王乙茹，白華毅，王桂瑛，楊保和，廖國周，竇舒民，魏麗萍，劉元述，李云輝，程志斌*

（1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)，云南 昆明 650201；2.云南快大多畜牧科技有限公司，云南 玉溪 653100;3.昆明三正生物科技（集團(tuán)）有限公司，云南 昆明 650217；4.云南省西雙版納州勐臘縣農(nóng)業(yè)和科技局，云南 勐臘 666300）

飼用凝結(jié)芽孢桿菌具有飼用乳酸菌（產(chǎn)酸、抑菌）與飼用芽孢桿菌（耐熱、抗逆）的共同優(yōu)勢[1-3]。2013年12月我國農(nóng)業(yè)部頒布的《飼料添加劑品種目錄》規(guī)范凝結(jié)芽孢桿菌可應(yīng)用于生長育肥豬[4-5]。然而，目前凝結(jié)芽孢桿菌應(yīng)用于生長育肥豬飼料中的試驗(yàn)報(bào)道較少[6-7]。這顯然不利于凝結(jié)芽孢桿菌這一新型飼用微生態(tài)制劑的應(yīng)用推廣。

此外，枯草芽孢桿菌是我國飼料工業(yè)與養(yǎng)殖業(yè)推廣最早、使用最廣的飼用微生態(tài)產(chǎn)品[8-10]。當(dāng)前應(yīng)用的飼用微生態(tài)商品往往是多菌種的復(fù)合（組合）產(chǎn)品[11-12]。因此，本試驗(yàn)探索性研究單一或組合使用飼用凝結(jié)芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌對30～60 kg生長豬的效果，為安全飼用微生態(tài)制劑及應(yīng)用方案推廣，奠定科學(xué)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

飼用凝結(jié)芽孢桿菌制劑80×108cfu·g-1，飼用枯草芽孢桿菌制劑200×108cfu·g-1，均由昆明三正生物科技（集團(tuán)）有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

本試驗(yàn)挑選體重相近（30.2±0.3 kg）的杜×長×大（DLY）健康商品閹公豬28頭，隨機(jī)分為4個(gè)處理組，每個(gè)處理組7頭，代謝籠單籠飼養(yǎng)。依據(jù)添加劑使用的不同，試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表1。

表1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3 試驗(yàn)飼糧

試驗(yàn)飼料參照國家農(nóng)業(yè)部《豬飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)NT/T 65-2004》，同時(shí)考慮云南省市場實(shí)際情況，基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表2。試驗(yàn)飼料為顆粒飼料，制粒溫度75℃，由云南快大多畜牧科技有限公司生產(chǎn)。

表2 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平

1.4 飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗(yàn)在云南省祿勸縣畜牧獸醫(yī)總站豬場進(jìn)行。試驗(yàn)期間每天8:00、12:30、18:00定時(shí)飼喂，自由飲水，免疫、消毒、衛(wèi)生等飼養(yǎng)管理按常規(guī)進(jìn)行。飼養(yǎng)試驗(yàn)至對照組平均體重約達(dá)60 kg結(jié)束，試驗(yàn)期42 d。

1.5 測定指標(biāo)

1.5.1 生長性能

測定豬體重、采食量，計(jì)算平均日增重、平均日采食量、飼料增重比等指標(biāo)。

1.5.2 飼料表觀消化率試驗(yàn)

采用內(nèi)源指示劑法測定試驗(yàn)豬對飼料主要營養(yǎng)組分的表觀消化率[13]。試驗(yàn)35 d開始，預(yù)飼期3 d，之后連續(xù)收集4 d糞樣，-20℃保存。待試驗(yàn)結(jié)束后，糞樣統(tǒng)一解凍，于60±3℃烘干，粉碎后待檢測。實(shí)驗(yàn)室分析測定飼料干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、總能等表觀消化率，在云南農(nóng)業(yè)大學(xué)云南省動(dòng)物營養(yǎng)與飼料科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室完成。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SAS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素統(tǒng)計(jì)分析，并進(jìn)行Duncan's多重比較，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 飼用凝結(jié)芽孢桿菌與枯草芽孢桿菌對生長豬生長性能的影響

飼用凝結(jié)芽孢桿菌與枯草芽孢桿菌對生長豬生長性能的影響見表3。

由表3可知，試驗(yàn)組1豬的平均日增重顯著高于其他3個(gè)處理組（P＜0.05），且其他3個(gè)處理組平均日增重差異不顯著（P＞0.05）。試驗(yàn)組1飼料增重比顯著低于其他3個(gè)處理組（P＜0.05），且其他3個(gè)處理組飼料增重比差異不顯著（P＞0.05）。此外，試驗(yàn)全期4個(gè)處理組的末重和平均日采食量差異不顯著（P＞0.05）。

2.2 飼用凝結(jié)芽孢桿菌與枯草芽孢桿菌對生長豬飼料養(yǎng)分表觀消化率的影響

飼用凝結(jié)芽孢桿菌與枯草芽孢桿菌對生長豬飼料養(yǎng)分表觀消化率的影響見表4。

由表4可知，試驗(yàn)組1干物質(zhì)表觀消化率與試驗(yàn)組3差異不顯著（P＞0.05），但顯著高于對照組和試驗(yàn)組2（P＜0.05）。試驗(yàn)組1總能表觀消化率最大（P＜0.05），試驗(yàn)組2最?。≒＜0.05），試驗(yàn)組3與對照組差異不顯著（P＞0.05）。此外，4個(gè)處理組粗蛋白質(zhì)、粗脂肪的表觀消化率指標(biāo)，差異不顯著（P＞0.05）。

表3 飼用凝結(jié)芽孢桿菌與枯草芽孢桿菌對生長豬生長性能的影響

表4 飼用凝結(jié)芽孢桿菌與枯草芽孢桿菌對生長豬飼料養(yǎng)分表觀消化率的影響

3 討論

理論上30～60 kg的生長豬腸道消化生理、免疫系統(tǒng)發(fā)育已較完善，和幼齡仔豬相比較不易發(fā)生飼料消化不良及腹瀉等腸道疾病[14-16]。因此無需在生長豬飼料中添加飼用抗生素及化學(xué)合成抑菌藥物[17-18]。由于飼料原料品質(zhì)不穩(wěn)定、養(yǎng)殖條件及飼養(yǎng)管理水平參差不齊等客觀因素，迫使廣大飼料企業(yè)配方師還是在飼料中使用飼用抗生素或化學(xué)合成抑菌藥物，以保障企業(yè)飼料產(chǎn)品的市場競爭力[2,6]。這顯然不符合未來“減抗、無抗”生豬養(yǎng)殖的發(fā)展趨勢[19-20]。依據(jù)農(nóng)業(yè)部《飼料添加劑品種目錄（2013）》，飼用凝結(jié)芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌應(yīng)用于生長育肥豬飼料的規(guī)范，本試驗(yàn)以桿菌肽鋅為對照組，探索性研究單一或組合添加飼用凝結(jié)芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌，對30～60 kg階段生長豬生長性能的影響，為高效“無抗”豬的養(yǎng)殖飼料提供借鑒方案。

本試驗(yàn)基礎(chǔ)飼糧采用云南地區(qū)的典型商業(yè)飼料，對照組飼糧的桿菌肽鋅添加量為40 g·t-1，符合安全使用規(guī)范[21]?？茖W(xué)考慮試驗(yàn)結(jié)果的可比性，試驗(yàn)組1飼用凝結(jié)芽孢桿菌添加劑量、試驗(yàn)組2飼用枯草芽孢桿菌添加劑量，均設(shè)置為2×106cfu·g-1（全價(jià)配合飼料），以比較觀察兩個(gè)飼用微生態(tài)制劑的實(shí)際養(yǎng)殖效果。在平均日采食量差異不顯著的條件下，單一添加凝結(jié)芽孢桿菌的試驗(yàn)組1豬只平均日增重最高、飼料增重比最低，且兩個(gè)指標(biāo)顯著優(yōu)于添加桿菌肽鋅的對照組。結(jié)果表明，選擇品質(zhì)穩(wěn)定的飼用凝結(jié)芽孢桿菌產(chǎn)品，并在30～60 kg的生長豬飼料中添加量達(dá)2×106cfu·g-1（全價(jià)配合飼料），能夠保障生長豬正常的生長性能。本試驗(yàn)研究結(jié)果與課題組前期的報(bào)道及李建國研究結(jié)果一致[6-7]。凝結(jié)芽孢桿菌在豬腸道內(nèi)增殖、增生的過程中，產(chǎn)生L-乳酸，不僅具有直接殺菌抑菌功效，而且凝結(jié)芽孢桿菌能夠分泌消化酶，有利于補(bǔ)充和提高腸道消化酶，改善飼料轉(zhuǎn)化效率[22-27]。據(jù)此，本試驗(yàn)進(jìn)一步分析了試驗(yàn)豬對飼糧養(yǎng)分的表觀消化率，試驗(yàn)組1飼料干物質(zhì)和總能的表觀消化率兩個(gè)指標(biāo)顯著優(yōu)于對照組。說明在30～60 kg生長豬的一般商業(yè)性顆粒飼料產(chǎn)品中，單一使用飼用凝結(jié)芽孢桿菌2×106cfu·g-1能夠獲得較好的實(shí)際養(yǎng)殖效果。

此外，本試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，總體上添加相同劑量飼用枯草芽孢桿菌（2×106cfu·g-1）的試驗(yàn)組2（單一添加枯草芽孢桿菌）和試驗(yàn)組3（同時(shí)添加枯草芽孢桿菌和凝結(jié)芽孢桿菌）的豬生長性能與對照組差異不顯著，甚至試驗(yàn)組2和試驗(yàn)組3的飼料增重比數(shù)值還略高于對照組。綜合分析可能是以下原因影響了本次試驗(yàn)結(jié)果：飼用微生態(tài)制劑的菌株特性影響使用效果的發(fā)揮。

本試驗(yàn)采用的商業(yè)飼料產(chǎn)品由麥麩、油米糠、DDGS等多種非常規(guī)飼料原料組成，存在有害細(xì)菌、霉菌感染較高的風(fēng)險(xiǎn)。桿菌肽鋅是目前使用最為普遍的飼用抗生素，有較好的抑菌效果，這可能是對照組豬保持較好生長性能的主要原因[21]。研究表明，飼用枯草芽孢桿菌調(diào)控腸道菌群平衡的機(jī)理基于“腸道占位”理論[10,12]。雖有研究表明特定的枯草芽孢桿菌菌株具有抑菌功效，但至今枯草芽孢桿菌分泌的抑菌物質(zhì)及其作用機(jī)理不明確，這也證明并非所有的枯草芽孢桿菌菌株都具有直接抑菌作用[10,28,29]。因此，企業(yè)選用不同枯草芽孢桿菌菌株生產(chǎn)的飼用枯草芽孢桿菌添加劑產(chǎn)品，其效果的差異性顯而易見。因此本次試驗(yàn)的試驗(yàn)組2和試驗(yàn)組3總體生長性能略低于對照組。林維雄等研究飼糧中添加飼用枯草芽孢桿菌1×106cfu·g-1對20～100 kg生長育肥豬的生長性能效果，結(jié)果表明，20～45 kg階段，飼用枯草芽孢桿菌提高了豬的平均日增重，但未改善飼料增重比指標(biāo)；45～75 kg階段與75～100 kg階段，飼用枯草芽孢桿菌對豬的平均日增重及飼料增重比指標(biāo)均無顯著改善效應(yīng)[30]。姜軍坡等進(jìn)一步增加了枯草芽孢桿菌在飼糧中的添加量（10倍），研究飼用枯草芽孢桿菌1×107cfu·g-1對50～80 kg生長育肥豬生長性能的影響，結(jié)果表明，高劑量的飼用枯草芽孢桿菌提高了平均日增重，但也沒有改善飼料增重比[31]。以上試驗(yàn)證明，商業(yè)飼用微生態(tài)制劑的菌株特性影響了不同飼糧條件下的應(yīng)用效果。

不同飼用微生態(tài)制劑之間的協(xié)同效應(yīng)與頡頏效應(yīng)決定了飼用微生態(tài)制劑產(chǎn)品的應(yīng)用效果。與對照組相比，單一添加凝結(jié)芽孢桿菌的試驗(yàn)組1改善了生長豬的生長性能，但同時(shí)添加凝結(jié)芽孢桿菌與枯草芽孢桿菌的試驗(yàn)組3卻未能改善生長豬的生長性能。綜合分析發(fā)現(xiàn)，本試驗(yàn)使用的凝結(jié)芽孢桿菌與枯草芽孢桿菌兩個(gè)菌株之間可能存在頡頏效應(yīng)，這一現(xiàn)象類似飼用抗生素之間的配伍。本試驗(yàn)得到了姚曉紅等和趙鈺等的體外實(shí)驗(yàn)支持，采用牛津杯法幾乎同一時(shí)間研究并報(bào)道了凝結(jié)芽孢桿菌與枯草芽孢桿菌的頡頏效應(yīng)，這與本次動(dòng)物試驗(yàn)的試驗(yàn)組3效果總體低于試驗(yàn)組1相吻合[22-23]。以上結(jié)果進(jìn)一步表明，當(dāng)前市場大量銷售的凝結(jié)芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌、甚至包括其他復(fù)合飼用微生態(tài)制劑產(chǎn)品的組合方案，其確切效果及協(xié)同或頡頏機(jī)理有待試驗(yàn)科學(xué)評估。如果將兩種或多種益生菌簡單組合使用，不科學(xué)考慮多種菌之間的頡頏效應(yīng)，在實(shí)際養(yǎng)殖生產(chǎn)中未必能夠獲得良好的生產(chǎn)效益與經(jīng)濟(jì)效益[32]。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，不添加飼用抗生素及任何化學(xué)合成抑菌藥物的基礎(chǔ)上，生長豬商品全價(jià)顆粒飼料中添加飼用凝結(jié)芽孢桿菌2×106cfu·g-1能夠獲得較好的生長性能，表現(xiàn)在平均日增重與飼料增重比的改善。然而，與使用桿菌肽鋅相比，單一添加同樣劑量的飼用枯草芽孢桿菌、或組合添加枯草芽孢桿菌與凝結(jié)芽孢桿菌，沒有獲得生長性能的進(jìn)一步改善。因此，在充分了解單一飼用微生態(tài)制劑功效的基礎(chǔ)上，深入研究不同益生菌株之間的協(xié)同與頡頏效應(yīng)，不僅具有科學(xué)理論意義，更具商業(yè)應(yīng)用價(jià)值。