◎ 車方萍，趙夢蕓，陳 艷

（杭州譜可檢測技術(shù)有限公司，浙江 杭州 310000）

1 材料與方法

①樣品。同一批次的10個青團；環(huán)境條件為溫度20 ℃，相對濕度55%。②檢測儀器設(shè)備。電熱恒溫培養(yǎng)箱，溫度偏差為±1 ℃；電子天平，測量范圍（0.5～510）g，準確度等級Ⅱ級（0≤m≤500 g，MPE±0.05 g）；移液槍1，測量范圍（100～1 000）μL，容量允許誤差為±1.0%，測量重復性≤0.5%；移液槍2，測量范圍（1 000～10 000）μL，容量允許誤差±0.6%，測量重復性≤0.2%；量筒，250 mL，容量允差為±1.0 mL。③培養(yǎng)基和試劑。平板計數(shù)瓊脂（PCA），購自北京路橋；生理鹽水。④檢測依據(jù)。GB 4789.2-2016《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 菌落總數(shù)測定》[1]。

2 檢測目的

依據(jù)GB 4789.2-2016，采用平板菌落計數(shù)法測量食品中的菌落總數(shù)。通過對影響測量結(jié)果的不確定度分量的分析和量化，求出菌落總數(shù)的標準不確定度和擴展不確定度，給出各分量對測量結(jié)果不確定度的相對貢獻，對測量結(jié)果進行不確定度表述。

3 測量步驟

參照國標GB 4789.2-2016《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 菌落總數(shù)測定》。

4 測量不確定度來源

①由輸入量V引入的標準不確定度分量u(V)。由量筒和移液槍的固有誤差和實驗人員操作偏差引入。②由輸入量m引入的標準不確定度分量u(m)。由電子天平的固有誤差及實驗人員操作偏差引入。③由實驗人員重復性測量引入的標準不確定度分量urel。由重復性（檢測環(huán)境、培養(yǎng)時間、培養(yǎng)溫度、修約、樣品均勻性、操作者、檢測時間、計數(shù)、培養(yǎng)基和試劑）測量引入。

5 標準不確定度分量的評定

5.1 由實驗人員重復性測量引入的標準不確定度分量urel

在重復性條件下，對青團樣品進行10次測量，10次測量數(shù)據(jù)，見表1[2]。

表1 10次平行測量結(jié)果表

根據(jù)貝塞爾公式[3]，可計算出檢驗結(jié)果對數(shù)值標準偏差為：

相對標準不確定度為：

5.2 由輸入量m引入的標準不確定度分量u(m)

（1）根據(jù)經(jīng)驗得出，稱量時由人員引起的稱量誤差為±0.1 g，其半寬區(qū)間a=0.1 g，該區(qū)間內(nèi)屬均勻分布，包含因子，故：

（2）電子天平固有誤差帶來的標準不確定度分量u(m2)。電子天平最大允許誤差±0.05 g，其半寬區(qū)間a=0.05 g，該區(qū)間屬均勻分布，包含因子，則：

以上兩項各不相關(guān)，故合成得出：

相對標準不確定度為：

5.3 由輸入量V引入的標準不確定度分量u(V)

（1）初始稀釋液（1∶10）：初始稀釋液取25 g檢樣加入225 mL（V11）滅菌生理鹽水制得。

由經(jīng)驗得出，操作時，由人員引起的誤差為±3.0 mL，其半寬區(qū)間a=3.0 mL，該區(qū)間內(nèi)屬均勻分布，包含因子，故：

使用250 mL量筒量取生理鹽水，其容量最大允差為±1.0 mL，其半寬區(qū)間a=1.0 mL，該區(qū)間內(nèi)屬均勻分布，包含因子，故：

以上兩項各不相關(guān)，故合成得出：

相對標準不確定度為：

（2）分別使用1 000 μL（V21）和10 mL移液槍吸取樣品稀釋液和9 mL（V22）滅菌生理鹽水，由于由移液槍產(chǎn)生的誤差對結(jié)果造成的影響很小，可忽略不計。其容量允差分別為±0.01 mL和±0.054，該區(qū)間內(nèi)均勻分布，包含因子，標準不確定度分別為：

計算得出：移液槍引起體積最大偏差導致的不確定度分量，不到最大分量的1/3不用估計，所以移液槍引起的不確定度可以忽略。

綜上，體積的相對不確定度為u(V)=0.81%。

6 相對標準不確定度分量

相對標準不確定度分量，見表2。

表2 相對標準不確定度分量表

所引入的各不確定度分量ui彼此獨立，互不相關(guān)，所以相對合s成標準不確定度為：

7 合成標準不確定度

由以上計算可知，青團樣品的菌落總數(shù)測定的合成相對標準不確定度為4.37%，則其合成不確定度為：

8 擴展不確定度分析

根據(jù)置信概率p=95%和自由度v=9，由t分布得到包含因子k=2.26，擴展不確定度為：

9 結(jié)果表征

取反對數(shù)，相當于X1=130 000時，X的取值范圍為90 000～180 000 CFU/g。