高 婷，趙玉娜，何艷萍

(寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院制劑中心，銀川 750004)

復(fù)方薄荷腦滴鼻劑是醫(yī)院耳鼻喉科常用的治療干燥性和萎縮性鼻炎及傷風(fēng)鼻塞等傳統(tǒng)制劑，其主要成分為薄荷腦和樟腦，溶劑為液狀石蠟，具有潤濕黏膜、促進(jìn)黏膜血液循環(huán)、刺激黏膜腺體分泌、減少痂皮和清除鼻內(nèi)臭味的作用[1-2]。復(fù)方薄荷腦滴鼻劑作為醫(yī)院制劑，由于其成本低廉、使用方便、療效確切，在臨床上得到了廣泛應(yīng)用，但其現(xiàn)有的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)卻存在很大的缺陷。該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)參照1995年版《中國醫(yī)院制劑規(guī)范》(西藥制劑，第2版)[3]，僅對樟腦用紫外分光光度法、薄荷腦用化學(xué)顯色法做了定性鑒別。

目前薄荷腦和樟腦的測定研究報道很多[4-12]，但對其進(jìn)行系統(tǒng)地穩(wěn)定性考察卻少見[13-14]。本文參照《中國藥典》2015年版四部通則9001中原料藥物與制劑穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)原則[15]，采用毛細(xì)管氣相色譜法對復(fù)方薄荷腦滴鼻劑進(jìn)行系統(tǒng)地穩(wěn)定性考察，為其有效期的制定提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1儀器 7890B型Agilent氣相色譜儀，包括其子工作站、自動進(jìn)樣器和氫火焰離子化檢測器(美國安捷倫科技公司)；MS105DU型分析天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司)；PHS-3C型酸度計(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；LRHS-250-Ⅱ型恒溫恒濕培養(yǎng)箱(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司)；101-2E型電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海實(shí)驗(yàn)儀器廠有限公司)。

1.2試藥 薄荷腦對照品(批號110728-200506)，樟腦對照品(批號111749-200601)，中國食品藥品檢定研究院；薄荷腦(黃山天目薄荷藥業(yè)有限公司，批號150801)；樟腦(合成)(蘇州優(yōu)合科技有限公司，批號150618C)；輕質(zhì)液狀石蠟(吉林市吉化江城油脂化工有限責(zé)任公司，批號160101)；乙酸乙酯(色譜純，山東禹王實(shí)業(yè)有限公司化工分公司，批號2013060801)；環(huán)己酮(徐州天鴻化工有限公司，批號20140308)；復(fù)方薄荷腦滴鼻劑為自制(批號：161122，161125，161130)；水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1復(fù)方薄荷腦滴鼻劑的制備

2.1.1處方 薄荷腦10 g，樟腦10 g，液狀石蠟加至1 000 mL。

2.1.2制備 分別取處方量的薄荷腦、樟腦加入研缽中研磨至糊狀，緩慢滴加適量的液狀石蠟研至無色澄明油狀液體，再加入液狀石蠟至全量，攪拌均勻，即得。

2.2GC法的建立

2.2.1色譜條件 色譜柱：Agilent 19091J-412 HP-5(30 m×320 μm，0.25 μm)PEG極性毛細(xì)管色譜柱；柱溫100 ℃，保持1 min，以5 ℃·min-1速率上升至130 ℃，保持2 min，后運(yùn)行220 ℃，保持2 min；氫火焰離子化監(jiān)測器(FID)，溫度為220 ℃；載氣為N2；流速：25 mL·min-1；分流比：10∶1；進(jìn)樣口溫度：250 ℃；進(jìn)樣量：1 μL。

2.2.2溶液的制備 對照品儲備液：精密稱取薄荷腦對照品和樟腦對照品各適量，用乙酸乙酯溶解并稀釋成質(zhì)量濃度為1.0 mg·mL-1的溶液，作為對照品儲備液。

內(nèi)標(biāo)溶液：精密稱取環(huán)己酮適量，用乙酸乙酯溶解并稀釋成質(zhì)量濃度為0.5 mg·mL-1的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。

混合對照品溶液：精密量取上述對照品儲備液和內(nèi)標(biāo)溶液各1 mL，置于同一10 mL量瓶中，用乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，即得。

供試品溶液：精密量取供試品溶液2.5 mL，置于25 mL量瓶中，用乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，精密量取此溶液1 mL，置于10 mL量瓶中，加入內(nèi)標(biāo)溶液1 mL，用乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，即得。

陰性對照溶液：取液狀石蠟適量，置于研缽中，按照制備2.1項(xiàng)下方法研磨后，精密量取2.5 mL，按照上述供試品溶液方法進(jìn)行制備(不加內(nèi)標(biāo)溶液)，即得。

2.2.3專屬性考察 分別取陰性對照溶液、混合對照品溶液和供試品溶液各1 μL，按照2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果表明，空白基質(zhì)對復(fù)方薄荷腦滴鼻劑中薄荷腦和樟腦的含量測定無干擾，薄荷腦、樟腦和內(nèi)標(biāo)物的分離良好，見圖1。

圖1GC圖

A.陰性對照溶液；B.混合對照品溶液;C.供試品溶液；1.環(huán)己酮；2.樟腦；3.薄荷腦。

Fig.1 GC chromatograms

A.negative solution；B.mixed reference solution；C.sample solution；1.cyclohexanone；2.camphor；3.menthol.

2.2.4線性關(guān)系考察 精密移取2.2.2項(xiàng)下制備的對照品儲備液0.3，0.5，1.0，1.2和1.5 mL，分別置于10 mL量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1 mL，用乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，得系列標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。按照2.2.1項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣1 μL，以峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值為縱坐標(biāo)(y)、對照品的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(x)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，薄荷腦和樟腦質(zhì)量濃度分別在0.03～0.149和0.03～0.15 mg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程分別為y=2.306 5x+0.003 7(r=0.999 9)和y=2.298 4x+0.002 7(r=0.999 9)。

2.2.5精密度與重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取標(biāo)準(zhǔn)曲線中間點(diǎn)溶液，按照2.2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，計算薄荷腦和樟腦峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值，結(jié)果顯示，薄荷腦和樟腦峰面積的RSD值分別為0.53%和0.44%，表明儀器精密度良好。

取復(fù)方薄荷腦滴鼻劑(批號161130)，按照2.2.2項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，分別測定薄荷腦和樟腦的含量。RSD值分別為0.69%和0.70%，結(jié)果表明，該方法重復(fù)性良好。

2.2.6回收率實(shí)驗(yàn) 按照處方比例配制空白基質(zhì)，精密移取對照品儲備液適量，按照2.2.2項(xiàng)下方法制成標(biāo)示量分別為80%，100%和120%的模擬供試品溶液各3份。按照2.2.1項(xiàng)下色譜條件測定薄荷腦和樟腦的含量，計算回收率，見表1。

表1回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Tab.1 Results of recovery test (n=9)

2.2.7溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 按照2.2.2項(xiàng)下方法分別配制供試品溶液，按照2.2.1項(xiàng)下色譜條件于0，2，4，6，8和10 h分別進(jìn)樣1 μL，測定薄荷腦和樟腦峰面積/內(nèi)標(biāo)峰面積的比值，計算薄荷腦和樟腦的含量。RSD值為分別為1.0%和0.95%，結(jié)果表明，復(fù)方薄荷腦滴鼻劑中薄荷腦和樟腦的含量在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8樣品測定 取3批復(fù)方薄荷腦滴鼻劑樣品，按照2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液。取對照品溶液及供試品溶液，按照2.2.1項(xiàng)下色譜條件測定薄荷腦、樟腦和內(nèi)標(biāo)物的峰面積，計算薄荷腦和樟腦的含量，結(jié)果見表2。

表2復(fù)方薄荷腦滴鼻劑中薄荷腦和樟腦含量測定結(jié)果

Tab.2 The content of menthol and camphor in samples

批號薄荷腦含量/mg·mL-1標(biāo)示量/%樟腦含量/mg·mL-1標(biāo)示量/%1611229.842 98.429.808 98.081611259.789 97.899.787 97.871611309.852 98.529.868 98.68

2.3穩(wěn)定性研究

2.3.1影響因素實(shí)驗(yàn) ①高溫實(shí)驗(yàn)：取批號為 161130的復(fù)方薄荷腦滴鼻劑適量，置于開口潔凈容器中，在40 ℃溫度下放置10 d，于第5和10 天取樣，考察復(fù)方薄荷腦滴鼻劑的性狀及含量，與第0天的進(jìn)行比較，結(jié)果見表3。

②強(qiáng)光照射實(shí)驗(yàn)：取批號為161130的復(fù)方薄荷腦滴鼻劑適量，置于潔凈容器中，在光照度為4 500±500 lx的條件下放置10 d，于第5和10天取樣，考察復(fù)方薄荷腦滴鼻劑的性狀及含量，與第0天的進(jìn)行比較，結(jié)果見表3。

表3影響因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Tab.3 Results of stress testing

項(xiàng)目時間/d性狀含量/mg·mL-1薄荷腦樟腦強(qiáng)光照射實(shí)驗(yàn) 0無色澄明油狀液體9.852 9.868 5無色澄明油狀液體9.591 9.543 10無色澄明油狀液體9.204 9.242 高溫實(shí)驗(yàn) 0無色澄明油狀液體9.852 9.868 5無色澄明油狀液體9.473 9.430 10無色澄明油狀液體9.187 9.194

2.3.2加速實(shí)驗(yàn) 取3批(批號：161122，161125，161130)復(fù)方薄荷腦滴鼻劑，市售包裝，在溫度40±2 ℃，相對濕度為75%±5%的條件下放置6個月。在實(shí)驗(yàn)期間的第1，2，3和6個月末分別取樣1次，考察復(fù)方薄荷腦滴鼻劑的性狀及含量，并與0個月的進(jìn)行比較，結(jié)果見表4。

表4加速實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Tab.4 Results of accelerated stability testing

批號時間/月性狀含量/mg·mL-1薄荷腦樟腦1611220無色澄明油狀液體9.842 9.8081無色澄明油狀液體9.701 9.7052無色澄明油狀液體9.654 9.6233無色澄明油狀液體9.5459.5986無色澄明油狀液體9.163 9.2311611250無色澄明油狀液體9.789 9.7871無色澄明油狀液體9.709 9.7012無色澄明油狀液體9.621 9.6053無色澄明油狀液體9.475 9.5196無色澄明油狀液體9.112 9.1981611300無色澄明油狀液體9.852 9.8681無色澄明油狀液體9.765 9.7712無色澄明油狀液體9.704 9.7133無色澄明油狀液體9.575 9.5826無色澄明油狀液體9.2029.186

2.3.3長期實(shí)驗(yàn) 取3批(批號：161122，161125，161130)復(fù)方薄荷腦滴鼻劑，市售包裝，在溫度25±2 ℃，相對濕度60%±10%的條件下放置12個月。每3個月取樣1次，分別于第0，3，6，9和12個月進(jìn)行取樣，考察復(fù)方薄荷腦滴鼻劑的性狀及含量，與0個月的進(jìn)行比較，結(jié)果見表5。

表5長期實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Tab.5 Results of long-term testing

批號時間/月性狀含量/mg·mL-1薄荷腦樟腦1611220無色澄明油狀液體9.842 9.8083無色澄明油狀液體9.701 9.7056無色澄明油狀液體9.554 9.5231611250無色澄明油狀液體9.789 9.7873無色澄明油狀液體9.679 9.6816無色澄明油狀液體9.511 9.5201611300無色澄明油狀液體9.852 9.8683無色澄明油狀液體9.645 9.6516無色澄明油狀液體9.414 9.413

3 討論

與紫外分光光度法[16-17]、HPLC法[18-19]和旋光法[20]相比，毛細(xì)管氣相色譜法可方便、準(zhǔn)確地同時測定復(fù)方薄荷腦滴鼻劑中薄荷腦和樟腦的含量，故本文采用毛細(xì)管氣相色譜法對復(fù)方薄荷腦滴鼻劑進(jìn)行系統(tǒng)地穩(wěn)定性考察。

復(fù)方薄荷腦滴鼻劑中所用溶劑液狀石蠟在乙酸乙酯中溶解，在乙醇中不溶，故本文采用乙酸乙酯作為氣相色譜分析的溶劑，既避免了進(jìn)樣口的污染，又保證了分離效果。

影響因素實(shí)驗(yàn)中高溫60 ℃測定結(jié)果低于限度，故本文在40 ℃條件下同法進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。由穩(wěn)定性研究結(jié)果可知，薄荷腦和樟腦的含量均在標(biāo)示量的90%～110%之間，性狀無顯著性變化，因薄荷腦和樟腦為揮發(fā)性物質(zhì)，故復(fù)方薄荷腦滴鼻劑應(yīng)于陰涼處密閉保存。

復(fù)方薄荷腦滴鼻劑為我院注冊配制的醫(yī)院制劑，有效期為6個月，筆者將進(jìn)一步完成后續(xù)的長期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，為其制定科學(xué)合理的有效期，保證臨床用藥安全有效。