祝帥，朱鳳蒙，雍道敬

（青島中達(dá)農(nóng)業(yè)科技有限公司，山東青島266109）

蘋果樹腐爛病俗稱臭皮病、爛皮病、串皮病，是一種為害極其嚴(yán)重的毀滅性病害，在我國各蘋果產(chǎn)區(qū)都有不同程度的發(fā)生，主要危害主枝主干，導(dǎo)致死枝死樹，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致毀園，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，制約了我國蘋果產(chǎn)業(yè)的持續(xù)性發(fā)展[1-3]。2011年，王彩霞等[4]調(diào)查表明山東煙臺(tái)蘋果產(chǎn)區(qū)腐爛病不但發(fā)生嚴(yán)重且發(fā)病持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，5月份調(diào)查時(shí)，枝條上仍有大量新發(fā)生而未經(jīng)刮治的病斑。而目前尚未發(fā)現(xiàn)有效抗腐爛病的栽培品種[5，6]，國內(nèi)有關(guān)蘋果樹腐爛病的防治主要集中于藥劑方法[7]。為了篩選出防治蘋果樹腐爛病的高效殺菌劑，在室內(nèi)進(jìn)行了幾種殺菌劑對(duì)蘋果樹腐爛病菌的藥效測(cè)定，并進(jìn)行田間藥效試驗(yàn)，以期為腐爛病的防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試菌株：蘋果樹腐爛病菌強(qiáng)致病力菌株LXS080301，采集自山東棲霞富士蘋果園。單菌絲分離后進(jìn)行致病力測(cè)定，保存于5℃冰箱，病原菌在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）上活化后用于室內(nèi)抑菌作用測(cè)定。田間持效期試驗(yàn)使用分生孢子懸浮液，將活化的菌絲接種到大麥粒培養(yǎng)基中，黑光燈下誘導(dǎo)產(chǎn)孢[8]。挑取分生孢子角，加入適量無菌水，混勻，用血球計(jì)數(shù)板將孢子懸浮液濃度調(diào)至1×104個(gè)/mL，加入終濃度為0.1%的吐溫-20，備用。孢子懸浮液現(xiàn)配現(xiàn)用，放置時(shí)間不超過1h。

供試果樹：蘋果樹腐爛病田間藥效試驗(yàn)在膠州果園進(jìn)行，試驗(yàn)用樹為4年生富士蘋果樹，果樹在進(jìn)行藥效試驗(yàn)前5個(gè)月內(nèi)沒有使用過任何殺菌劑。

表1 供試原藥信息Table 1 Information of the test original medicine

供試藥劑：市售成品殺菌劑均通過加工形成相應(yīng)劑型，其中含多種助劑，為消除助劑對(duì)試驗(yàn)的干擾，本試驗(yàn)采用農(nóng)藥原藥配制母液的方法，以期能夠真實(shí)的反應(yīng)殺菌劑的性能[9,10]。根據(jù)已有的報(bào)道和經(jīng)驗(yàn)，選擇對(duì)蘋果樹腐爛病菌可能有效的殺菌劑10種，供試原藥為各農(nóng)藥廠家生產(chǎn)的商品，名稱、有效成分含量、生產(chǎn)廠家詳見表1。

1.2 試驗(yàn)方法

藥液配制及含藥平板制備：將稱量好的各藥劑分別用無菌水配置成所需最高濃度的100倍母液，再依次稀釋成各濃度。無菌條件下，將2mL各濃度藥液加入到98mL滅菌融化的PDA培養(yǎng)基中，搖勻后制備含藥平板。

測(cè)定方法：采用菌絲生長(zhǎng)速率法。將腐爛病菌菌株LXS080301接種于PDA平板中央，25℃黑暗培養(yǎng)3d后，在菌落邊緣打取直徑6mm的菌餅。將菌餅接種于含有相應(yīng)濃度藥劑的PDA平板上，每個(gè)處理重復(fù)3次，以不含藥的培養(yǎng)基為空白對(duì)照。25℃黑暗培養(yǎng)，待空白對(duì)照菌絲長(zhǎng)至培養(yǎng)皿的2/3時(shí)，用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，計(jì)算各處理對(duì)腐爛病菌的抑菌率。

式中，半徑的單位為mm。

1.3 田間藥效試驗(yàn)

選擇生長(zhǎng)良好、健康無病的蘋果樹，用噴霧器將藥液均勻地噴灑到樹上，直到所有枝條都有藥液流下為止，每種藥劑處理1棵果樹，以噴灑清水的果樹為對(duì)照。

表2 病情指數(shù)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)Table 2 Grading standard of disease index

在噴藥后的第 0d、7d、14d、21d，分別從每種藥劑（表3中各藥劑對(duì)應(yīng)的最優(yōu)濃度）處理果樹上剪取3個(gè)一年生枝條，在距離葉柄基部1cm處剪掉所有葉片，避免枝條上造成傷口。從枝條基部開始，截取2段長(zhǎng)15cm的枝條，每種藥劑處理共計(jì)6段枝條。將孢子懸浮液均勻地噴灑到枝條上，直到有水滴流下為止，將接種后的枝條插于組培瓶中水培，轉(zhuǎn)移到25℃培養(yǎng)箱中保濕培養(yǎng)。10d后調(diào)查各處理枝條的病斑，按照表2（見上頁）中的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病情分級(jí)。

根據(jù)調(diào)查結(jié)果計(jì)算腐爛病的病情指數(shù)，同時(shí)計(jì)算各藥劑的防治效果。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同殺菌劑對(duì)蘋果樹腐爛病菌的抑制作用

由表3可知，不同種藥劑對(duì)蘋果樹腐爛病菌的抑菌率存在差異，同一藥劑稀釋倍數(shù)不同，抑菌效果也有差異。結(jié)果表明，供試的10種藥劑中，多菌靈、咪鮮胺、丙環(huán)唑?qū)μO果樹腐爛病菌的抑菌效果較好，在相對(duì)較低的濃度下，抑菌率仍高達(dá)98%以上，能顯著抑制腐爛病菌菌絲的生長(zhǎng)。

表3 10種殺菌劑對(duì)蘋果樹腐爛病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用Table 3 Inhibition of 10 kinds of fungicides on mycelial growth ofValsa mali

表4 10種殺菌劑噴藥后不同時(shí)間的防治效果Table 4 Protective effect of 10 kinds of fungicides at different times after spraying

2.2 不同藥劑對(duì)蘋果樹腐爛病的田間藥效試驗(yàn)

表4顯示了不同藥劑對(duì)蘋果樹腐爛病的田間藥劑試驗(yàn)，由表可以看出，供試10種殺菌劑中，噴藥后第0d接種腐爛病菌的處理對(duì)枝條的防治效果均能達(dá)到98%以上；噴藥后第7d接種腐爛病菌的處理，甲基硫菌靈、戊唑醇、肟菌酯、己唑醇及苯醚甲環(huán)唑的防治效果較差，為61.45%～68.98%，其他殺菌劑的保護(hù)效果均能達(dá)到83%以上；噴藥后第14d接種腐爛病菌的處理，多菌靈、咪鮮胺和丙環(huán)唑的保護(hù)效果較好，為80.40%～83.73%；藥后21d的處理，戊唑醇、肟菌酯、己唑醇以及苯醚甲環(huán)唑的保護(hù)效果都降至10%以下，與對(duì)照相當(dāng)，說明上述藥劑已失去保護(hù)作用。而多菌靈、咪鮮胺及丙環(huán)唑的保護(hù)效果維持在60%以上，仍有一定的保護(hù)效果。

3 討論

多菌靈是一種高效低毒的廣譜內(nèi)吸性殺菌劑，具有內(nèi)吸治療和保護(hù)作用。自20世紀(jì)70年代中期，其迅速代替有機(jī)汞、有機(jī)磷殺菌劑，其作用機(jī)理為干擾病原菌有絲分裂中紡錘體的形成，影響細(xì)胞分裂而起到殺菌作用，對(duì)由半知菌和子囊菌等真菌引起的病害有特效[11，12]。咪鮮胺是一種廣譜高效的咪唑類殺菌劑，其作用機(jī)理為通過抑制麥角甾醇的生物合成，從而使菌體細(xì)胞膜功能受到破壞而起作用[13，14]，可防治由半知菌及子囊菌引起的多種病害，咪鮮胺具有預(yù)防、保護(hù)、治療等多重作用，但無內(nèi)吸性[15]。丙環(huán)唑是屬于甾醇抑制劑中的三唑類殺菌劑，其作用機(jī)理是影響甾醇的生物合成，使病原菌的細(xì)胞膜功能受到破壞，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡，從而起到殺菌、防病和治病的功效，具有殺菌譜廣泛、活性高、殺菌速度快、持效期長(zhǎng)、內(nèi)吸傳導(dǎo)性強(qiáng)等特點(diǎn)，可防治子囊菌、擔(dān)子菌和半知菌引起的病害[16]。室內(nèi)藥劑篩選結(jié)果表明，不同稀釋倍數(shù)的殺菌劑對(duì)蘋果樹腐爛病菌菌絲生長(zhǎng)均有一定的抑制作用，隨著稀釋倍數(shù)的增大，抑制效果減弱，其中多菌靈、咪鮮胺及丙環(huán)唑?qū)Ω癄€病菌菌絲的抑制作用較好。田間藥效試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)，所測(cè)試的10種藥劑在噴藥后第0d和第7d能有效地保護(hù)枝條免受蘋果樹腐爛病菌的侵染，噴藥后的14d，保護(hù)效果明顯下降，噴藥后的第21d只有多菌靈、咪鮮胺及丙環(huán)唑的保護(hù)效果維持在60%以上，這在室內(nèi)試驗(yàn)中也得到了驗(yàn)證。

蘋果樹腐爛病具有潛伏侵染的性質(zhì)，因此，加強(qiáng)果園的栽培管理，增強(qiáng)樹勢(shì)，提高果樹的抗病力，是綜合防治的關(guān)鍵。在實(shí)際病害防治中建議以多菌靈（有效成分）為主，并與以有效成分為丙環(huán)唑或咪鮮胺的藥劑交替使用。