桑忠強(qiáng) 沈帥帥 張馨 涂玉花 潘宏超 張?jiān)?/p>

【摘要】目的：通過新型的熒光染液對淺部皮膚真菌病的致病菌進(jìn)行鏡檢，觀察這一新型染液對真菌的檢出率；方法：先后用真菌熒光染液A和B將所刮取的鱗屑、甲屑及毛囊內(nèi)容物充分溶解后，將玻片放置在OlympusCX23熒光顯微鏡上的載玻臺(tái)上鏡檢，尋找菌絲和抱子；結(jié)果：應(yīng)用這一新型染液對常見皮膚淺部真菌的檢出率達(dá)到77.8%，相對于傳統(tǒng)的氫氧化鉀（KOH）溶液鏡檢法檢出率高，檢出時(shí)間短，辮識(shí)度高；結(jié)論：萊芙敏特真菌熒光染液對淺部致病真菌的檢出率高，快速簡單容易操作，可以為臨床醫(yī)生對淺部真菌感染的診斷和治療提供一個(gè)快捷準(zhǔn)確的方法。

【關(guān)鍵詞】萊芙敏特真菌熒光染液；淺部皮膚真菌??；檢出報(bào)告

淺部真菌病是一種主要寄生在人體皮膚表層的常見真菌引起的一種感染，其致病菌包括皮膚癬菌、念珠菌、霉菌以及馬拉色菌等，臨床上常見的淺部真菌病有花斑癬，糠秕孢子菌毛囊炎，股癬，手癬，腳癬以及甲癬等[1，2]，傳統(tǒng)的真菌鏡檢法為KOH鏡檢法，這種方法有一定的優(yōu)勢，但存在檢出率低的問題[3，4]，并且檢測花費(fèi)時(shí)間較長，而真菌培養(yǎng)雖然可以準(zhǔn)確鑒定，但是操作起來較為復(fù)雜，且出報(bào)告的所需時(shí)間較長，給臨床醫(yī)生的診治帶來一定的困擾。我科室從2017年5月至7月期間對門診就診的淺部真菌病患者的皮屑做真菌熒光染色鏡檢，并對鏡檢情況進(jìn)行匯總，現(xiàn)將結(jié)果匯報(bào)如下：

1 資料和方法

1.1 資料

1.1.1 病人資料

統(tǒng)計(jì)我科2017年5月至2017年7月間的門診就診時(shí)初步診斷為淺部真菌感染的患者分別進(jìn)行真菌熒光染液鏡檢，診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《中國臨床皮膚病學(xué)[5]》，這期間鏡檢的病人數(shù)為216人次，男133例，女83例，其中臨床診斷為股癬的有59例，花斑癬的有34例，糠秕孢子菌毛囊炎有12例，手癬30例，腳癬42例，甲癬39例，鏡檢陰性患者為60例，其中12例為手癬，22例為腳癬，26例為甲癬，年齡2-75歲，平均37.3±1.2歲，病程5d-28年，平均4.2年。入選病例均確定真菌熒光檢測前1月內(nèi)未口服或外用過抗真菌藥。

1.1.2 試劑材料及儀器

萊芙敏特真菌染液試劑盒（A液和B液200T），OlympusCX23熒光顯微鏡Toupeam Industrial Digtal攝像頭，Toupview軟件，載玻片，玻片，刮刀，紅外接種滅菌器。

1.2 方法

1.2.1 染色步驟

（1）應(yīng)用滅菌過的刮刀刮取新近被侵染的組織，如癬病的邊緣性損害、新鮮的水庖、頭癬的斷發(fā)、甲真菌病的甲板深層、馬拉色菌毛囊炎的毛囊內(nèi)容物等，并用刮刀均勻涂抹在載玻片上；（2）將載玻片放置在水平位置上，直接向皮屑樣本中央滴一滴染色A液，染色液以覆蓋或淹沒整個(gè)樣品為準(zhǔn)，使其中成分與多聚物進(jìn)行充分的結(jié)合反應(yīng)，持續(xù)染色2min；（3）2min后，直接向樣本滴上一滴染色B液，染色液以覆蓋或淹沒整個(gè)樣品為準(zhǔn)，持續(xù)染色2min；（4）蓋上蓋玻片，吸去多余染液，置于熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察；

1.2.2 鏡檢

先用低倍鏡下對焦（×10），打開熒光按鈕，先在低倍顯微鏡下查看目標(biāo)視野，微調(diào)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，目標(biāo)視野對焦清晰后，換成高倍鏡（×40），微調(diào)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，觀察是否有菌絲及孢子，找到最清晰的視野后，打開Toupview軟件，調(diào)節(jié)破片位置及細(xì)準(zhǔn)焦螺旋直至軟件視頻區(qū)出現(xiàn)一個(gè)最清晰的圖像，點(diǎn)擊捕獲，然后保存

2 結(jié)果

（1）對2017年5月至2017年7月期間的病人的初步診斷以及鏡檢結(jié)果進(jìn)行列表統(tǒng)計(jì)，其中花斑癬34例、糠秕孢子菌毛囊炎12例，股癬59例，手癬30例，腳癬42例，甲癬39例，檢出率分別位100%、100%、100%、60%、47.6%、33.3%，總的檢出率為72.2%.如表1所示。

（2）鏡檢圖片。分別選取各種皮膚淺部真菌病的一張較為典型的真菌熒光鏡檢圖片，如圖1至圖4所示。

3 討論

萊芙敏特真菌熒光染液是一款新型的快速檢測真菌病原體的產(chǎn)品，可以用于檢測皮屑、甲屑以及毛囊內(nèi)容物組織中可能存在的各類真菌。該試劑盒中配有染色A液和染色B液，A液是一種含有高純度熒光素的復(fù)合溶液，染液B是一種含特定比例背景光壓制溶液。熒光素將與組織中可能存在的細(xì)胞壁β-多糖結(jié)合，如幾丁質(zhì)和纖維素等，從而標(biāo)記熒光，在特定檢驗(yàn)波長下進(jìn)行檢測。相對于傳統(tǒng)的真菌鏡檢方法，這種新型熒光染液的檢測方法檢出率較KOH檢測法檢出率較高，操作起來方便、高效、快速，可以去除因?yàn)殡s質(zhì)的干擾，相當(dāng)于在真菌的細(xì)胞壁上加上了一個(gè)探針標(biāo)記，只要所刮取的皮屑、甲屑以及毛囊內(nèi)容物中存在真菌，都能被熒光標(biāo)記，從而在特定檢測波長下被顯示，大大縮小了鏡下尋找真菌的視野范圍，并能大大縮短尋找時(shí)間，排除了其他因雜質(zhì)、光線折射所造成的干擾，大大提高了檢出率。但同時(shí)，該真菌熒光染液對手癬、腳癬及甲癬的檢出率較低，分析其原因可能和取材部位有較大關(guān)系，因?yàn)檎契挪科ば家约凹仔嫉慕琴|(zhì)層較厚，熒光染液要對里面的真菌進(jìn)行標(biāo)記就必須充分溶解角質(zhì)層[6]，分析有可能染液和皮屑的結(jié)合時(shí)間應(yīng)該適當(dāng)延長，再者，有可能所取的皮屑里面有可能沒有真菌，比如像甲癬患者其致病菌如皮膚癬菌、酵母菌和霉菌侵犯部位較深，往往可能在甲板下，甲床上，所以當(dāng)取甲癬患者的趾甲屑時(shí)，有可能沒有刮取到到含有真菌的甲屑，所以造成了甲癬的檢出率較低[7]，而該染液在本次實(shí)驗(yàn)研究中對花斑癬、馬拉色菌毛囊炎和股癬的檢出率都達(dá)到了100%。

萊芙敏特真菌熒光染液檢測試劑盒給皮膚科醫(yī)生提供了一個(gè)很好的真菌檢測方法，對淺部真菌感染的診治提供了一個(gè)迅捷高效的通道，但同時(shí)臨床醫(yī)生在對手癬、腳癬以及甲癬患者進(jìn)行熒光染液檢測時(shí)，還是要結(jié)合患者的臨床表現(xiàn)以及皮損特征確定最終的治療方案。

參考文獻(xiàn)

[1]戴輝，許愛娥，孫學(xué)成等.共聚焦激光掃描顯微鏡在皮膚淺部真菌感染診斷中應(yīng)用價(jià)值的評(píng)估[J].中華皮膚科雜志，2012，45（08）：584-586.

[2]劉麗，賴維，龔子鑒等.淺部真菌感染臨床診斷與真菌鏡檢及培養(yǎng)結(jié)果的差異性比較[J].臨床皮膚科雜志，2009，38（01）：12-14.

[3]劉壽全，徐媛媛，閻巖等.甲真菌病甲板真菌鏡檢方法的探討[11.中國皮膚性病學(xué)雜志，2009，23（05）：316-316.

[4]袁中行，仇紅霞，劉慶勇等.改良復(fù)方KOH在真菌鏡檢中應(yīng)用效果分析[J].中國皮膚性病學(xué)雜志，2011，25（12）：993-994.

[5]趙辮.中國臨床皮膚病學(xué)[M].南京：江蘇科學(xué)技術(shù)出版社，2010：555-569

[6]陽眉，蘭長貴，梅曉鋒等.3種真菌直接鏡檢溶液診斷甲真菌病的比較研究[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2013，10（03）：275-276.

[7]余進(jìn)，李若瑜.醫(yī)學(xué)真菌實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢查方法[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2009，32（01）：114-116.