張啟浩，雷雨露，朱曉蘭，孫春龍，2，，杜 文，張韓杰，姚志剛，吳 濤，2，

(1.濱州學(xué)院生物與環(huán)境工程學(xué)院，山東 濱州 256603；2.山東省黃河三角洲生態(tài)環(huán)境科學(xué)重點實驗室，山東 濱州 256603；3.山東省黃河三角洲野生植物資源開發(fā)利用工程技術(shù)研究中心，山東 濱州 256603)

竹黃(Shiraia bambusicola)，別稱竹參、竹三七、竹花等，為肉座菌科(Hypocreaceae)真菌竹黃的子實體，一般寄生于竹的幼莖或者枝條上，是我國較為傳統(tǒng)的中藥材。其地理分布主要在四川、江蘇、安徽、浙江、福建等我國南方地區(qū)[1-2]。竹黃本身性味淡溫，具活血化淤、通經(jīng)活絡(luò)、鎮(zhèn)驚、化痰止咳和補(bǔ)中益氣等的作用，民間常用竹黃泡酒治療虛寒胃痛、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、氣管炎、跌打損傷、貧血頭痛等癥，是我國一種重要的中藥資源[3-4]。但是，竹黃發(fā)揮抗炎鎮(zhèn)痛的活性部位及其物質(zhì)基礎(chǔ)仍不明確。因此，本實驗通過用乙醇提取竹黃的有效成分，再利用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇三種有機(jī)溶劑進(jìn)行分段萃取，剩余部位作為水提物(母液部分)，對竹黃不同極性提取物抗炎鎮(zhèn)痛活性進(jìn)行考察，以初步篩選出竹黃抗炎鎮(zhèn)痛的最佳活性部位，為明確竹黃物質(zhì)基礎(chǔ)提供依據(jù)[5-8]。

1 材料

1.1 實驗動物

清潔級ICR昆明小鼠，160只，體重30±2g，雌雄各半，由山東綠都生物科技有限公司提供。在溫度(25±2)℃，10h光照下條件下正常飼養(yǎng)3d后開始實驗。

1.2 藥品與試劑

95%乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二甲苯、冰醋酸、二甲基亞砜均為分析純、(于天津福晨化學(xué)試劑有限公司購買)；阿司匹林腸溶片(拜耳醫(yī)藥保健有限公司)，規(guī)格100mg×30片，國藥準(zhǔn)字J20130078；羅通定片(上海羅福太康藥業(yè)有限公司)，規(guī)格30mg×36片，國藥準(zhǔn)字H41023586。

1.3 儀器

循環(huán)水式真空泵、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、熱板儀、電子天平等。

1.4 藥材

藥材竹黃于2017年10月購自安徽亳州，經(jīng)濱州學(xué)院生物與環(huán)境工程學(xué)院杜文副教授鑒定為中藥竹黃。

2 實驗方法

2.1 樣品的制備

2.1.1 醇提物的制備

將竹黃去除雜物，粉碎，稱取1kg，加入15倍乙醇進(jìn)行浸提，浸提3次，每次24h，將每次浸提液中的固體殘留抽濾出來，合并濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收溶劑，濃縮為浸膏(無醇味)，待用。

2.1.2 不同極性部位灌胃藥劑的制備

將醇提后濃縮的浸膏依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，為再分別減壓回收溶劑，得到不同極性部位的浸膏；剩余部分為水提物(母液部分)，減壓濃縮為浸膏。分別稱取三種不同的極性提取物，以二甲基亞砜(DMSO)為增溶劑，加蒸餾水溶解，制成0.01g/mL的灌胃劑，待用。

2.2 灌胃劑的抗炎、鎮(zhèn)痛作用

2.2.1 二甲苯致小鼠急性耳廓腫試驗[9]

選取健康ICR小鼠120只，雌雄各半，隨機(jī)分6組，每組10只?？瞻讓φ战M灌胃生理鹽水20 mL/kg，陽性對照組用阿司匹林0.5 g/kg，灌胃，提取物按0.5 g/kg劑量給藥，連續(xù)7d，末次給藥30 min后，用二甲苯0.1 mL均勻涂布于各小鼠右耳的正反面，30 min后脫臼處死，用6 mm打孔器在兩耳同一部位扎下左右耳片，精密稱重，以右耳的重量減去左耳的重量作為耳廓炎性腫脹度，計算右耳腫脹度及抑制率。

2.2.2 棉球肉芽腫致小鼠炎癥模型試驗[10]

選取健康ICR小鼠120只，雌雄各半，隨機(jī)分6組，每組10只。在乙醚淺麻醉下腹部切口，將已高壓滅菌的5.0 mg棉球植入小鼠右側(cè)腋窩皮下，縫合?？瞻讓φ战M灌胃生理鹽水20 mL/kg，陽性對照組用阿司匹林0.5 g/kg，提取物按0.5 g/kg劑量給藥，連續(xù)7 d。末次給藥1 h后處死小鼠，取出棉球，在70 ℃烘箱中干燥2 d后稱重，減去原棉球重量即為肉芽腫重量，計算小鼠肉芽腫脹抑制率。

2.2.3 小鼠熱板法痛閾測定試驗[11]

選擇雌性健康小鼠120只，置于(55.0±0.1)℃分別測定其痛閾，挑選出痛閾值在5～30s的小鼠，隨機(jī)分6組，空白對照組灌胃生理鹽水20 mL/kg，提取物按0.5 g/kg劑量給藥，連續(xù)給藥7d，羅通定組灌胃給藥0.5 g/kg，各組末次給藥1h后，將小鼠置于(55.0±0.1)℃的熱板儀中，記錄小鼠自投入熱板儀后第一次舔足所用的時間，作為該鼠的痛閾值。

2.2.4 醋酸致小鼠扭體試驗

選擇健康小鼠120只，雌雄各半，隨機(jī)分為6組。空白對照組灌胃生理鹽水20mL/kg；提取物灌胃1次/d，連續(xù)7 d，給藥量為0.5g/kg，羅通定組灌胃給藥0.5 g/kg，各組末次給藥1h后，腹腔注射0.5 %冰醋酸10mL/kg，記錄各組小鼠給藥后15 min內(nèi)的扭體(伸縮后肢、蠕行、臀部抬高、腹部收縮內(nèi)凹)的次數(shù)。

2.3 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用SPSS(13.0)進(jìn)行單因素方差分析，Excel統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。

3 結(jié)果

3.1 竹黃不同提取部位對二甲苯致小鼠急性耳廓腫的影響

與空白對照組相比較，竹黃的乙酸乙酯和水的極性提取部位對二甲苯引起的小鼠的耳腫脹有顯著抑制作用(P<0.05)；而正丁醇部位和石油醚部位與生理鹽水相比較，組間差異P>0.05，不具統(tǒng)計學(xué)意義。其中，水提物的腫脹抑制率達(dá)到81.45%，阿司匹林也有顯著的抑制作用(P<0.01)，見表1。

表1 竹黃不同提取部位對二甲苯致 小鼠急性耳廓腫的影響

注：與空白對照比較，**P<0.01，*P<0.05

3.2 竹黃不同提取部位對棉球肉芽腫致小鼠炎癥模型的影響

與空白對照組相比較，阿司匹林陽性對照和各極性提取部位均P>0.05，無統(tǒng)計學(xué)意義。但從抑制率看來，各極性提取部位和阿司匹林的抑制率不相上下。存在兩種情況，一是藥物對肉芽腫脹度無影響，二是各藥物對肉芽腫脹度影響一致，見表2。

表2 竹黃不同提取部位對棉球肉芽腫 致小鼠炎癥模型的影響

3.3 竹黃不同提取部位對熱刺激小鼠痛閾值的影響

從表3可知，相對于羅通定組陽性對照，石油醚極性部位對熱刺激小鼠的痛閾率影響較大；除石油醚極性提取部位之外，其他的極性提取部位也都具有提高痛閾的活性成分。

表3 竹黃不同提取部位對熱刺激小鼠、 痛閾值的影響

3.4 竹黃不同提取部位對醋酸致小鼠扭體的影響

與空白對照組相比較，陽性對照組羅通定對小鼠的扭體次數(shù)影響差異顯著(P<0.05)，而竹黃其他極性提取部位與生理鹽水相比較，組間差異P>0.05，無統(tǒng)計學(xué)意義。但是乙酸乙酯部位和水提物部位均有一定的抑制率，而石油醚部位和正丁醇部位抑制率為負(fù)值，無數(shù)學(xué)意義，見表4。

表4 竹黃不同提取部位對醋酸致小鼠扭體的影響

注：與空白對照比較，**P<0.01，*P<0.05

4 討論

中藥的化學(xué)組成成分非常復(fù)雜，藥理活性成分的作用是綜合性的，有些成分既具有治療作用，也具有一定的毒性。本實驗通過采用傳統(tǒng)的抗炎鎮(zhèn)痛模型對竹黃醇提物的不同萃取部位進(jìn)行探究，初步確定極性水提物為竹黃抗炎鎮(zhèn)痛的最佳活性部位，為以后的應(yīng)用提供了理論依據(jù)，但是，其活性成分并沒有完全明確，因此，竹黃的研究有待更進(jìn)一步。