臧 唯，王 琢，張闊野

(1.吉林市中心醫(yī)院，吉林 吉林 132000；2.齊魯醫(yī)藥學(xué)院，山東 淄博 255000；3.吉林市衛(wèi)生學(xué)校，吉林 吉林 132000)

肝癌、肝硬化是危及人類健康和生命的主要疾病之一，主要病因是乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus，HBV)感染。HBV早期多無(wú)癥狀，但隨著疾病進(jìn)展，HBV感染者由肝炎轉(zhuǎn)變肝硬化甚至進(jìn)展為肝細(xì)胞肝癌(HCC)，HCC是由于HBV感染免疫調(diào)節(jié)所致。監(jiān)控HBV感染后疾病進(jìn)展情況，盡快防御及診治，是減少HBV感染引發(fā)死亡的關(guān)鍵。本研究的目的在于通過(guò)對(duì)乙型肝炎患者血漿中TGF-β(轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β transforming growth factor-β) 和IL-6 (Interleukine-6,白介素-6)的測(cè)定來(lái)探討其所對(duì)疾病進(jìn)展的影響，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：收集2017年1月～2017年12月吉林省肝膽醫(yī)院及吉林市中心醫(yī)院的患者血清樣本。將慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者95例設(shè)為CHB組、肝炎后肝硬化(Cirrhosis)40例設(shè)為Cirrhosis組和肝細(xì)胞肝癌(HCC)40例設(shè)為HCC組。CHB組標(biāo)準(zhǔn)：HBsAg(+)半年以上，血清HBV-DNA載量>5.0×102IU/ml，HBeAg(+)慢性乙型病毒性肝炎或HBeAg(-)慢性乙型病毒性肝炎者，丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶持續(xù)或反復(fù)升高，或肝臟穿刺檢查提示炎性反應(yīng)，HBeAg轉(zhuǎn)陰或HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換者；排除標(biāo)準(zhǔn)：HBV聯(lián)合丙型病毒性肝炎或其他類型肝炎及免疫缺陷疾病者，慢性乙型病毒性肝炎合并酒精性肝炎、脂肪肝、隱匿性肝硬化者。Cirrhosis組入組標(biāo)準(zhǔn)：HBeAg(+)持續(xù)時(shí)間半年以上，血清HBV-DNA載量>5.0×102IU/ml，超聲影像學(xué)檢查有肝臟纖維化表現(xiàn)或經(jīng)手術(shù)證實(shí)。HCC組入組標(biāo)準(zhǔn)：HBsAg(+)持續(xù)時(shí)間半年以上，血清HBV-DNA載量>5.0×102IU/ml，符合肝細(xì)胞肝癌的臨床表現(xiàn)，經(jīng)CT或磁共振檢查發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞肝癌特征的腫瘤病灶，或經(jīng)手術(shù)標(biāo)本檢查確診患者。

1.2方法：血漿標(biāo)本抽取外周血3 ml肝素抗凝,在4℃下,3 000 r/min，離心10 min,分離血漿,患者空腹禁食、水8 h，抽血前24 h內(nèi)不做劇烈運(yùn)動(dòng)。經(jīng)靜脈采血入抗凝紅色采血管3 ml。血標(biāo)本收集于冷凍管內(nèi),儲(chǔ)存于-70℃至同一批檢測(cè)，3 000 r/min，離心10 min，分離血漿，離心后放置于1.5 ml EP管中，以乙二胺四乙酸鈉抗凝，4℃離心，采用ELISA 法分別檢測(cè)TGF-β(血漿正常值44.3 kD)和IL-6(108.85±41.48 ng/L)含量，檢測(cè)試劑盒由Elabscience生物工程有限公司提供，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。

2 結(jié)果

HCC組血清中的IL-6含量明顯高于Cirrhosis組(P<0.05)，Cirrhosis組高于CHB組(P<0.05)；HCC組血清中TGF-β的含量明顯高于Cirrhosis組，Cirrhosis組高于CHB組(P<0.05)。見(jiàn)表1。

組別例數(shù)TGF-β(kD)IL-6 (ng/L)CHB組9545.5±0.15120.85±46.50Cirrhosis組4050.4±0.17150.85±41.09HCC組4062.3±0.20220.85±20.44P值0.0000.000

3 討論

HBV是通過(guò)不閉合的雙鏈環(huán)形結(jié)構(gòu)構(gòu)成[1]，其中包含P、C、X、S四個(gè)區(qū)。S區(qū)主要編碼乙型病毒性肝炎s抗原(Hepatitis B s antigen，HBsAg)，是HBV感染的標(biāo)志物。C區(qū)有前C、C基因區(qū)，分別為編碼乙型肝炎病毒e抗原(Hepatitis B e antigen，HBeAg)前體和乙型病毒性肝炎核心抗原(Hepatitis B core antigen,HBcAg)，HBeAg前體通過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的加工修飾，轉(zhuǎn)化為可溶性的HBeAg，在細(xì)胞和體液免疫中起到清除乙型肝炎病毒的作用[2]。C基因的編碼產(chǎn)物乙型病毒性肝炎核心抗原(Hepatitis B core antigen,HBcAg)，是乙型病毒性肝炎感染肝細(xì)胞后導(dǎo)致肝臟細(xì)胞損傷的最主要機(jī)制之一，同時(shí)是參與殺傷病毒的最主要機(jī)制之一。HBV-DNA前C區(qū)突變和BCP區(qū)與肝炎肝硬化和肝細(xì)胞肝癌的聯(lián)系是目前研究引人注目的主要問(wèn)題。肝臟中活化的免疫細(xì)胞通過(guò)分泌細(xì)胞因子[3]，起到重要的抗病毒作用。細(xì)胞因子是蛋白質(zhì)水解的中間產(chǎn)物，主要通過(guò)活化的免疫細(xì)胞或間質(zhì)細(xì)胞參與肝臟組織的炎性反應(yīng)及纖維化的進(jìn)程[4]。HBV感染患者血清中TNF-α (Tumor necrosis factor-α，腫瘤壞死因子-α)、INF-γ(Interferon-γ，干擾素-γ)和IL-6 (Interleukine-6,白介素-6)一些細(xì)胞因子的增高與病毒性肝炎的進(jìn)展有密切的聯(lián)系[5],肝細(xì)胞肝癌的血清中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β、腫瘤壞死因子-α、IL-6、IL-8等細(xì)胞因子明顯高于乙型肝炎病毒感染者。針對(duì)乙型肝炎病毒感染誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的細(xì)胞因子較多，如干擾素-γ、IL-12以及腫瘤壞死因子-α，能通過(guò)不同途徑的調(diào)節(jié)機(jī)制誘導(dǎo)激活淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等，從而清除乙型肝炎病毒感染肝細(xì)胞，同時(shí)又是把雙刃劍可以直接引發(fā)肝細(xì)胞的損傷及功能障礙。還有大量的細(xì)胞因子具有抗炎免疫調(diào)節(jié)功能，如IL-6和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β，炎性反應(yīng)調(diào)節(jié)以及抗炎調(diào)節(jié)的失衡可以誘導(dǎo)機(jī)體免疫功能的失衡紊亂，引發(fā)機(jī)體抗腫瘤免疫調(diào)節(jié)功能異常，腫瘤細(xì)胞不能被及時(shí)和有效地清除。在機(jī)體炎性反應(yīng)免疫調(diào)節(jié)反應(yīng)的進(jìn)程中，可分泌一些因子如活性氧、一氧化氮等，導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷，引發(fā)細(xì)胞產(chǎn)生出現(xiàn)異形及基因突變，最終機(jī)體失去代償功能形成腫瘤細(xì)胞[6]。

IL-6 (白介素-6,Interleukine-6)是一種多肽，IL-6由2條糖蛋白鏈組成，一條為α鏈，分子量80 kd，α鏈缺少胞內(nèi)區(qū)，只能以低親合性與IL-6結(jié)合，所形成復(fù)合物迅速與另一條分子量130 kd、復(fù)合物與高親和性的β鏈結(jié)合，通過(guò)β鏈向細(xì)胞內(nèi)傳遞信息。IL-6與IL-1一起可協(xié)同促進(jìn)T細(xì)胞增殖，部分與T細(xì)胞IL-2受體上調(diào)有密切聯(lián)系。IL-6和IL-1一樣參與炎性反應(yīng)及發(fā)熱反應(yīng)，HCC可分泌IL-6作為自身生長(zhǎng)因子刺激其生長(zhǎng)。探討HBV感染研究人群中IL-6 與HCC患病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系,分析各基因型與肝癌家族史、吸煙、飲酒等肝癌危險(xiǎn)因素在HCC發(fā)生中的交互作用以及基因與基因的交互作用及誘導(dǎo)HCC的發(fā)病機(jī)理，為尋找個(gè)體對(duì)肝癌易感的分子標(biāo)志物提供參考依據(jù)。

TGF-β(轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β)是屬于一組調(diào)節(jié)細(xì)胞成熟以及分化的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子超家族，機(jī)體內(nèi)許多細(xì)胞因子都可以分泌非活性狀態(tài)的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子[7]。在體外，非活性狀態(tài)的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子又稱為latency associated peptide(LAP)，通過(guò)體外立即可被活化，蛋白質(zhì)的本質(zhì)裂解作用可使TGF-β復(fù)合體轉(zhuǎn)化為活化的TGF-β。一般情況下細(xì)胞分化活躍的組織中TGF-β的表達(dá)會(huì)很高，如肝細(xì)胞、成骨細(xì)胞、腎臟、骨髓和胚胎。TGF-β1在人血小板和哺乳動(dòng)物骨中含量最高，而TGF-β2在豬血小板和哺乳動(dòng)物骨中含量最高，TGF-β3以間充質(zhì)干細(xì)胞產(chǎn)生為主。活化后的B細(xì)胞或T細(xì)胞產(chǎn)生TGF-β水平比靜止細(xì)胞顯著升高。通常幾乎所有的腫瘤細(xì)胞可檢測(cè)到TGF-β[8]。

本研究結(jié)果提示，通過(guò)檢測(cè)感染HBV人群血清中的TGF-β 和IL-6，能夠初步評(píng)估HBV感染者的病情、進(jìn)展及預(yù)后，能夠在臨床中對(duì)HBV感染者的進(jìn)展情況、肝臟損傷程度及預(yù)后的預(yù)判起到提示作用。