楊大龍，嚴(yán)相平，冷柏榕

（江蘇省藥物研究所有限公司，江蘇 南京 210009）

酚麻美敏片為復(fù)方制劑，含對乙酰氨基酚、鹽酸偽麻黃堿、氫溴酸右美沙芬、馬來酸氯苯那敏，常用于解熱鎮(zhèn)痛、消除鼻部充血、鎮(zhèn)咳和抗過敏[1－9]。對氨基酚是對乙酰氨基酚的重要有關(guān)物質(zhì)，毒性較大，毒性靶器官為腎臟、血液和中樞神經(jīng)系統(tǒng)，可引起高鐵血紅蛋白血癥和腎損傷，具有基因毒性，可致畸[10－11]。國內(nèi)外藥典均將對氨基酚作為含對乙酰氨基酚藥物中的重要雜質(zhì)進行控制，原料中限度僅為0.005%，制劑中限度為0.1%[12－15]。鑒于本品中對乙酰氨基酚的用量較大，有必要將對氨基酚作為指標(biāo)雜質(zhì)進行檢查。本研究中建立了測定酚麻美敏片中對氨基酚的含量，專屬性強，靈敏準(zhǔn)確，為更好地控制藥品質(zhì)量提供了方法。

1 儀器與試藥

儀器：LC－2010A型高效液相色譜儀（日本島津公司）；BT25型電子天平（十萬分之一，賽多利斯公司）。

試藥：酚麻美敏片（上海強生制藥有限公司，批號為150708658）；對乙酰氨基酚對照品（批號為100018－201409，純度為 99.9% ），對氨基酚對照品（批號為100802－201203，純度為 100.0%），鹽酸偽麻黃堿對照品（批號為171237－200807，純度為99.9%），氫溴酸右美沙酚對照品（批號為 100201－201204，純度為94.8%），馬來酸氯苯那敏對照品（批號為100047－200606，純度為98.0%），均購于中國食品藥品檢定研究院；甲醇（色譜純，Honeywell），水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Cosmosil C8柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：磷酸鹽緩沖液（磷酸氫二鈉8.95 g，磷酸二氫鈉3.9 g，加水溶解至1 000 mL，加10%四丁基氫氧化銨 12 mL）－甲醇（95 ∶5）；檢測波長：245 nm；流速：0.6 mL/min；柱溫：25 ℃；進樣量：20 μL。

2.2 溶液制備

取對氨基酚對照品適量，精密稱定，用甲醇－水（10∶90）溶解并稀釋制成質(zhì)量濃度為20 μg/mL的對照溶液。取酚麻美敏片細(xì)粉適量，精密稱定（約相當(dāng)于對乙酰氨基酚0.2 g），置10 mL容量瓶中，用甲醇－水（10∶90）溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得供試品溶液。按酚麻美敏片中處方比例稱取鹽酸偽麻黃堿、氫溴酸右美沙酚、馬來酸氯苯那敏3種成分，照供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗：按擬訂色譜條件，分別取2.2項下3種溶液各20 μL注入液相色譜儀，測定，記錄色譜圖，詳見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

檢測限確定：取對氨基酚對照品適量，精密稱定，用甲醇－水（10∶90）溶解并稀釋制成質(zhì)量濃度為0.2 g/L的貯備液，逐級稀釋，以信噪比為3∶1時測得的檢測限為 0.2 ng。

線性關(guān)系考察：取檢測限項下貯備液，稀釋制系列質(zhì)量濃度溶液，按擬訂色譜條件測定，以進樣質(zhì)量濃度（C）對峰面積（A）進行回歸，得回歸方程A=5.97×104C－1.06 ×104，r=0.999 4（n=6）。結(jié)果表明，對氨基酚質(zhì)量濃度在0.04～19.88 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗：取同一對照品溶液，按擬訂色譜條件連續(xù)進樣6次，記錄色譜圖。結(jié)果峰面積的RSD為1.06%（n=6），表明儀器精密度良好。

加樣回收試驗：取檢測限項下對氨基酚貯備液稀釋，制得質(zhì)量濃度為0.02 g/L的溶液，作為對照品溶液。另取本品研細(xì)的粉末適量（約相當(dāng)于對乙酰氨基酚0.2 g）共9份，置10 mL容量瓶中，再分別加入檢測限項下對氨基酚貯備液 0.8，1.0，1.2 mL 各 3 份，以甲醇－水（10∶90）為流動相溶解并稀釋至刻度，作為供試品溶液。分別取對照品溶液及供試品溶液20 μL，按擬訂色譜條件注入液相色譜儀測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 對氨基酚加樣回收試驗結(jié)果（n=9）

2.4 樣品含量測定

取本品細(xì)粉200 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，用甲醇 －水（10 ∶90）溶解，定容，取續(xù)濾液 20 μL 注入液相色譜儀，以外標(biāo)法按峰面積計算對氨基酚的含量。結(jié)果批號分別為7K132，8A002，8B043的樣品中對氨基酚相對百分含量分別為0.0001%，0.0001%，0.0002%。

3 討論

3.1 限量確定

參考2015年版《中國藥典（二部）》[12]對乙酰氨基酚各劑型中對氨基酚的限量規(guī)定，本研究中確定的限量為：對氨基酚不得超過對乙酰氨基酚標(biāo)示量的0.1%。

3.2 色譜條件選擇

2015年版《中國藥典（二部）》中對乙酰氨基酚中對氨基酚含量測定的色譜條件為以辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，磷酸鹽緩沖液（取磷酸氫二鈉8.95 g，磷酸二氫鈉3.9 g，加水溶解至1 000 mL，加10% 四丁基氫氧化銨溶液12 mL）－甲醇（90∶10）為流動相，檢測波長為245 nm，柱溫為40℃。由于酚麻美敏片成分復(fù)雜，在該色譜條件下，對氨基酚出峰較快，難與氫溴酸右美沙酚分離。故在藥典條件基礎(chǔ)上，對色譜條件進行了優(yōu)化。

有機相比例及pH選擇：甲醇比例為10%時，對氨基酚與馬來酸氯苯那敏分離不佳，降低甲醇至5%，兩者可達到基線分離；水相pH增高，對氨基酚的保留時間增加，與馬來酸氯苯那敏分離度增加，考慮到色譜柱的耐受性，選擇水相的pH為8.0。

離子對試劑濃度影響：通過比較水相中每1 000 mL磷酸鹽緩沖中分別加入6，12，24 mL 10%四丁基氫氧化銨的流動相下的色譜圖，發(fā)現(xiàn)離子試劑在6～24 mL范圍內(nèi)，對氨基酚的色譜行為幾乎沒有影響，故不改變離子對試劑的濃度。

柱溫確定：藥典采用柱溫為40℃，試驗發(fā)現(xiàn)降低柱溫會增加對氨基酚在色譜柱中的保留，與馬來酸氯苯那敏分離度增加。經(jīng)試驗，在25℃時分離良好，故采用室溫。