尹念春 ，李春 ，魯志平 ，黃平全 ，鐘飛 ，譚春青

（1.四川省遂寧市農(nóng)業(yè)局，四川 遂寧 629000；2.四川省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 成都 610041；3.成都農(nóng)業(yè)科技職業(yè)學(xué)院，四川 溫江 611130；4.四川省蓬溪縣畜牧食品局，四川 蓬溪 629100）

豬偽狂犬?。≒R）是由豬偽狂犬病毒（PRV）引起的一種高度接觸性傳染病，是危害全球養(yǎng)豬業(yè)的重大傳染病之一。成年豬多呈隱性感染，通常引起妊娠母豬流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎，產(chǎn)弱仔，新生仔豬伴有嘔吐、腹瀉及震顫等神經(jīng)癥狀，15日齡內(nèi)的仔豬死亡率高達(dá)100%[1-2]。為了有效控制PR流行，特別是從源頭控制PR，我們?cè)谇捌赑R流行病學(xué)調(diào)查研究的基礎(chǔ)上，在遂寧地區(qū)選擇7個(gè)規(guī)模化種豬場(chǎng)開展PR免疫凈化試驗(yàn)。

1 材料

1.1 儀器 扁桃體活體采樣器；10 mL一次性采血管；美國Bio-Rad iMarkerTM酶標(biāo)儀；德國Eppendorf微量移液器；凱達(dá)TDZ4-WS和TGL20MB低速、高速冷凍離心機(jī)；美國BIO-RAD T100 PCR儀，美國BIO-RAD SUB-CELL電泳儀，美國BIO-RAD GEL DOC EZ凝膠成像系統(tǒng)。

1.2 試劑盒 武漢科前PRV抗體檢測(cè)試劑盒；北京世紀(jì)元亨PRV PCR檢測(cè)試劑盒。

2 方法

2.1 現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查 在遂寧地區(qū)選擇7個(gè)規(guī)?；N豬場(chǎng)，重點(diǎn)調(diào)查豬場(chǎng)規(guī)模、豬場(chǎng)基礎(chǔ)設(shè)施建設(shè)（動(dòng)物防疫條件）、飼養(yǎng)管理、防疫制度建設(shè)、防疫措施落實(shí)情況，重點(diǎn)了解本場(chǎng)后備種豬的健康狀況等。

2.2 采樣 采集已免疫PR疫苗3周的仔豬（對(duì)應(yīng)于檢測(cè)中的生產(chǎn)母豬）的血清和扁桃體，檢測(cè)PR病原及免疫抗體水平；全群采集免疫后的種公豬和后備母豬的血清和扁桃體，檢測(cè)PR病原及免疫抗體水平，每半年采集一次，全群連續(xù)檢測(cè)3次；空懷期生產(chǎn)母豬在免疫后分三期全群采樣檢測(cè)PR抗原及免疫抗體水平，優(yōu)先選擇有過產(chǎn)死胎、弱胎或仔豬成活率低的母豬進(jìn)行采樣檢測(cè)。先后在7個(gè)種豬場(chǎng)累計(jì)采集血清樣品7126份，扁桃體樣品5176份，應(yīng)用ELISA試劑盒檢測(cè)3批（次），應(yīng)用PCR檢測(cè)組織樣品3批（次）。

2.3 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

2.3.1 PRV抗體檢測(cè) 按照武漢科前PRV抗體檢測(cè)試劑盒說明書操作。

2.3.2 PRV病原檢測(cè) 按照北京世紀(jì)元亨PRV PCR試劑盒說明書操作，提取DNA，配制PCR反應(yīng)液，電泳后觀察結(jié)果。

2.4 制定凈化方案 按照前期調(diào)查及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果，綜合評(píng)價(jià)豬場(chǎng)PR流行的影響因素及流行強(qiáng)度，制定科學(xué)的凈化方案。

3 結(jié)果

3.1 豬場(chǎng)基本情況 所選7個(gè)規(guī)模化種豬場(chǎng)的養(yǎng)殖規(guī)模適中（母豬存欄小于1000頭），豬場(chǎng)建設(shè)符合動(dòng)物防疫法規(guī)定要求，飼養(yǎng)管理和防疫制度運(yùn)行較規(guī)范，后備種豬健康狀況良好（表1）。

表1 豬場(chǎng)基本情況表

3.2 凈化期間的檢測(cè)

3.2.1 PRV抗體ELISA檢測(cè)結(jié)果 結(jié)果顯示：經(jīng)過一年半的免疫程序調(diào)整和加強(qiáng)免疫，7個(gè)種豬場(chǎng)的PR抗體平均合格率為90.48%。其中，種公豬和生產(chǎn)母豬的抗體水平明顯高于仔豬和后備母豬（表2）。

3.2.2 PRV病原PCR檢測(cè)結(jié)果 結(jié)果顯示：經(jīng)過一年半的檢測(cè)凈化，共淘汰感染帶毒豬105頭，7個(gè)種豬場(chǎng)4個(gè)豬群的PRV平均感染率由凈化實(shí)施前的3.8%（67/1 762） 逐漸降到 1.38%（27/1 952）、0.75%（11/1462）；種公豬、后備母豬、仔豬的感染率由凈化實(shí)施前的 0.46%（1/219）、5.14%（18/350）、30%（15/50）逐漸降低到0（表3）；仔豬成活率由71.14%提高到92.43%。

表3 偽狂犬病病原PCR檢測(cè)結(jié)果

3.3 凈化方案的制定

3.3.1 完善生物安全措施 制定自繁自養(yǎng)、全進(jìn)全出的養(yǎng)殖模式，嚴(yán)防疫病傳入。制定豬場(chǎng)參考消毒程序，通過對(duì)MIC/MBC值的測(cè)定選擇最適合的消毒劑，比較紫外燈和超聲波霧化對(duì)空氣消毒的差異性。

3.3.2 規(guī)范調(diào)整免疫程序 仔豬1～3日齡滴鼻免疫；后備母豬在145日齡和186日齡免疫；經(jīng)產(chǎn)母豬和種公豬每季度（2月、5月、8月、11月）免疫一次。采用PRV gE基因缺失弱毒疫苗按照使用說明進(jìn)行全群免疫，以達(dá)到有效控制偽狂犬病的目的。其他主要?jiǎng)游镆卟∪缈谔阋?、豬瘟、圓環(huán)病毒、藍(lán)耳病的免疫均按照常規(guī)進(jìn)行。

3.3.3 示范場(chǎng)PR病毒和血清的流行病學(xué)調(diào)查 生產(chǎn)母豬免疫抗體陽性率如低于15%，則一次性全部淘汰；如出現(xiàn)疑似病例，則淘汰病原學(xué)檢測(cè)陽性個(gè)體。PR抗體不合格的豬應(yīng)及時(shí)補(bǔ)免，經(jīng)多次免疫仍不合格的予以淘汰。后備母豬抗體檢測(cè)呈陽性、病原學(xué)檢測(cè)呈陰性方可混群飼養(yǎng)；新引進(jìn)種豬應(yīng)先隔離觀察并檢測(cè)PR抗體和病原，對(duì)于病原檢測(cè)陽性豬予以淘汰。

3.3.4 建立無偽狂犬病階段 通過以上措施不斷地凈化豬群，從源頭切斷病毒的傳播途徑，后期連續(xù)兩年跟蹤調(diào)查無臨床病例出現(xiàn)，群體免疫抗體合格率均大于90%，即表明已有效控制PR，成功建立無偽狂犬病階段。

4 分析與討論

4.1 規(guī)模化養(yǎng)殖中，對(duì)免疫抑制性疾病的控制是穩(wěn)定養(yǎng)殖生產(chǎn)的關(guān)鍵因素。常年來，受免疫抑制性因素的影響，PRV、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、豬圓環(huán)病毒（PCV-2）及霉菌毒素等對(duì)豬的免疫系統(tǒng)造成了嚴(yán)重?fù)p害，從而導(dǎo)致免疫失敗[3]。疫苗免疫失敗、引種不當(dāng)和生產(chǎn)管理不當(dāng)是引起PRV暴發(fā)的主要原因[4]，且生產(chǎn)母豬、后備母豬和仔豬群的無癥狀持續(xù)感染帶毒現(xiàn)象明顯。通過嚴(yán)格的檢測(cè)凈化，能有效提高群體免疫抗體水平和仔豬的存活率。PRV可通過消化道和呼吸道水平傳播，也可通過交配、精液、胎盤垂直傳播。被PRV感染的規(guī)模豬場(chǎng)中，尤其是耐過的呈隱性感染的成年豬是PRV的主要傳染源[5]。通過胎盤傳播給胎兒時(shí)，由于母豬免疫球蛋白不能通過胎盤屏障，所以，病毒對(duì)胎兒的感染是致命的。一旦規(guī)模豬場(chǎng)被PRV感染，這種水平傳播和垂直傳播就會(huì)導(dǎo)致豬場(chǎng)PRV感染的惡性循環(huán)。目前，對(duì)PRV尚無有效治療藥物，采用疫苗免疫和凈化淘汰帶毒豬群是預(yù)防和控制該病的根本措施[6-7]。因此，規(guī)模豬場(chǎng)開展PR凈化勢(shì)在必行，尤其是對(duì)種豬群的凈化。

4.2 扁桃體是豬感染PRV后含毒量最多的器官之一，也是檢測(cè)最穩(wěn)定的器官之一[8]。婁高明等[9-10]證明，用PCR方法檢測(cè)PR的敏感性明顯高于病毒分離和ELISA方法。因此，本試驗(yàn)采集活體扁桃體樣品進(jìn)行PCR檢測(cè)，以準(zhǔn)確診斷與凈化PRV。

4.3 本試驗(yàn)首先全群逐頭采集試驗(yàn)場(chǎng)的種公豬和混群前后備母豬的扁桃體和血清，進(jìn)行PRV篩查，防止配種時(shí)交叉感染；其次，對(duì)表現(xiàn)出臨床癥狀的個(gè)體進(jìn)行采樣檢測(cè)，以提高檢出率，加快凈化進(jìn)程。經(jīng)過一年半對(duì)7個(gè)種豬場(chǎng)4個(gè)豬群定期開展PRV血清學(xué)和病原學(xué)檢測(cè)，結(jié)合嚴(yán)格的生物安全措施，共淘汰病原檢測(cè)陽性豬105頭，種公豬和后備母豬的病原陽性率由0.46%、5.14%降到0，仔豬成活率由凈化前的71.14%提高到92.43%，有效控制了種豬的帶毒感染，達(dá)到了凈化要求，為后期申請(qǐng)凈化評(píng)估、建立非免疫凈化場(chǎng)奠定了基礎(chǔ)。