王永梅

方法學(xué)評(píng)價(jià)不僅是實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的必需條件，更是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理的基本要求。臨床醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室在檢測(cè)項(xiàng)目開(kāi)展之前，首先核實(shí)和驗(yàn)證性能參數(shù)是否與廠家聲明的性能相符，或者是否滿足臨床的需要。同時(shí)可以利用檢測(cè)系統(tǒng)的性能參數(shù)，正確解讀報(bào)告結(jié)果及合理解釋檢測(cè)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)方法學(xué)進(jìn)行評(píng)價(jià)，包括準(zhǔn)確度、精密度、線性范圍、穩(wěn)定性、參考范圍等。

競(jìng)技體育運(yùn)動(dòng)員在長(zhǎng)期運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練過(guò)程中對(duì)運(yùn)動(dòng)刺激已經(jīng)適應(yīng)，相對(duì)于正常人群，他們的各種生化指標(biāo)對(duì)運(yùn)動(dòng)反應(yīng)產(chǎn)生的變化就顯得沒(méi)有那么敏感，此時(shí)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可信度對(duì)科研人員進(jìn)行機(jī)能評(píng)定就顯得極其重要，而且對(duì)于運(yùn)動(dòng)員和教練員執(zhí)行及調(diào)整訓(xùn)練計(jì)劃也能提供可靠的科學(xué)依據(jù)。因此運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練監(jiān)控檢測(cè)需要更高的靈敏度、穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性。

本文參照CLSI指南有關(guān)文件，借鑒臨床醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室性能驗(yàn)證方法，選擇常規(guī)生化測(cè)試項(xiàng)目血尿素氮（BUN）、肌酸激酶（CK），從精密度、正確度、參考區(qū)間等[1]，驗(yàn)證7100全自動(dòng)生化分析儀的分析系統(tǒng)。建立符合本實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理要求的評(píng)價(jià)體系，確保檢測(cè)質(zhì)量。最終通過(guò)室間質(zhì)評(píng)考核為全運(yùn)會(huì)奧運(yùn)會(huì)備戰(zhàn)積累個(gè)體化數(shù)據(jù)，從而更好地服務(wù)于體育科研。

1 研究對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

1.1.1 樣本

上海東方綠舟體育訓(xùn)練基地女足、男排、女排、游泳等項(xiàng)目一線運(yùn)動(dòng)員共40名，其中男子20名，女子 20 名，平均年齡為（23.4±2.1）歲。

1.1.2 儀器及試劑

日立7100全自動(dòng)生化分析儀，采用日本和光株式會(huì)社BUN、CK試劑及配套校準(zhǔn)品。

1.1.3 質(zhì)控品

上海市臨床檢驗(yàn)中心下發(fā)的Beckman質(zhì)控品，水平 1（407081）、水平 2（407082）、水平 3（407083）。

1.2 .方法

實(shí)驗(yàn)過(guò)程均按實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范相關(guān)要求，定期維護(hù)保養(yǎng)、校準(zhǔn)，所有數(shù)據(jù)測(cè)試前均進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控操作，確保質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)在控時(shí)，再進(jìn)行樣本測(cè)試。

1.2.1 精密度驗(yàn)證

按照EP5-A2文件，使用Beckman低、中、高值3個(gè)水平的質(zhì)控血清作為精密度評(píng)估樣本。每天進(jìn)行常規(guī)質(zhì)量控制，剔除失控?cái)?shù)據(jù)[2]。1.2.1.1批內(nèi)精密度

Beckman高、中、低3個(gè)水平質(zhì)控品重復(fù)測(cè)試20次，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)（CV）。1.2.1.2批間精密度

3個(gè)水平質(zhì)控品每天重復(fù)測(cè)試2次，取平均值，連續(xù)測(cè)試20 d，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差和CV。1.2.1.3判定標(biāo)準(zhǔn)

批內(nèi)精密度＜1/4TEa（總允許誤差）、批間精密度 ＜1/3TEa。

1.2.2 正確度驗(yàn)證

本實(shí)驗(yàn)室采用2016年5月和2016年9月兩次上海市臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)評(píng)回報(bào)結(jié)果作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)回報(bào)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)算本參評(píng)實(shí)驗(yàn)室每個(gè)項(xiàng)目的測(cè)定結(jié)果與靶值的偏倚（bias），偏倚%計(jì)算公式為：偏倚%（bias%）=（各實(shí)驗(yàn)室測(cè)量結(jié)果 -靶值）/靶值×100%。偏倚%在允許誤差范圍內(nèi)的結(jié)果為可接受結(jié)果，以每個(gè)項(xiàng)目5個(gè)數(shù)據(jù)中最大偏倚作為該項(xiàng)目的正確度，以不超過(guò)1/2TEa（CLIA’88）為判斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.3 參考區(qū)間驗(yàn)證

根據(jù)NCCLS C28-A2文件進(jìn)行參考區(qū)間驗(yàn)證，在檢驗(yàn)總體中隨機(jī)抽取20個(gè)參考樣本，20個(gè)參考個(gè)體樣本應(yīng)合理地代表實(shí)驗(yàn)室選擇的健康總體，并且滿足其分組標(biāo)準(zhǔn)。每個(gè)樣本重復(fù)測(cè)試兩次取平均值。如果20例參考個(gè)體中不超過(guò)2例的檢測(cè)值在參考范圍之外，那么供應(yīng)商提供的實(shí)驗(yàn)室報(bào)告的95%參考區(qū)間是可以接受的[3]。

2 結(jié)果

2.1 精密度驗(yàn)證

由表1可見(jiàn)，兩個(gè)項(xiàng)目3個(gè)水平的批內(nèi)精密度CV均小于1/4TEa；由表2可見(jiàn)，3個(gè)水平批間精密度的CV均小于1/3TEa。

表1 批內(nèi)精密度檢測(cè)結(jié)果（%）Table I Test Result of the Within-run Precision(%)

表2 批間精密度檢測(cè)結(jié)果（%）Table II Test Result of the Between-run Precision(%)

2.2 正確度驗(yàn)證

由表3和表4可見(jiàn)，2016年兩次上海市臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)評(píng)結(jié)果，正確度均不超過(guò)1/2TEa。

表3 2016年度第一次正確度驗(yàn)證結(jié)果（%）Table III First Accuracy Verification Result in 2016(%)

表4 2016年度第二次正確度驗(yàn)證結(jié)果（%）TableIVSecondAccuracyVerificationResultin2016(%)

2.3 參考區(qū)間驗(yàn)證

由表5可見(jiàn)，本實(shí)驗(yàn)室可以直接使用廠商說(shuō)明書(shū)提供的參考區(qū)間。

3 討論

在實(shí)驗(yàn)室實(shí)際工作過(guò)程中，由于儀器設(shè)備部件的老化和磨損進(jìn)行重大維護(hù)保養(yǎng)或者試劑在運(yùn)輸和儲(chǔ)存條件等狀況發(fā)生變化時(shí)，就需要對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行驗(yàn)證并記錄確認(rèn)結(jié)果，將確認(rèn)過(guò)的程序文件化，完善本實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范文件。

表5 參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果Table V Verification Result of the Reference Range

精密度是檢測(cè)系統(tǒng)方法學(xué)評(píng)價(jià)的基礎(chǔ)，而且本實(shí)驗(yàn)室對(duì)樣品只作單次測(cè)量便發(fā)出報(bào)告，這種情況下精密度性能驗(yàn)證顯得極其重要?？紤]到本實(shí)驗(yàn)室的具體情況，采用EP5-A2文件作為精密度評(píng)估方案依據(jù)，采用CLIA’88要求或生物變異度要求或廠家所聲明的CV作為可接受標(biāo)準(zhǔn)[4]，驗(yàn)證日立7100全自動(dòng)生化分析儀批內(nèi)精密度和批間精密度。從表1可見(jiàn)，BUN和CK高、中、低值3個(gè)水平的批內(nèi)精密度CV均小于1/4TEa；BUN和CK高、中、低值3個(gè)水平批間精密度的CV均小于1/3TEa。兩個(gè)項(xiàng)目的批內(nèi)精密度和批間精密度檢測(cè)結(jié)果均滿足實(shí)際誤差要求。

正確度是大量測(cè)定的均值與真值的接近程度，是表示測(cè)量結(jié)果中系統(tǒng)誤差大小的程度。本次驗(yàn)證是以2016年兩次參加上海臨檢中心室間質(zhì)評(píng)結(jié)果計(jì)算，偏倚%在允許誤差范圍內(nèi)的結(jié)果為可接受結(jié)果。從表3和表4看出，兩次室間質(zhì)評(píng)中十個(gè)樣本BUN和CK兩個(gè)項(xiàng)目的正確度均小于1/2TEa，表明正確度驗(yàn)證均在允許范圍內(nèi)。

參考區(qū)間驗(yàn)證是判斷廠商提供的實(shí)驗(yàn)室報(bào)告的參考區(qū)間是否可以接受，比較小樣本參考值和原始參考值之間的可比性。實(shí)驗(yàn)室在日常生化測(cè)試中，根據(jù)分組和健康標(biāo)準(zhǔn)，抽選出20個(gè)運(yùn)動(dòng)員樣本，使用當(dāng)天新鮮血清標(biāo)本進(jìn)行測(cè)定分析。若3例以上超出區(qū)間界限，重新選擇20個(gè)樣本進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果判斷：R=測(cè)定的結(jié)果在參考范圍例數(shù)/總測(cè)定例數(shù)，若R＞90%，即驗(yàn)證滿足要求。從抽取的參考樣本檢測(cè)結(jié)果表 5可見(jiàn)，BUN結(jié)果范圍為[3.7～7.0]mmol/L，廠家給出的BUN的參考區(qū)間為[2.82～7.06]mmol/L，20個(gè)參考樣本的測(cè)定結(jié)果R＞90%；CK結(jié)果范圍，女性為[56～145]U/L，男性為[51～156]U/L，廠家給出的 CK的參考區(qū)間女性為[34～145]值 U/L，男性為[46～171]U/L，20個(gè)參考樣本的測(cè)定結(jié)果R＞90%。由此判斷本實(shí)驗(yàn)室可以直接使用廠商提供的參考區(qū)間。

綜上驗(yàn)證，7100生化分析儀檢測(cè)系統(tǒng)所選用的驗(yàn)證方案可操作性和實(shí)用性較強(qiáng)，探討了一套較標(biāo)準(zhǔn)的性能驗(yàn)證方案，對(duì)建立標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)范化的實(shí)驗(yàn)室具有重要意義。在提高實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的同時(shí)，不斷提高實(shí)驗(yàn)室操作人員的水平，各指標(biāo)達(dá)到廠家聲稱的范圍，保證了檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。并且進(jìn)一步完善了本實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范（SOP）文件。