許海棠 榮星 何躍娥 仇慧仙 張松躍 任躍 褚茂平 吳蓉洲

川崎病是一種病理改變特點(diǎn)為全身性中小血管炎的疾病，并可累及冠狀動(dòng)脈，主要發(fā)生在5歲以下兒童。目前川崎病分布于全球，其中以亞裔患兒最為常見[1-2]。然而，關(guān)于川崎病的發(fā)病機(jī)制至今尚未闡明，也無冠狀動(dòng)脈損傷的預(yù)測指標(biāo)。8-羥基脫氧鳥苷（8-OHDG）是一種新型氧化應(yīng)激反應(yīng)的生物標(biāo)志物，常用于心血管疾病的檢測。本文收集60例川崎病患兒的臨床資料，以探討其血清8-OHDG水平對川崎病冠狀動(dòng)脈損傷的預(yù)測價(jià)值。

1 對象和方法

1.1 對象 選取2016年1至8月本院收治的60例川崎病患兒為研究對象，其中男44例，女16例；發(fā)病年齡3個(gè)月～9歲；發(fā)病第2周冠狀動(dòng)脈超聲檢查提示冠狀動(dòng)脈損傷17例，冠狀動(dòng)脈正常43例；均符合川崎病的診斷標(biāo)準(zhǔn)。所有患兒發(fā)熱第6～10天給予丙種球蛋白針2g·kg-1·d-1沖擊治療；確診后給予阿司匹林腸溶片30～50mg·kg-1·d-1口服治療，待體溫正常3d后減量至3～5mg·kg-1·d-1；冠狀動(dòng)脈正常者予以阿司匹林維持口服2～3個(gè)月，冠狀動(dòng)脈損傷者予以阿司匹林片持續(xù)服用直至冠狀動(dòng)脈恢復(fù)正常。選取同期住院且年齡匹配的20例發(fā)熱（發(fā)熱時(shí)間5～10d）患兒，其中上呼吸道感染6例，肺炎6例，急性支氣管炎2例，敗血癥4例，手足口病2例。選取年齡匹配的20例健康兒童進(jìn)行對照。所有血清標(biāo)本的采集，家屬均知情同意。

1.2 方法 采用雙抗體夾心ABC-ELISA法檢測3組兒童血清8-OHDG水平，川崎病患兒包括急性期及恢復(fù)期（發(fā)病后3～4周）。采集3ml空腹靜脈血，2%乙二胺四乙酸鈉抗凝，常規(guī)分離血清，-70℃凍存待用。試劑盒購自中國上海西唐生物科技有限公司（規(guī)格96T，批號589320-96S）。并檢測川崎病患兒C反應(yīng)蛋白、WBC、中性粒細(xì)胞比值、AST、白蛋白、腦鈉肽等指標(biāo)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料用表示，兩組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用q檢驗(yàn)。采用多因素logistic回歸分析川崎病患兒發(fā)生冠狀動(dòng)脈損傷的危險(xiǎn)因素；繪制ROC曲線分析血清8-OHDG水平診斷川崎病冠狀動(dòng)脈損傷的效能；利用Pearson相關(guān)分析血清8-OHDG與C反應(yīng)蛋白的相關(guān)性。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組兒童血清8-OHDG水平比較 川崎病患兒急性期血清8-OHDG水平為（57.99±29.24）pg/ml，明顯高于恢復(fù)期的（33.36±19.94）pg/ml（P＜0.05）；亦明顯高于發(fā)熱患兒的（41.85±20.00）pg/ml、健康兒童的（23.42±12.71）pg/ml（均P＜0.05）。川崎病患兒恢復(fù)期血清8-OHDG水平與發(fā)熱患兒、健康兒童比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）；而發(fā)熱患兒血清8-OHDG水平較健康兒童明顯上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 川崎病患兒血清8-OHDG水平與冠狀動(dòng)脈損傷的關(guān)系 川崎病急性期冠狀動(dòng)脈損傷患兒血清8-OHDG水平為（70.33±28.78）pg/ml，明顯高于冠狀動(dòng)脈正?；純旱模?3.63±28.42）pg/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.3 川崎病患兒發(fā)生冠狀動(dòng)脈損傷影響因素分析 經(jīng)單因素分析，發(fā)現(xiàn)川崎病患兒血清C反應(yīng)蛋白、WBC、中性粒細(xì)胞比值、AST、白蛋白、腦鈉肽、8-OHDG水平均與冠狀動(dòng)脈損傷有關(guān)（均P＜0.05），見表1。將以上7個(gè)變量納入多因素logistic回歸分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)血清WBC（OR=1.472，95%CI：1.023～2.118，P＜0.05）、C 反應(yīng)蛋白（OR=1.080，95%CI：1.014～1.149，P＜0.05）、8-OHDG（OR=1.534，95%CI：1.016～2.717，P＜0.05）均是川崎病患兒發(fā)生冠狀動(dòng)脈損傷的影響因素。

表1 影響川崎病患兒發(fā)生冠狀動(dòng)脈損傷的單因素分析

2.4 血清8-OHDG水平診斷川崎病冠狀動(dòng)脈損傷的效能分析 血清8-OHDG水平診斷川崎病冠狀動(dòng)脈損傷的截?cái)嘀禐?5.40pg/ml，靈敏度為0.82，特異度為0.58，AUC為0.763，ROC曲線見圖1。

2.5 川崎病患兒血清8-OHDG與C反應(yīng)蛋白的相關(guān)性分析 川崎病患兒血清8-OHDG與C反應(yīng)蛋白呈正相關(guān)（r=0.507，P＜0.05）。

圖1 川崎病患兒冠狀動(dòng)脈損傷血清8-OHDG診斷的ROC曲線

3 討論

川崎病是一種以彌漫性、全身性血管炎為主要病變的急性發(fā)熱出疹性小兒疾病，主要發(fā)生在5歲以下嬰幼兒。目前認(rèn)為川崎病是一種免疫介導(dǎo)的血管炎，屬于自身免疫性疾病。冠狀動(dòng)脈損傷是川崎病常見且很難處理的一種并發(fā)癥，嚴(yán)重影響患者預(yù)后，目前尚無相關(guān)預(yù)測指標(biāo)。近年來報(bào)道川崎病發(fā)病機(jī)制的相關(guān)研究包括遺傳學(xué)說、感染學(xué)說、超抗原學(xué)說、免疫細(xì)胞異?；罨瘜W(xué)說、細(xì)胞因子及炎癥介質(zhì)學(xué)說、血管內(nèi)皮功能紊亂學(xué)說、基質(zhì)金屬蛋白酶9學(xué)說[3-4]。目前有學(xué)者發(fā)現(xiàn)氧化應(yīng)激伴隨炎癥反應(yīng)參與川崎病發(fā)生、發(fā)展[5-7]。8-OHDG是目前國際上公認(rèn)的一種評價(jià)DNA氧化損傷和氧化應(yīng)激狀態(tài)的新型敏感指標(biāo)[8]。它在活性氧簇（ROS）引起DNA氧化損傷修飾過程中產(chǎn)生，表現(xiàn)為人體細(xì)胞受外源性物質(zhì)刺激產(chǎn)生過量的ROS，ROS準(zhǔn)確地攻擊DNA中的鳥嘌呤（dG），使得脫氧鳥苷氧化為8-OHDG，在特異性DNA修復(fù)酶作用下，8-OHDG被剪切清除，經(jīng)腎臟以原型排出。筆者前期小樣本研究發(fā)現(xiàn)川崎病患兒急性期血清8-OHDG水平較其恢復(fù)期、發(fā)熱患兒、健康兒童均明顯升高，從而推測氧化應(yīng)激可能參與川崎病的發(fā)病機(jī)制[9]；但是關(guān)于血清8-OHDG水平對川崎病冠狀動(dòng)脈損傷的預(yù)測價(jià)值尚不清楚。

本研究加大樣本量，對60例川崎病患兒的臨床資料進(jìn)行分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)川崎病患兒的急性期血清8-OHDG水平明顯高于發(fā)熱患兒及健康兒童，再次證實(shí)氧化應(yīng)激可能參與川崎病的發(fā)病機(jī)制。經(jīng)多因素logistic回歸分析，發(fā)現(xiàn)血清WBC、C反應(yīng)蛋白、8-OHDG水平均是川崎病患兒發(fā)生冠狀動(dòng)脈損傷的影響因素。Kobayashi等[10]研究認(rèn)為C反應(yīng)蛋白較高者冠狀動(dòng)脈瘤發(fā)生率明顯升高，且川崎病復(fù)發(fā)率與C反應(yīng)蛋白呈正相關(guān)。Mori等[11]研究表明C反應(yīng)蛋白是川崎病合并巨大冠狀動(dòng)脈瘤的危險(xiǎn)因素。亦有研究表明經(jīng)過靜脈丙種球蛋白治療后，C反應(yīng)蛋白仍較高的患兒易合并冠狀動(dòng)脈損傷[12]。Kobayashi等[10]研究認(rèn)為C反應(yīng)蛋白是川崎病患兒發(fā)生冠狀動(dòng)脈瘤的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。川崎病急性期炎癥反應(yīng)劇烈，WBC升高且與血管炎癥反應(yīng)程度呈正相關(guān)。Zhang等[13]研究發(fā)現(xiàn)川崎病合并冠狀動(dòng)脈病變的患兒WBC明顯高于無冠狀動(dòng)脈病變者。江瑩子等[14]研究證實(shí)WBC、C反應(yīng)蛋白是川崎病發(fā)生冠狀動(dòng)脈損傷的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)血清8-OHDG水平診斷川崎病冠狀動(dòng)脈損傷的截?cái)嘀禐?5.40pg/ml，靈敏度為0.82，特異度為0.58，AUC為0.763；指出血清8-OHG水平也能預(yù)測川崎病合并冠狀動(dòng)脈損傷。筆者認(rèn)為炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激反應(yīng)在川崎病血管炎發(fā)病過程中可能起如下作用：受炎癥刺激物作用，內(nèi)皮細(xì)胞受損從而引發(fā)炎癥反應(yīng)；TNF-α誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)黏附分子，促進(jìn)炎癥細(xì)胞向炎癥部位遷移；炎癥細(xì)胞釋放炎癥介質(zhì)及細(xì)胞因子，刺激肝臟產(chǎn)生C反應(yīng)蛋白；炎癥因子促使炎癥細(xì)胞中的NAD（P）H氧化酶活化，導(dǎo)致快速產(chǎn)生大量ROS。此外，炎癥因子誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生和釋放NO，而NO是一種不穩(wěn)定自由基，易變?yōu)檫^氧亞硝酸鹽；而過氧亞硝酸鹽非常敏感，其強(qiáng)氧化活性能直接使血管組織失活。NAD（P）H氧化酶在內(nèi)皮細(xì)胞膜上與黃嘌呤氧化酶系統(tǒng)反應(yīng)并引起花生四烯酸級聯(lián)反應(yīng)，產(chǎn)生促炎物質(zhì)如白三烯并產(chǎn)生ROS[15]。在炎癥反應(yīng)過程中產(chǎn)生的氧自由基，能使體內(nèi)氧化反應(yīng)增強(qiáng)，同時(shí)進(jìn)一步加強(qiáng)氧化及炎癥間的連鎖反應(yīng)。可見，川崎病的發(fā)生與發(fā)展是炎癥和氧化應(yīng)激共同作用的結(jié)果。

綜上所述，血清8-OHDG水平是川崎病患兒發(fā)生冠狀動(dòng)脈損傷的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，可作為早期預(yù)測川崎病冠狀動(dòng)脈損傷的標(biāo)志物。