 mm）;流動相：乙腈：0.1%磷酸溶液（15∶85）；流速：1.0 mL/min;柱溫：25℃,檢測波長：360 nm;進(jìn)樣量10 μL;理論塔板數(shù)按金絲桃苷計算應(yīng)不低于3 000[1]。

對照品溶液的制備：取金絲桃苷對照品適量（約10 mg）,精密稱定，至250 mL容量瓶中，加甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液。

供試品溶液的制備及測定：取干膏粉約1.3 g,精密稱定，至50 mL容量瓶中，加入80%甲醇40 mL,超聲處理(功率500 W,頻率 40 kHz)0.5 h,放至室溫,定容,搖勻后靜止2 min,取上清液用0.22 μm的微孔濾膜過濾,得供試品溶液[2]。

2.1.2 正交實驗設(shè)計 菟絲子、續(xù)斷等9味藥采用水提取工藝。以水提后的干浸膏得率和金絲桃苷含量為考察指標(biāo)，考察提取加水量、浸泡時間、提取時間及提取次數(shù)4個因素對加水提取效果影響。L9(34)因素水平設(shè)計見表1。

表1 水提因素水平

2.1.3 工藝驗證 對水提藥材菟絲子、續(xù)斷等9味藥按優(yōu)選工藝進(jìn)行驗證（n=3）,測得平均干膏得率并對含量進(jìn)行測定。

2.2 醇提藥材工藝考察

2.2.1 橙皮苷含量測定 色譜條件：Agilent（4.6 mm×250 mm,5 m）;流動相：甲醇：0.1%醋酸溶液（40∶60）；流速：0.8 mL/min;柱溫：25℃,檢測波長：283 nm;進(jìn)樣量10 μL;理論塔板數(shù)按金絲桃苷計算應(yīng)不低于2 000。對照品溶液的制備：取橙皮苷對照品適量（約1 g）,精密稱定，至10 mL容量瓶中，加甲醇制成每1 mL含1.0 mg的溶液。供試品溶液的制備及測定：取干膏粉約0.2 g,精密稱定，至25 mL容量瓶中，加入甲醇適量,超聲處理(功率 500 W,頻率 40 kHz)0.5 h,放至室溫,定容,搖勻后過濾,取濾液用0.22 μm的微孔濾膜過濾,得供試品溶液[8]。

2.2.2 正交實驗設(shè)計陳皮、熟地等4味藥采用醇提取工藝。以醇提后的干浸膏得率和橙皮苷含量為考察指標(biāo)，考察提取的醇濃度、溶劑用量、提取時間及提取次數(shù)四個因素對加醇提取效果影響。L9(34)因素水平設(shè)計見表2。

表2 醇提因素水平

2.2.3 工藝驗證 對醇提藥材陳皮、熟地等4味藥按優(yōu)選工藝進(jìn)行驗證（n=3）,測得平均干膏率并對含量進(jìn)行測定。

3 結(jié)果

3.1 水提取工藝正交試驗結(jié)果

正交試驗結(jié)果（見表2）顯示各因素對提取效率的影響為 A＞D＞C＞B, 其中，A2＞A3＞ A1，B2＞B3＞B1，C3＞C2＞C1，D3＞D2＞D1，直觀分析可判定為 A2B2C3D3。 方差分析結(jié)果（見表3）顯示，因素A，D，C對提取結(jié)果均顯著性影響，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。綜合考慮分析，優(yōu)選出最佳工藝為A2B2C3D3，即加8倍量藥材的水,浸泡1.5 h,提取1.5 h,提取 3次。

表3 水提正交試驗結(jié)果

表4 水提方差分析

3.2 醇提取工藝正交試驗結(jié)果

正交試驗結(jié)果（見表5）顯示各因素對提取效率的影響為 A＞D＞C＞B, 其中，A2＞A1＞ A3，B2＞B1＞ B3，C2＞C3＞ C1，D3＞D2＞ D1，直觀分析可判定為 A2B2C2D3。 方差分析結(jié)果（見表6）顯示，因素A，C，D對提取結(jié)果均顯著性影響，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。綜合考慮分析，優(yōu)選出最佳工藝為A2B2C2D3，即用60%乙醇8倍量藥材的水,提取1.0 h,提取3次。

4 討論

目前國家二胎政策全面放開，許多高齡婦女和習(xí)慣性流產(chǎn)婦女有強(qiáng)烈的生育意愿，而高齡婦女年齡偏高，卵巢儲備功能下降，卵巢產(chǎn)生卵子能力減弱，及伴隨卵子質(zhì)量的下降，進(jìn)而導(dǎo)致不孕癥發(fā)生的患者占不孕癥婦女的約10%；不明原因的習(xí)慣性流產(chǎn)的發(fā)病率為1%。傳統(tǒng)的西醫(yī)治療高齡產(chǎn)婦,主要通過運(yùn)用性激素藥物,促排卵藥物等,但可能出現(xiàn)諸多不良反應(yīng),且療效不佳；對于習(xí)慣性流產(chǎn)的西醫(yī)治療方式：①內(nèi)科疾病治療。②醫(yī)學(xué)助孕。③免疫治療。④子宮病變針對性地治療。⑤孕期針對病因進(jìn)行不同的保胎治療，持續(xù)到超過以往流產(chǎn)的月份。⑥子宮頸內(nèi)口關(guān)閉不全，在孕16～22周時，作宮頸內(nèi)口縫合等方法，對此法治療效果不甚理想。

表5 醇提正交試驗結(jié)果

表6 醇提方差分析

該方為自擬方，為解決西醫(yī)治療的缺陷和不足，該方在古方壽胎丸[9-11]的基礎(chǔ)上進(jìn)行加減研制而成。對312例患者進(jìn)行臨床研究，對已在外或未在該地用藥的112例患者對照觀察。其中孕子保胎方藥（治療組）70例，黃體酮治療組（對照組）42例，引用統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，數(shù)據(jù)均經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理。結(jié)果表明：治療組顯效56例（占80.00%），有效組12例（占17.14%），總有效率68例。對照組顯效9例（占21.43%），有效20例（占47.62%），占總有效率29例（占69.05%），治療組療效明顯優(yōu)于對照組（P＜0.001）。臨床發(fā)現(xiàn)，整個孕期用藥，化驗和B超顯示，胎兒發(fā)育質(zhì)量良好，故證實孕子保胎方用于預(yù)防、治療習(xí)慣性流產(chǎn)及孕后保胎在臨床上已取得了極好的療效。

該研究結(jié)合中醫(yī)理論，張錫純在《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》亦言“男女生育,皆賴腎臟作強(qiáng)…… 腎旺自能蔭胎也。”《女科要旨》引趙養(yǎng)葵言“胎莖之系于脾，猶鐘之系于梁也?！薄捌⒅髦袣舛y(tǒng)血”。脾氣健運(yùn)則血循常道，胎有所養(yǎng)，胎元自固。方以菟絲子、續(xù)斷、桑寄生養(yǎng)血益精壯腰、安胎為君藥；輔以陳皮[15]、白術(shù)[16]等調(diào)脾益氣；佐以柴胡疏肝，白芍柔肝、斂陰養(yǎng)血緩急腹痛；調(diào)補(bǔ)脾腎為主、兼以理氣養(yǎng)肝安心之藥為治療原則。

該研究將結(jié)合中醫(yī)理論，依據(jù)組方原則、藥物理化性質(zhì)及現(xiàn)代藥理研究，將藥材分為兩大部分分別采取水提和醇提兩種形式進(jìn)行提取，綜合上述實驗結(jié)果，同時結(jié)合實際生產(chǎn)情況，確定水提最佳工藝條件為：加8倍量藥材的水,浸泡 1.5 h,提取1.5 h,提取3次；醇提最佳工藝為：60%乙醇8倍量藥材的水,提取1.0 h,提取3次。提取方法可靠，利于大生產(chǎn)需要。

該研究為課題試驗的提取工藝部分探討，在遵循原方，原藥材的成分不變，確保臨床療效的情況下，繼續(xù)研制適宜的服用劑型，克服傳統(tǒng)湯藥服用不便的缺陷，預(yù)將孕子保胎方藥研制為膠囊新制劑，投放市場，為廣大的不孕癥和習(xí)慣性流產(chǎn)患者帶來福音。