王 九，張存莉，劉曉光

( 1.西北農(nóng)林科技大學(xué),陜西 楊凌 712100;2.天方藥業(yè)有限公司，河南 駐馬店 463000)

天方藥業(yè)有限公司利巴韋林注射液的注冊(cè)工藝中一是滅菌工藝為110℃，30min的濕熱滅菌，該滅菌程序得到的產(chǎn)品FO值小于8，產(chǎn)品無(wú)菌保證水平較低，產(chǎn)品的無(wú)菌性無(wú)法得到保障；二是，注冊(cè)處方中原料藥投料量為標(biāo)示量的102%為過(guò)量投料，且活性炭用量為0.4%，用量占處方比例較大，造成原輔料成本較高，環(huán)境污染較大。本研究?jī)?nèi)容主要通過(guò)滅菌條件篩選試驗(yàn)、藥液pH值影響試驗(yàn)、活性炭吸附試驗(yàn)摸索出最優(yōu)的處方工藝，提高產(chǎn)品的滅菌條件，提高產(chǎn)品的無(wú)菌保證水平，同時(shí)改善處方中原料藥和活性炭用量，降低生產(chǎn)成本，改善生產(chǎn)環(huán)境。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 試藥

利巴韋林原料藥：廣東肇慶星湖生物科技股份有限公司星湖生化制藥廠；活性炭(供注射用)：寧國(guó)市恒達(dá)活性炭有限公司；氫氧化鈉：河南爾康制藥股份有限公司；注射用水：自制。

1.2 儀器

高效液相色譜儀(Agilent 1100型；編號(hào)：SN/DE14814213)；高效液相色譜儀(Agilent 1260型；編號(hào)：HYS1-116)；電子天平(MS105DU型；編號(hào)：HYS1-134 )；pH酸度計(jì)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 目前處方工藝

我公司利巴韋林注射液目前制備方法為：在濃配罐內(nèi)加入約3/4配制量的注射用水，開(kāi)啟攪拌器，加入配制量的利巴韋林，待原輔料全部溶解后，關(guān)閉攪拌器，補(bǔ)加注射用水至配制量。開(kāi)啟冷卻水閥門開(kāi)始降溫，攪拌、回流10min，取樣由車間化驗(yàn)員檢驗(yàn)pH值、含量，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果用10%NaOH溶液或10%鹽酸溶液調(diào)pH值至4.3～4.5，待pH值(4.3～4.5)、含量(95%～98%)合格后，加入用藥液濕潤(rùn)好的活性炭(供注射用)，攪勻。藥液溫度降至60℃以下時(shí),抽濾到稀配罐中，開(kāi)啟循環(huán)泵或同時(shí)開(kāi)啟攪拌器，循環(huán)回流20min后，過(guò)濾時(shí)終端串聯(lián)兩個(gè)0.22μm的聚醚砜膜折疊濾芯進(jìn)行藥液過(guò)濾，在最后一道濾器取樣口取樣復(fù)測(cè)性狀、pH值、含量，經(jīng)過(guò)濾器過(guò)濾，在灌封室下藥口取樣，燈檢無(wú)可見(jiàn)異物后供灌封。安瓿瓶經(jīng)洗瓶機(jī)清洗后，傳入隧道烘箱進(jìn)行烘干滅菌。調(diào)節(jié)速度和灌裝裝量后進(jìn)行灌裝、熔封。濕熱滅菌110℃，30min。燈檢、包裝。處方配比表見(jiàn)表1。調(diào)pH值試劑用10%鹽酸溶液或10%氫氧化鈉溶液。10%鹽酸溶液：取鹽酸234mL，加注射用水至1000mL攪勻即得。

10%NaOH溶液：稱取100gNaOH加注射用水至1000mL，攪拌溶解均勻即得。

表1 處方配比表Tab.1 Prescription balance sheet

2.2 滅菌條件考察

按照國(guó)食藥監(jiān)[2008]7號(hào)文《化學(xué)藥品注射劑基本技術(shù)要求》中的要求首選過(guò)度殺滅法(F0≥12)，其次選擇殘存概率法(8≤F0<12)對(duì)現(xiàn)有滅菌工藝進(jìn)行優(yōu)化研究。具體實(shí)驗(yàn)方法為：按現(xiàn)有處方配比稱量原輔料，按原處方工藝配制三份樣各1000mL，然后再把每份樣品平均分成四份，三份樣品進(jìn)行滅菌，一份樣品不滅菌。樣品滅菌時(shí)，一份選擇能使F0≥12時(shí)，注射劑滅菌常用的滅菌條件121℃×15min，一份選擇使8≤F0<12時(shí)，注射劑滅菌常用的滅菌條件115℃×30min、121℃×8min，另外一份采用現(xiàn)有處方工藝中的滅菌條件110℃×30min(F0<8，流通蒸汽滅菌)對(duì)樣品進(jìn)行濕熱滅菌。檢測(cè)不同滅菌條件下樣品的性狀、有關(guān)物質(zhì)、pH值、含量。

2.3 藥液pH值的考察

注射劑產(chǎn)品由于其劑型特點(diǎn)，其處方組成、過(guò)程控制參數(shù)及工藝參數(shù)將很大程度上影響產(chǎn)品的質(zhì)量及其穩(wěn)定性。如工藝處方不合理或過(guò)程控制參數(shù)控制范圍設(shè)置不恰當(dāng)，將會(huì)影響產(chǎn)品質(zhì)量或者使產(chǎn)品發(fā)生氧化或降解。注射劑滅菌溫度和時(shí)間的變化，一般會(huì)引起產(chǎn)品有關(guān)物質(zhì)、含量等的變化。由第一章可知其從分子結(jié)構(gòu)上看可視為磷酸腺苷和磷酸鳥苷生物合成前體氨基咪唑酰氨核苷的類似物。主要有核糖基和三唑酰胺兩部分組成。美國(guó)藥典USP37中記載其主要已知雜質(zhì)為利巴韋林酸和三唑酰胺、尿嘧啶和尿苷，其中，尿嘧啶和尿苷為利巴韋林原料藥合成過(guò)程中產(chǎn)生，利巴韋林酸和三唑酰胺是在制劑生產(chǎn)過(guò)程中產(chǎn)生。其產(chǎn)生的原因可能為利巴韋林水溶液在高溫和酸堿的催化作用下發(fā)生了水解反應(yīng)。一是，其分子結(jié)構(gòu)中的酰胺官能團(tuán)被羥基代替生成了利巴韋林酸，二是，C-N鍵斷裂生成核糖和三唑酰胺，其化學(xué)反應(yīng)方程式為：

水解是藥物降解的主要途徑之一，其降解的程度受溶液的pH值值影響較大，不適宜的pH值值會(huì)加速藥物的水解，因此需要確定最穩(wěn)定的藥液pH值值。實(shí)驗(yàn)方法為：按照處方工藝分別配制pH值為4.2、4.6、5.0、5.4、5.8的樣品溶液各1800mL，然后將每份溶液平均分成九份，每三份分別在115℃×30min和121℃×8min、121℃×15min三個(gè)滅菌條件下進(jìn)行滅菌，考察不同滅菌條件下樣品的性狀、有關(guān)物質(zhì)、pH值、含量。

2.4 活性炭吸附的考察

將原處方工藝中藥液的pH值控制范圍調(diào)整為5.2～5.4配制藥液，將樣品在以上確定的115℃×30min下滅菌，考察活性炭對(duì)主藥的吸附作用。

實(shí)驗(yàn)方法：按處方工藝配制3600mL溶液，平均分成18份，每三份分別按(W/V)0.00%、0.01%、0.05%、0.1%、0.2%、0.4%比例加入活性炭。除菌過(guò)濾后，于115℃、30min條件下滅菌。檢測(cè)樣品性狀、含量、細(xì)菌內(nèi)毒素、無(wú)菌、單雜、總雜。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果和分析

3.1 滅菌條件考察

滅菌條件的考察結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 不同滅菌條件下檢測(cè)結(jié)果Tab.1 Test results under different sterilization conditions

由表2的檢測(cè)結(jié)果可見(jiàn)：不同滅菌條件下樣品的性狀、變化不大，pH值、單個(gè)雜質(zhì)與總雜質(zhì)和含量變化較大。隨著滅菌溫度的升高，有關(guān)物質(zhì)升高、含量下降。在115℃×30min和121℃×8min兩個(gè)滅菌條件下單雜和總雜已接近標(biāo)準(zhǔn)限度，在121℃×15min滅菌條件下，單雜和總雜已超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)限度不合格；四個(gè)滅菌條件下，含量呈下降趨勢(shì)，下降幅度不大，仍在合格范圍內(nèi)，與理論投料量相比，含量下降約5～7個(gè)點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：按目前的處方工藝配制藥液，隨著滅菌溫度的升高，樣品的有關(guān)物質(zhì)逐漸升高出現(xiàn)不合格現(xiàn)象，且含量呈下降趨勢(shì)。若要提高滅菌條件，需解決滅菌過(guò)程中雜質(zhì)升高和含量下降的問(wèn)題。

3.2 藥液pH值的考察

藥液pH值的考察結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 115℃×30min滅菌時(shí)不同pH值檢測(cè)結(jié)果Tab.3 115 ℃ by 30 minutes of sterilization in different pH value test results

表4 121℃×8min滅菌時(shí)不同pH值檢測(cè)結(jié)果Tab.4 121 ℃ by 8 minutes of sterilization in different pH value test results

表5 121℃×15min滅菌時(shí)不同pH值檢測(cè)結(jié)果Tab.5 121℃ by 15 minutes of sterilization in different pH value test results

由表3、表4、表5的檢測(cè)結(jié)果可見(jiàn)：三個(gè)滅菌條件下，性狀、pH值、含量均在合格范圍內(nèi)；有關(guān)物質(zhì)隨pH值增大而減??；當(dāng)pH值為5.3時(shí)，115℃×30min滅菌條件下，有關(guān)物質(zhì)含量和原工藝有關(guān)物質(zhì)含量基本一致，121℃×8min和121℃×15min兩個(gè)滅菌條件有關(guān)物質(zhì)含量高于原工藝有關(guān)物質(zhì)含量。經(jīng)綜合分析可以看出，pH值控制在5.3左右，滅菌條件為115℃×30min時(shí)，樣品的各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)最佳。

3.3 活性炭吸附的考察

活性炭吸附的考察結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 不同活性炭比例檢測(cè)結(jié)果Tab.6 Different activated carbon ratio test results

由表6的檢測(cè)結(jié)果可見(jiàn)：加入不同比例的活性炭樣品性狀、細(xì)菌內(nèi)毒素、無(wú)菌均符合規(guī)定；活性炭用量對(duì)單雜、總雜影響不明顯；活性炭加入比例在0.01%～0.1%時(shí)，含量變化不明顯，加入比例在0.1%～0.4%時(shí)，隨加入比例的增加含量明顯降低，說(shuō)明活性炭對(duì)主要吸附較大；帶菌量隨活性炭加入比例的減小而增大，在加入比例為0.05%時(shí)，帶菌量已超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)限度。根據(jù)以上分析結(jié)果可知，活性炭加入比例在0.1%時(shí)，各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)檢測(cè)合格，，因此，確定0.1%為處方中活性炭的加入比例，同時(shí)，通過(guò)試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)活性炭加入比例為0.1%時(shí)，含量下降為2點(diǎn)左右均在100%左右，由此處方中考慮將102%投料改為100%投料。

3.4 優(yōu)化后的完整處方工藝

3.4.1 處方配比

優(yōu)化后的處方配比見(jiàn)表7。

表7 優(yōu)化后的處方配比Tab.7 Optimized prescription mix.

3.4.2 制備方法

在濃配罐內(nèi)加入約3/4配制量的注射用水，開(kāi)啟攪拌器，加入配制量的利巴韋林，待原輔料全部溶解后，關(guān)閉攪拌器，補(bǔ)加注射用水至配制量。開(kāi)啟冷卻水閥門開(kāi)始降溫，攪拌、回流10min，取樣由車間化驗(yàn)員檢驗(yàn)pH值、含量，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果用10%NaOH溶液或10%鹽酸溶液調(diào)pH值至5.2～5.4，待pH值(5.2～5.4)、含量(96%～100%)合格后，加入用藥液濕潤(rùn)好的活性炭(供注射用)，攪勻。藥液溫度降至60℃以下時(shí),抽濾到稀配罐中，開(kāi)啟循環(huán)泵或同時(shí)開(kāi)啟攪拌器，循環(huán)回流20min后，過(guò)濾時(shí)終端串聯(lián)兩個(gè)0.22μm的聚醚砜膜折疊濾芯進(jìn)行藥液過(guò)濾，在最后一道濾器取樣口取樣復(fù)測(cè)性狀、pH值、含量，經(jīng)過(guò)濾器過(guò)濾，在灌封室下藥口取樣，燈檢無(wú)可見(jiàn)異物后供灌封。安瓿瓶經(jīng)洗瓶機(jī)清洗后，傳入隧道烘箱進(jìn)行烘干滅菌。調(diào)節(jié)速度和灌裝裝量后進(jìn)行灌裝、熔封。濕熱滅菌115℃，30min。燈檢、包裝。處方配見(jiàn)表1。調(diào)pH值試劑用10%鹽酸溶液或10%氫氧化鈉溶液。10%鹽酸溶液：取鹽酸234mL，加注射用水至1000mL攪勻即得。

10%NaOH溶液：稱取100gNaOH加注射用水至1000mL，攪拌溶解均勻即得。

4 討論

為提高產(chǎn)品質(zhì)量無(wú)菌保證水平及順應(yīng)國(guó)家藥品生產(chǎn)的相關(guān)法律法規(guī)的要求(小容量注射劑首選終端滅菌工藝)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中首先進(jìn)行了滅菌條件的考察，按照殘存概率法和過(guò)度殺滅法常用滅菌參數(shù)分別設(shè)計(jì)了115℃×30min、121℃×8min和121℃×30min三個(gè)滅菌條件及現(xiàn)處方工藝滅菌條件。對(duì)四個(gè)滅菌條件下滅菌后的樣品進(jìn)行性狀、有關(guān)物質(zhì)、含量、pH值質(zhì)量指標(biāo)的考察。通過(guò)考察發(fā)現(xiàn)有關(guān)物質(zhì)受滅菌溫度和時(shí)間的影響較大，通過(guò)對(duì)該產(chǎn)品雜質(zhì)和穩(wěn)定性影響因素的分析，確定藥液pH值有可能影響產(chǎn)品的有關(guān)物質(zhì)，因此對(duì)藥液pH值控制范圍進(jìn)行了考察，通過(guò)考察發(fā)現(xiàn)藥液pH值控制在5.2～5.4、滅菌條件為115℃×30min時(shí)，產(chǎn)品的性狀、含量、有關(guān)物質(zhì)等各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)均合格。達(dá)到了使產(chǎn)品的F0值由小于8變?yōu)榇笥?的目的。確保了產(chǎn)品的無(wú)菌性，使生產(chǎn)模式由除菌過(guò)濾加無(wú)菌生產(chǎn)改變?yōu)榻K端滅菌模式，使我公司在該產(chǎn)品的環(huán)境控制難度、生產(chǎn)控制難度及生產(chǎn)成本上都得到了較大的改善和提高。另外，針對(duì)目前處方中102%過(guò)量投料的情況，進(jìn)行了活性炭吸附試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)活性炭加入比例為0.1%時(shí)，藥液帶菌量等各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)均合格，確定了最佳活性炭加入量為0.1%。活性炭加入量為0.1%時(shí)，藥液含量相比原處方工藝(102%投料)下降2個(gè)百分點(diǎn)左右，含量下降不明顯，因此，考慮將102%投料改為100%標(biāo)示量投料。