劉錫軍，才 鳳，肖春瑩

（1.遼寧中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，遼寧 沈陽 110032； 2.遼寧省食品檢驗檢測院，遼寧 沈陽 110015）

視疲勞是臨床常見病、多發(fā)病，發(fā)病率逐年升高。祖國醫(yī)學稱視疲勞為“肝勞”，認為是肝腎精虧、肝血不足，目失濡養(yǎng)所致。相關(guān)資料表明，應(yīng)用中醫(yī)藥治療視疲勞具有良好的前景。?；撬崾且环N特殊的氨基酸，是人體必不可少的一種營養(yǎng)元素[1]。眼藥中大都含有?；撬?，可強化角膜的自我修復(fù)能力，對抗眼疾[2－3]。牛磺酸是由中藥中提取的一種有效成分，在內(nèi)科中作為解熱、抗炎和強肝利膽藥，不良反應(yīng)極少[4－5]。復(fù)方?；撬岬窝蹌┦怯膳；撬?、鹽酸萘甲唑啉、維生素B6、馬來酸氯苯那敏組方，具有無色、無味、無毒副作用等特點，原料容易獲得，且外源性的牛磺酸能順利地通過晶體細胞膜，無需載體，且不消耗能量，對于維持眼的代謝功能十分重要，臨床主要用于防治近視和眼疲勞。本研究中分別觀察了該滴眼液與萘撲維滴眼液對小鼠腸系膜微循環(huán)的影響和大鼠抗眼過敏作用，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

藥物：復(fù)方?；撬岬窝垡海ㄟ|寧省藥物研究院自制，規(guī)格為每支10 mL），主方為?；撬?、鹽酸萘甲唑啉、維生素B6、馬來酸氯苯那敏，含量分別為2%，1%，0.5%（以?；撬岷坑嫞?；空白溶劑為透明質(zhì)酸鈉和氯化鈉；萘撲維滴眼液（山東正大福瑞達制藥有限公司，規(guī)格為每支10 mL），主方為鹽酸萘甲唑啉、馬來酸氯苯那敏、維生素B12，含量為0.02%（以鹽酸萘甲唑啉計）。

試劑：腎上腺素（上海禾豐制藥有限公司，批號為20030702）；卵清蛋白（美國 Sigmag公司，批號為041008）；烏拉坦（上海山浦化工有限公司，批號為030315）；硫酸鋁鉀（國藥試劑集團）；DL－二硫基蘇糖醇（美國Sigmag公司，批號為020606）；偶氮藍（國藥集團化學試劑有限公司，批號為20030531）；無水硫酸鈉（北京化工廠，批號為000701）；丙酮（北京北化精細化學有限責任公司，批號為051016）。以上試劑均為分析純。

動物：昆明種小鼠，體質(zhì)量18～22 g，60只，雌雄各半，合格證號為 SCXK（遼）2003 －008。Wistar大鼠，體質(zhì)量180～220 g，30只，雌雄各半，合格證號為SCXK（遼）2003－012。所有動物均由沈陽藥科大學動物室提供，自由采食和攝水。均嚴格符合眼科與視覺研究中使用動物的科學聲明。所有手術(shù)均在全身麻醉情況下進行，肌內(nèi)注射1.25 g/kg烏拉坦，盡量減少其痛苦。

儀器：顯微鏡（重慶光電儀器有限公司）；BJ－2000型微循環(huán)（四川成都泰盟科技有限公司）；UV－1601型紫外分光光度儀（Shimadzu公司）；離心機（金壇市榮華儀器制造有限公司）；電子秒表（深圳市泛華亞精密工具儀器公司）。

1.2 方法

1.2.1 對小鼠腸系膜微循環(huán)的影響[6－8]

分組：將雌雄各半小鼠隨機分為5組，空白對照組、萘撲維組、大劑量組（復(fù)方?；撬岬窝垡?%）、中劑量組（復(fù)方?；撬岬窝垡?%）、小劑量組（復(fù)方?；撬岬窝垡?0.5% ），每組12只。

造模：取小鼠腹腔注射烏拉坦1.25 g/kg麻醉，開腹，輕取小腸一段放微循環(huán)觀察架上，顯微鏡下（40×）觀察。將血管粗細、血流速度相近的腸系膜毛細血管置顯微鏡視野中央，滴腎上腺素 0.03 mL（0.015 mg），待毛細血管血流停止后，立即局部滴藥0.1 mL，記錄滴藥后至毛細血管中血液開始流動的時間為循環(huán)恢復(fù)時間。分別測定各組對循環(huán)恢復(fù)時間的影響，滴藥體積均為0.1 mL。

1.2.2 抗眼過敏作用[9－12]

分組：將雌雄各半Wistar大鼠隨機分為5組，空白對照組、萘撲維組、大劑量組、中劑量組、小劑量組，每組6只。

造模：各組大鼠均腹腔注射卵清蛋白磷酸鹽緩沖液1 mL（含卵清蛋白 100 g，硫酸鋁鉀 20 mg）免疫。14 d后，各眼滴1 mol/LDL－二硫基蘇糖醇溶液20 μL，以消除結(jié)膜黏液屏障，提高攻擊效果。15 min后，鼠尾靜脈注射偶氮藍（每100 g體質(zhì)量1.25 mg）溶液1 mL，并立即用微量加樣器，取10%卵清蛋白磷酸鹽緩沖液10 μL滴眼攻擊。于攻擊前3 h開始給藥，30 min 1次，每次滴0.05 mL，共滴眼 4 次。攻擊后 30 min，放血，處死大鼠，剜出眼瞼、結(jié)膜和眼球，去除脂肪，置入5 mL硫酸鈉－丙酮浸液中振蕩，24 h后離心，吸取上清液，采用分光光度計在620 nm波長處比色，即得光密度值（OD）。

1.3 統(tǒng)計學處理[13]

數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差（）表示，行t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 對小鼠腸系膜微循環(huán)的影響

結(jié)果見表1?？梢?，空白對照組循環(huán)恢復(fù)時間為3.53 min，各給藥組循環(huán)恢復(fù)時間縮短至1.18～2.03 min，與空白對照組比較均有顯著性差異（P＜0.01），大劑量組作用明顯強于萘撲維組（P＜0.05），表明該藥局部應(yīng)用可顯著改善局部微循環(huán)。

表1 各組小鼠腸系膜微循環(huán)比較（n=12）

2.2 對大鼠偶氮藍滲出量的影響

結(jié)果見表2?？梢?，各給藥組對偶氮藍滲出量抑制率為24.3% ～59.1%，與空白對照組比較均有顯著性差異（P＜0.05），且大劑量組作用明顯強于萘撲維組（P＜0.01）。結(jié)果表明，復(fù)方?；撬岬窝垡焊摺⒅?、低劑量均能明顯抑制偶氮藍的滲出量，具有明顯的抗眼過敏作用。

表2 各組大鼠偶氮藍滲出量比較（±s，n=6）

表2 各組大鼠偶氮藍滲出量比較（±s，n=6）

注：與空白對照組比較，*P ＜0.05，**P ＜0.01。

組別OD 抑制率（%）0.419 ±0.072 0.188 ±0.050**0.172 ±0.045**0.225 ±0.046**0.317 ±0.124*空白對照組萘撲維組大劑量組中劑量組小劑量組55.3 59.1 46.6 24.3

3 討論

根據(jù)模型的發(fā)展，證候動物分為生化模型、病理模型、病理生理模型，模型的成功與否多是通過動物機體的生物化學、細胞酶學、激素水平、神經(jīng)因子、基因組學、蛋白組學等相關(guān)指標的測定結(jié)果來判斷，有時所測指標并不能解釋或不能完全解釋中醫(yī)證候的變化。因此，建立或有效反映生物表征的動物模型，使中醫(yī)臨床研究和病理學研究緊密結(jié)合起來，可促進中醫(yī)癥－證研究的快速發(fā)展。

?；撬崾且环N特殊的氨基酸，為含硫氨基酸，也存在于動物體內(nèi)，具有多種藥理學活性，具有自由基清除劑作用，在維持正常眼功能方面發(fā)揮著重要作用，?；撬崛狈墒挂暰W(wǎng)膜產(chǎn)生病理改變，甚至導(dǎo)致失明。

本研究結(jié)果顯示，復(fù)方?；撬岬窝垡嚎擅黠@改善小鼠腸系膜微循環(huán)作用，對大鼠具有明顯的抗眼過敏作用，且與萘撲維滴眼液的作用較接近，表明復(fù)方牛磺酸滴眼液具有改善局部微循環(huán)和抗眼過敏作用。