張圣潔,景霞

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院藥學(xué)部,江蘇 南京 210008)

小兒腹瀉病是一種以夏秋季發(fā)病為主、3周歲以下兒童居多的常見疾病。臨床中主要以便質(zhì)稀薄如水樣、排便次數(shù)多為典型癥狀。病情發(fā)展迅速，如不及時(shí)治療易耽誤最佳治療時(shí)機(jī)，可引起不同程度脫水、電解質(zhì)及酸堿平衡的紊亂，進(jìn)而引發(fā)兒童休克甚至危及生命。遷延不愈亦可造成營養(yǎng)流失、免疫力低下，影響兒童正常生長發(fā)育[1-2]。由于小兒的消化系統(tǒng)尚未發(fā)育成熟、機(jī)體防御抵抗疾病能力差，造成小兒腹瀉的外來刺激復(fù)雜多樣，主要常見因素有：飲食；病毒、細(xì)菌、寄生蟲；濫用藥物；過敏因素等。常規(guī)的大便檢查往往無特殊發(fā)現(xiàn)，且抗菌消炎類西藥無特殊針對性，濫用還易導(dǎo)致腸道菌群失調(diào)，加重病情[3]。中醫(yī)認(rèn)為，小兒臟腑易感外邪，脾運(yùn)不佳，飲食不節(jié)，且泄瀉主要病位在脾胃兩臟，因而針對兒童的治療方法應(yīng)以調(diào)理脾胃為原則[4-5]。消化止瀉方為南京市兒童醫(yī)院專家多年經(jīng)驗(yàn)方，由廣木香、炒陳皮、炒蒼術(shù)、薏苡仁、六神曲及焦山楂組成。蒼術(shù)具醒脾助運(yùn)，疏化水濕之功，與消積開竅的焦山楂，消食下氣的六神曲配伍助運(yùn)效果更佳，廣木香、陳皮均有理氣添濕之功效，薏苡仁最擅于健脾滲濕止瀉[6-7]。諸味藥相配健脾和胃、消食止瀉，表里諸癥自除。因湯藥諸多不便，劑型改良后制成消化止瀉口服液[8-9]，用于治療食欲不振，癥結(jié)積滯，惡心嘔吐，大便溏薄，舌苔膩厚等癥。臨床應(yīng)用多年，效果顯著。為了更好地研究消化止瀉口服液的產(chǎn)品質(zhì)量[10]，本文采用了薄層色譜法，建立了制劑中炒陳皮、炒蒼術(shù)、廣木香、薏苡仁、焦山楂的定性鑒別方法，以有效控制制劑的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

精密電子分析天平(德國Sartorius)；紫外線分析儀(上海勤科)；超聲提取器(深圳云奕)；薄層色譜加熱器(天津同普)；臺式高速冷凍離心機(jī)(美國熱電)；硅膠G板(批號 20130208、20140108，青島海洋化工廠)；陳皮對照藥材(批號 120969—201109)、蒼術(shù)對照藥材(批號 120932—200405)、木香對照藥材(批號 120921—201309)、薏苡仁對照藥材(批號 121254—201203)、山楂對照藥材(批號 121626—201001)均購自中國藥品生物制品檢定所；消化止瀉口服液為南京市兒童醫(yī)院藥學(xué)部自制(批號 121015、131216、140909)；陰性對照溶液自制；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1炒陳皮的薄層鑒別量取消化止瀉口服液10 mL，加乙酸乙酯5 mL，充分振搖，待靜置分層后，將萃取所得乙酸乙酯層分離并蒸干，殘?jiān)蛹状? mL，收集后即得供試品；量取未含有炒陳皮的樣品10 mL，采用上述方法制備陰性對照；另取陳皮對照藥材1 g，加甲醇10 mL，超聲30 min，過濾，濾液備用，即得對照藥材溶液。

點(diǎn)樣管吸取上述三個(gè)批號供試品5 μL，陰性對照5 μL，對照藥材2 μL，分別平行點(diǎn)于薄層板上，以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(6∶4∶0.5∶0.5)為展開劑，充分飽和展開缸之后放入薄層板，展距達(dá)8 cm后夾出晾干，置紫外光(365 nm)下[11]?？梢钥闯鑫挥谥虚g的三條供試品色譜，在與最左側(cè)的對照藥材色譜平行位置上，有相同熒光斑點(diǎn)，最右側(cè)陰性對照無同樣斑點(diǎn)。見圖1。

圖1 消化止瀉口服液炒陳皮薄層鑒別(1為陳皮對照藥材；2為批號131216供試品；3為批號140909供試品；4為批號121015供試品；5為陰性對照溶液)

2.2炒蒼術(shù)的薄層鑒別量取消化止瀉口服液10 mL，加乙酸乙酯5 mL，振蕩，靜置分層后，過濾，分離出乙酸乙酯層，收集后即得供試品；量取未含有炒蒼術(shù)的陰性樣品10 mL，采用上述方法制備陰性對照；另取蒼術(shù)對照藥材0.8 g，加水煎煮1 h，濾過后將濾液按照供試品的處理方法同法制成對照藥材溶液。

點(diǎn)樣管吸取上述三個(gè)批號供試品5 μL、陰性對照5 μL、對照藥材2 μL，分別平行點(diǎn)于薄層板上，以石油醚(30～60℃)-乙酸乙酯(10∶0.5)為展開劑，待充分飽和展開缸之后放入薄層板，展距達(dá)8 cm后夾出晾干，置紫外光燈(365 nm)下。從圖2可以看出位于左邊的三條供試品色譜，在與第4條對照藥材色譜平行位置上，有相同熒光斑點(diǎn)，最右側(cè)陰性對照無同樣斑點(diǎn)。

2.3廣木香的薄層鑒別量取消化止瀉口服液60 mL，加石油醚(60～90 ℃)10 mL，密塞，振蕩后，靜置4 h后，過濾，分離出石油醚層，收集后即得供試品；量取未含有廣木香的陰性樣品60 mL，采用上述方法制備陰性對照；另取木香對照藥材1 g，加入石油醚(60～90 ℃)10 mL，超聲30 min，濾過，取濾液，即得對照藥材品溶液。

點(diǎn)樣管吸取上述三個(gè)批號供試品5 μL、陰性對照5 μL，對照藥材2 μL，分別平行點(diǎn)于薄層板上，以環(huán)己烷-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1.2)[3]的上層溶液為展開劑，此處相對藥典方法略微增大甲酸比例，從而使展開劑極性增大，較好地減輕了拖尾現(xiàn)象，待充分飽和展開缸之后放入薄層板，展距達(dá)8 cm后夾出晾干，噴1%香草醛硫酸顯色，加熱待斑點(diǎn)清晰，置日光下，從圖3可以看出，最左側(cè)的三條供試品色譜，在與第4條對照藥材色譜平行位置上，有相同清晰藍(lán)色斑點(diǎn)，最右側(cè)陰性對照無同樣斑點(diǎn)。

圖2 消化止瀉口服液炒蒼術(shù)薄層鑒別(1為批號121015供試品；2為批號131216供試品；3為批號140909供試品；4為蒼術(shù)對照藥材；5為陰性對照溶液)

圖3 消化止瀉口服液廣木香薄層鑒別(1為批號121015供試品；2為批號131216供試品；3為批號140909供試品；4為木香對照藥材；5為陰性對照溶液)

2.4薏苡仁的薄層鑒別量取消化止瀉口服液10 mL，加乙酸乙酯5 mL萃取，振蕩，靜置分層后，過濾，分離出乙酸乙酯層，收集后即得供試品；量取未含有薏苡仁的陰性樣品10 mL，采用上述方法制備陰性對照；稱取薏苡仁對照藥材1 g，加乙酸乙酯10 mL，超聲30 min，過濾后的濾液即為對照藥材溶液。

點(diǎn)樣管吸取上述三個(gè)批號供試品5 μL、陰性對照5 μL對照藥材2 μL，分別平行點(diǎn)于薄層板上，以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯-乙酸(10∶3∶0.1)為展開劑，待充分飽和展開缸之后放入薄層板，展距達(dá)8 cm后夾出晾干，置紫外光燈(365 nm)[12]下。從圖4可以看出，左側(cè)的三條供試品色譜，在與第4條對照藥材色譜平行位置上，有相同熒光斑點(diǎn)，最右側(cè)陰性對照無同樣斑點(diǎn)。

圖4 消化止瀉口服液薏苡仁薄層鑒別(1為批號121015供試品；2為批號131216供試品；3為批號140909供試品；4為薏苡仁對照藥材；5為陰性對照溶液)

2.5焦山楂的薄層鑒別量取消化止瀉口服液50 mL，5 000 r·min-1離心10 min，取沉淀加5 mL甲醇超聲10 min，14 000 r·min-1離心5 min，過濾，分離收集上清液即得供試品。量取未含有焦山楂的陰性樣品50 mL，采用上述方法制備陰性對照；稱取山楂對照藥材1 g，加甲醇10 mL，超聲30 min，過濾后的濾液即為對照藥材溶液。

點(diǎn)樣管吸取上述三個(gè)批號供試品5 μL、陰性對照5 μL、對照藥材2 μL，分別平行點(diǎn)于薄層板上，以石油醚(30～60 ℃)-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(9∶2.5∶1∶0.5)為展開劑，待充分飽和展開缸之后放入薄層板，展距達(dá)8 cm后夾出晾干，噴10%硫酸乙醇顯色，置紫外光燈(365 nm)下。從圖5可以看出，中間三條供試品色譜，在與最左側(cè)對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，同樣有一淺一亮兩處熒光斑點(diǎn)在相鄰位置，最右側(cè)陰性對照無同樣斑點(diǎn)。

3 討論

目前中藥制劑存在的安全性問題尤為突出，中藥的配伍中有效成分相互作用，毒性等問題都是研究中所要面對的。過去的許多中醫(yī)經(jīng)驗(yàn)方都欠缺一套完整的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系，或者僅憑對質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)概念粗淺的認(rèn)識簡單的做了初步的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)。中藥制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)亟待得到提升和完善，才能使患者用藥的安全性得到基本的保障。為了提高我院傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)方消化止瀉口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并且制訂出規(guī)范的定性質(zhì)量控制方法，本實(shí)驗(yàn)在前期實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上對消化止瀉口服液中主要成分炒陳皮、炒蒼術(shù)、廣木香、薏苡仁和焦山楂五味藥材進(jìn)行了薄層鑒別研究。

圖5 消化止瀉口服液焦山楂薄層鑒別(1為山楂對照藥材；2為批號121015供試品；3為批號131216供試品；4為批號140909供試品；5為陰性對照溶液)

研究結(jié)果顯示色譜圖中各成分之間分離效果好，特征斑點(diǎn)清晰，與陰性對照組差異明顯。藥品處理方法簡便，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好。由于制劑工藝中包含了煎煮、醇沉和水沉等方法，使得藥材中的諸多揮發(fā)性成分以及大極性的組分都被去除，考慮到此因素，若要對消化止瀉口服液中主要藥材的成分進(jìn)行薄層鑒別就需要選擇合適的萃取試劑和展開劑。在薏苡仁、炒蒼術(shù)和炒陳皮三種藥材的薄層鑒別的預(yù)實(shí)驗(yàn)中[13-14]，比較了多種極性試劑對供試品不同的處理方法后，最終確定以乙酸乙酯萃取供試品為最佳方案。在此條件下可以同時(shí)對此三種藥材中主要成分進(jìn)行提取，降低了實(shí)驗(yàn)的繁瑣程度，大大提高了效率。

在焦山楂的薄層鑒別中，由于藥材本身的炮制工藝影響以及后期在合劑制備過程中水煎煮等過程的作用，使山楂中的部分不溶于水成分嚴(yán)重流失。藥典中山楂的的鑒別方法以熊果酸為對照品，由于制備工藝的因素影響，制劑中脂溶性成分含量較少，未鑒定出該成分。國內(nèi)外對山楂的薄層鑒別方法較少[15-16]，本實(shí)驗(yàn)前期參照文獻(xiàn)[17]曾采用乙酸乙酯來萃取供試品來鑒別焦山楂，但卻無法在本薄層鑒別研究中重現(xiàn)此方法，推測不同的山楂炮制品中成分存在較大差異。因此最終在焦山楂的鑒別中采用了離心，甲醇溶解沉淀的方法制備供試品。用沉淀法得到的樣品，有兩處清晰斑點(diǎn)相對應(yīng)，方法簡便，易于操作?？蔀閺?fù)雜制劑工藝中山楂的鑒別提供參考。炮制品的制備工藝比較復(fù)雜，若在薄層鑒別中選擇藥典中規(guī)定的對照品相比較，則無法對應(yīng)的可能性較大。同時(shí)，若要篩選出單一有效成分進(jìn)行對照也有一定難度，因此選擇對照藥材則更為適合。此外，廣木香的展開劑在藥典中薄層鑒別方法的基礎(chǔ)上稍作改動，將展開劑環(huán)己烷-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)更改為環(huán)己烷-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1.2)，甲酸比例略微增大，從而使展開劑極性增大，較好地減輕了拖尾現(xiàn)象，將特征性斑點(diǎn)能更好地與供試品及對照藥材中其他干擾成分分開。綜上，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為提高我院自制制劑消化止瀉口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升提供了可靠的參考依據(jù)。