吳翟 王彩榮 張靈敏 楊建新 周恒 王麗

【摘 要】 目的：觀察金蛭方對缺血性中風(fēng)大鼠血清及腦組織超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量的影響，探討其治療缺血性中風(fēng)的作用機制。方法：采用線栓法復(fù)制缺血性中風(fēng)大鼠模型，隨機分為假手術(shù)組、模型對照組、金蛭方高劑量組、金蛭方低劑量組、陽性藥尼莫地平片對照組。測定大鼠血清和腦組織SOD活性和MDA含量。結(jié)果：模型組大鼠血清、腦組織中SOD活性較假手術(shù)組明顯降低（P<0.01）；MDA含量均較假手術(shù)組明顯升高（P<0.01）。用藥后各治療組大鼠血清和腦組織中SOD活性明顯升高（P<0.05，P<0.01）；MDA含量明顯降低（P<0.05，P<0.01）。高、低劑量組在增強SOD活性和降低MDA含量方面的作用優(yōu)于對照組（P<0.05）。結(jié)論：金蛭方通過調(diào)節(jié)缺血性中風(fēng)大鼠SOD活性、MDA的含量以達(dá)到抗缺血性中風(fēng)作用。

【關(guān)鍵詞】 金蛭方；缺血性中風(fēng)；超氧化物歧化酶；丙二醛

【中圖分類號】R289.5 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2018）03-0040-03

Abstract： ObjectiveObsevve the Jinzhi Fang for ischemic stroke in rats serum and brain tissue superoxide dismutase （SOD） activity and malondialdehyde （MDA） content， the influence of its action mechanism for the treatment of ischemic stroke. Methods By using line switch copy of ischemic stroke in rats model， were randomly divided into control group， model control group， the Jinzhi Fang high dose group， gold Jinzhi Fang low dose group， positive medicine nim flat piece of the control group. Determination of rats serum and brain tissue SOD activity and MDA content. Results The model group rats serum and brain tissue SOD activity significantly decreased in the control group （P<0.01）； MDA content were increased significantly in the control group （P<0.01）. After each treatment group rats serum and brain tissue SOD activity significantly increased （P<0.05， P<0.01）； The MDA content significantly decreased （P<0.05，P<0.01）. High and low dose group was increase SOD activity and reduce MDA content of the role of is better than that of control group （P<0.05）. Conclusion Jinzhi Fang by adjusting the ischemic stroke SOD activity and MDA content of rats in order to achieve the function of ischemic stroke.

Keywords：Jinzhi Fang； Ischemic Stroke； Superoxide Dismutase （SOD）； Malondialdehyde

缺血性中風(fēng)約占中風(fēng)病的30%，其發(fā)病率高、致殘率高和死亡率高，給家庭及社會造成極大負(fù)擔(dān)。氧化應(yīng)激學(xué)是缺血性腦血管病的病理生理機制之一[1]。金蛭方系課題組經(jīng)過10余年臨床篩選出的治療缺血性中風(fēng)的效方，擬通過建立大鼠急性腦缺血再灌注模型，觀察金蛭方對大鼠血清及腦組織中SOD活性及MDA含量的影響，以探討其抗氧自由基水平方面的可能作用機制。

1 材料與方法

1.1 動物 健康雄性SD大鼠60只，清潔級，體重250～300 g，由河北省實驗動物中心提供，合格證號：1119069。

1.2 藥物與試劑 金蛭方組成：水蛭、郁金、川芎、冰片（由遷安市中醫(yī)醫(yī)院制劑室制備），上4味除冰片外水提濃縮成高、低劑量后加入相應(yīng)研磨冰片，所含生藥分別為：0.30 g/mL（高劑量）、0.15 g/mL（低劑量）。尼莫地平片（國藥準(zhǔn)字：H41022175，規(guī)格：20 mg/片，鄭州瑞康制藥有限公司）配制成0.001 g/mL水溶液。

水合氯醛注射液（批號：20120206，上?；瘜W(xué)試劑公司）；超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒（批號：20130704）、丙二醛（MDA）試劑盒（批號：20130709）均購自南京建成生物工程研究所。

1.3 儀器 MSE-25型高速冷凍離心機（上海安亭科學(xué)儀器廠），LAUDA-C3型循環(huán)恒溫水浴箱（泰克儀器有限公司），F(xiàn)6/10型超細(xì)勻漿機（上海弗魯克流體機械制造有限公司），AR1140型電子分析天平（Ohaus USA），722型光柵分光光度計（上海精密科學(xué)儀器有限公司）。

1.4 造模方法 參考改良的Longa法[2]：頸部正中切口，用3-0手術(shù)絲線結(jié)扎頸外動脈（ECA）遠(yuǎn)端及枕動脈，在結(jié)扎線距分叉部2 mm處剪斷ECA，將一端已加工成光滑球形的尼龍線從ECA殘端插入進(jìn)行結(jié)扎，將尼龍線經(jīng)頸總動脈（CCA）分叉部插入頸內(nèi)動脈（ICA），此時松開CCA，ICA套線恢復(fù)血流，線栓推送順滑，無出血。將線栓向上深入至分叉以上18～19 mm達(dá)到大腦中動脈開口處，將頸總動脈連同尼龍線一起結(jié)扎，縫合切口后外留尼龍線0.5 cm，放到單籠中，2 h后外拉尼龍線使其球端回至ECA進(jìn)行缺血后再灌注。

1.5 分組與給藥[3] 60只大鼠自由進(jìn)食飲水，飼養(yǎng)于18～22 ℃明暗各12 h的清潔級動物實驗室內(nèi)，喂養(yǎng)1周后，隨機分為5組。①假手術(shù)組：手術(shù)時僅作頸部手術(shù)切口，鈍性分離頸前肌，游離暴露頸總、頸外、頸內(nèi)動脈，術(shù)后當(dāng)日灌服蒸餾水。②模型對照組（簡稱模型組）：造模當(dāng)日灌服蒸餾水。③金蛭方低劑量組（簡稱低劑量組）：造模當(dāng)日灌服金蛭方，每日用藥劑量為1.5 g/kg（相當(dāng)于成人劑量的10倍）。④金蛭方高劑量組（簡稱高劑量組）：術(shù)后當(dāng)日灌服金蛭方，每日用藥劑量為3.0 g/kg（相當(dāng)于成人劑量的20倍）。⑤性藥尼莫地平片對照組（簡稱對照組）：術(shù)后當(dāng)日灌服尼莫地平片，每日用藥劑量為0.01 g/kg（相當(dāng)于成人劑量的20倍）。各組1次/d灌胃，每次用藥體積均按1 mL/100g計算，連續(xù)給藥2周。

1.6 檢測方法 實驗2周末，于最后一次給藥禁食12 h后，戊巴比妥鈉45 mg/kg腹腔注射麻醉，腹主動脈取血5 mL，注入離心管中待凝固后，4 ℃，3000 r/min離心，10 min，分離血清，-20 ℃保存?zhèn)溆谩Ｈ⊙?，迅速斷頭冰浴中取右側(cè)大腦額葉皮層同一位置取腦組織100 g，濾紙吸干血跡，盡快加入預(yù)冷的生理鹽水碾磨，制成組織勻漿，4 ℃3000 r/min離心，15 min，取上清液，-20 ℃保存?zhèn)溆?。放免法檢測血清及腦組織中SOD活性和MDA的含量，具體操作嚴(yán)格遵照試劑盒說明書。

1.7 統(tǒng)計學(xué)處理 數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件分析，計量資料用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（x[TX-*3]±s）表示，多組間比較用單因素方差分析和q檢驗，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

模型組大鼠血清、腦組織中SOD活性較假手術(shù)組明顯降低（P<0.01）；MDA含量均較假手術(shù)組明顯升高（P<0.01）。用藥后各治療組大鼠血清和腦組織中SOD活性明顯升高（P<0.05，P<0.01）；MDA含量明顯降低（P<0.05，P<0.01）。高、低劑量組在增強SOD活性和降低MDA含量方面的作用優(yōu)于對照組（P<0.05）。詳見表1。

3 討論

中風(fēng)病臨床癥候?qū)W研究認(rèn)為，缺血性中風(fēng)患者多是在氣血內(nèi)虛的基礎(chǔ)上，加之勞倦內(nèi)傷、憂思惱怒、嗜食厚味、煙酒等誘因，導(dǎo)致氣血逆亂，直沖犯腦，致氣血瘀滯，腦脈痹阻。氣滯、血瘀、絡(luò)阻為本病的主要病機，“氣行則血行”，行氣、活血、通絡(luò)為其有效治則。院內(nèi)制劑“金蛭膠囊”（制劑號：冀藥制字Z20051013）治療缺血性中風(fēng)10余年，療效滿意。方中水蛭破血逐瘀、通經(jīng)活絡(luò)，《本草匯言》曰：“水蛭逐惡血、散瘀血之要藥也”；郁金行氣活血，化痰降火，《本草匯言》曰：郁金其性清揚，能散郁滯，順逆氣，上達(dá)高巔，善行下焦；川芎行氣活血，歷代醫(yī)家認(rèn)為其善治中風(fēng)病，稱為治風(fēng)圣藥[4]；冰片醒神通竅，《本草衍義》：“芳香走竄，引藥上行，獨行則勢弱，佐使則有功”，四藥合用，共奏活血、化瘀、通絡(luò)之功。

氧自由基損傷是缺血性卒中發(fā)生發(fā)展最重要且肯定的因素之一[5]。正常機體內(nèi)自由基水平保持相對穩(wěn)定，當(dāng)腦缺血缺氧時，體內(nèi)自由基產(chǎn)生、清除的平衡狀態(tài)遭到破壞，使得自由基迅速大量產(chǎn)生，細(xì)胞膜的膽固醇含量耗竭，從而破壞神經(jīng)細(xì)胞膜的完整性，最終導(dǎo)致細(xì)胞壞死、腦水腫及其他并發(fā)癥[6]。SOD為主要的抗氧化酶之一，通過催化超氧陰離子自由基發(fā)生歧化反應(yīng)阻斷自由基毒性反應(yīng)[7]，清除超氧陰離子自由基，保護(hù)細(xì)胞免受損傷。MDA是脂質(zhì)過氧化的代謝終產(chǎn)物，存在于細(xì)胞膜的不飽和脂肪酸受到自由基的作用而產(chǎn)生的過氧化脂質(zhì)中[8]。MDA的含量間接反映出機體細(xì)胞氧自由基的受損程度[9]。

研究表明，采用線栓法復(fù)制的缺血性中風(fēng)大鼠模型腦組織中SOD活性明顯降低，MDA含量明顯增加。用藥干預(yù)后，各治療組大鼠血清、腦組織中SOD的活性降低及 MDA的含量升高，說明金蛭方減少自由基的產(chǎn)生，減輕脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，起到腦保護(hù)作用。在此基礎(chǔ)上，將對金蛭方對腦缺血再灌注損傷大鼠在抗氧自由基水平方面進(jìn)行深入系統(tǒng)地研究。

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（收稿日期：2017-12-01 編輯：程鵬飛）