潘麗麗，安崇惠，李 明，江 帆

(1.貴州工業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院 化學(xué)與材料工程學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 551400；2.貴陽(yáng)青青生物科技有限公司，貴州 貴陽(yáng) 550001；3.貴州師范大學(xué) 貴州省山地環(huán)境信息系統(tǒng)與生態(tài)環(huán)境保護(hù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽(yáng) 550001)

芊玖舒膠囊是貴陽(yáng)青青生物科技有限公司根據(jù)《脾胃論》的葛花解酲湯及明朝《普濟(jì)方》中的“葛花丸”為基礎(chǔ)方化裁而成，使用葛根、枳椇子、烏梅等六味藥食兩用藥材，通過(guò)現(xiàn)代生物提取純化和制劑手段研發(fā)的一種膠囊劑保健食品，具有抗氧化、滋補(bǔ)肝臟等功效，能改善長(zhǎng)期大量飲酒導(dǎo)致的化學(xué)性肝損傷。本研究以總黃酮、葛根素含量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法，以加水量、提取時(shí)間、提取次數(shù)為考察因素，篩選芊玖舒膠囊的水提取工藝，為優(yōu)化制備工藝提供參數(shù)依據(jù)，以提升該產(chǎn)品的質(zhì)量，保障其功效穩(wěn)定。

1 儀器與試藥

RE-2000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)；SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)；KQ-500DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；電子天平ALC-210.4(賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司)；DK-98-ⅡA電熱恒溫水浴鍋(天津市泰斯特儀器有限公司)；DFT-200手提式高速萬(wàn)能粉碎機(jī)；98-1-B型電子調(diào)溫電熱套(天津市泰斯特儀器有限公司)；LC-20A高效液相色譜儀(日本島津公司)；Cary-100紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(美國(guó)瓦里安有限公司)；LC-20A高效液相色譜儀(日本島津公司)。

葛根素對(duì)照品(批號(hào)110752-200410，中國(guó)藥品生物制品檢定所)；蘆丁(批號(hào)100080-200707，中國(guó)食品藥品檢定研究院)；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純；HPLC用水為樂(lè)百氏純凈水，其余用水為實(shí)驗(yàn)室自制超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 藥材吸水率考察

將六味藥材都粉碎成粗粉，按處方比例混合均勻。取藥材混合物約100 g，精密稱(chēng)定，共三份。分別加水500 mL，充分振搖后，放置24 h，浸泡至透心，濾過(guò)，再稱(chēng)取每份藥材質(zhì)量，按式1計(jì)算吸水率，結(jié)果見(jiàn)表1，可知藥材的吸水率約為2倍，故在第一次煎煮時(shí)，應(yīng)多加藥材2倍量的水。

(式1)

表1 藥材粗粉吸水率考察

2.2 提取工藝條件的篩選

表2 提取因素水平表

以水作為提取溶劑，采用正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)考察提取工藝參數(shù)，選擇加水量、提取時(shí)間、提取次數(shù)三個(gè)影響因素，每個(gè)因素設(shè)3個(gè)水平，按L9(34)正交表(見(jiàn)表2)安排試驗(yàn)。在工藝研究中，以功效成分總黃酮含量、葛根素含量作為提取工藝篩選的評(píng)價(jià)依據(jù)，并進(jìn)行綜合評(píng)分，將總黃酮、葛根素的權(quán)重系數(shù)分別定為50、50，綜合評(píng)分Z=(X/Xmax×50+Y/Ymax×50)。利用綜合評(píng)分值采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，從而篩選出最佳水提工藝，結(jié)果見(jiàn)表3、表4。

總黃酮的測(cè)定方法：參照《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范(2003年版)》[1]中“保健食品中總黃酮的測(cè)定”。葛根素的測(cè)定方法：參照《GB/T 22251-2008 保健食品中葛根素的測(cè)定》[2]。

表3 正交試驗(yàn)結(jié)果

注：綜合評(píng)分Z=(X/Xmax×50+Y/Ymax×50)。

表4 綜合評(píng)分值方差分析

注：F0.05(2，2)=19.000；F0.01(2，2)=99.000。

由表3中直觀分析結(jié)果可知，影響提取效率的主次順序?yàn)椋築>A>C，即提取時(shí)間>加水量>提取次數(shù)，提取時(shí)間的影響最大；最佳水提工藝為A1B1C2，即加6倍量水，提取2次，每次1 h。表4方差分析結(jié)果則表明，加水量、提取時(shí)間、提取次數(shù)對(duì)提取效果均無(wú)顯著性影響(P>0.05)。所以結(jié)合藥材吸水率、工業(yè)大生產(chǎn)的實(shí)際要求，從節(jié)約成本的角度考慮，最終確定較優(yōu)提取工藝為：葛根、枳椇子、大棗、烏梅、砂仁、甘草揀選，粉碎成粗粉，加8倍量水浸泡1 h后，加熱煎煮1 h，濾過(guò)，藥渣再加6倍量水，煎煮1 h。

2.3 提取工藝驗(yàn)證

為驗(yàn)證上述試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，按已確定的工藝，分別取1個(gè)處方量藥材，進(jìn)行三批產(chǎn)品提取工藝驗(yàn)證，結(jié)果見(jiàn)表5，可知該提取工藝穩(wěn)定、合理可行，具有重現(xiàn)性和可操作性。

表5 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，產(chǎn)品配方中葛根富含的葛根素、大豆苷、染料木苷等異黃酮類(lèi)物質(zhì)，具有維持心血管穩(wěn)定、抗氧化、解酒保肝等作用[3]；枳椇子含有山奈酚、洋芹素、二氫楊梅素、槲皮素等多個(gè)黃酮類(lèi)化合物，具有抗肝纖維化、抗脂質(zhì)過(guò)氧化、利尿、降壓等作用[4-5]；大棗含有蘆丁、槲皮素、當(dāng)藥黃素等黃酮類(lèi)化合物，具有抗氧化、鎮(zhèn)靜、舒張血管等作用[6]；甘草分離得到的黃酮類(lèi)化合物包括甘草素、異甘草素、甘草查爾酮A/E等，具有抑菌、保肝、抗病毒、抗腫瘤等作用[7]；烏梅含有檸檬素-3-O-鼠李糖苷、山柰酚-3-O-鼠李糖苷、染料木素等多種黃酮類(lèi)化合物，具有抗肝纖維化、抗菌消炎、抗疲勞等作用[8-10]；砂仁含槲皮苷、異槲皮苷[11]。綜合考慮配方中各味藥材的有效成分特性、芊玖舒膠囊功效和生產(chǎn)實(shí)際，選擇總黃酮、葛根素含量作為芊玖舒膠囊提取工藝的考察指標(biāo)是科學(xué)合理的。選用純水作為提取溶劑，與有機(jī)溶劑相比，更加安全、經(jīng)濟(jì)、環(huán)保，具有吸收快、生物利用度高等優(yōu)點(diǎn)，可提高產(chǎn)品工藝的質(zhì)量可控性。但芊玖舒膠囊為復(fù)方制劑，成分復(fù)雜，其提取效果尚需結(jié)合功能學(xué)試驗(yàn)和人體試食試驗(yàn)進(jìn)一步研究。