王美麗 戴麗麗 春玲 田香 白玉霞

摘要 目的：建立蒙藥蘇木六味湯散的質量標準。方法：采用薄層色譜（TLC）定性鑒別制劑中蘇木，木香，檳榔，高良姜等；以高效液相色譜法（HPLC）測定蘇木中巴西蘇木素和原蘇木素B的含量：色譜柱Topsil-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈-水（11∶89），檢測波長為285 nm，流速1 mL/min，柱溫30 ℃，進樣量為10 μL。結果：蘇木，木香，檳榔，高良姜TLC圖斑點清晰、專屬性強；巴西蘇木素與原蘇木素B的進樣量分別在112.875～564.375 ng、71.975～359.875 ng范圍內與各自峰面積呈良好的線性關系（r分別為0.9997和0.999 9）。精密度、穩(wěn)定性、重復性實驗RSD%均小2.0%，加樣回收率分別為99.24%、98.06%，RSD分別為0.12%、0.93%。結論：所建立的定性鑒別方法專屬性強、重復性好、定量方法簡便、準確、可靠，可用于傳統(tǒng)蒙藥蘇木六味湯散的質量控制。

關鍵詞 蒙藥蘇木六味湯散；薄層色譜法；高效液相色譜法；巴西蘇木素；原蘇木素B

Abstract Objective：To establish the quality standard of traditional Mongolian Sumu Liuwei Tangsan. Methods：Lignum Sappan， Radix Aucklandiae， Semen Arecae and Rhizoma Alpiniae Officinarum were identified by TLC qualitatively. The content of brazilin and protosappanin B in Lignum Sappan was determined by HPLC. The separation was performed on Topsil C18 （4.6 mm×250 mm， 5 μm） with mobile phase consisted of acetonitrile-water （11∶89） at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was set at 285 nm. The column temperature was 30 ℃. The sample size was 10 μL. Results：The TLC spots of Lignum Sappan， Radix Aucklandiae， Semen Arecae and Rhizoma Alpiniae Officinarum were clear and specific. The linear range was 112.875-564.375 ng for brazilin （r=0.9997） and 71.975-359.875 ng for protosappanin B （r=0.9999） respectively. The RSDs of precision， stability and repeatability tests were no more than 2%. The average recoveries were respectively 99.24 % （RSD=0.12 %， n=6） and 98.06 % （RSD=0.93 %， n=6）. Conclusion：The qualitative identification is specific and reproducible， and quantitative method is simple， accurate and reliable， which can be used for the quality control of traditional medicine Sumu Liuwei Tangsan.

Key Words Mongolian medicine Sumu Liuwei Tangsan； TLC； HPLC； Brazilin； Protosappanin B

中圖分類號：R282.5文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.02.056

蒙藥蘇木六味湯由蘇木（Caesalpinia sappan L）、檳榔（Areca catechu L）、高良姜（Alpinia officnarum Hance）、草果（Amomum tsao-Ko Grevost et Lemaire）、木香（Aucklandia Lappa Decne）、白豆蔻（Amomum Kravanh Pirre ex Gagnep）組成，收載于《內蒙古蒙成藥標準》[1]和《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準·蒙藥分冊》[2]（1998年版）中。具有祛“巴達干·赫依”，行血化瘀功能，臨床主要用于腎寒，腰腿疼痛，婦女痛經(jīng)，血瘀閉經(jīng)等癥，是蒙醫(yī)臨床常用藥之一。雖然已收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準·蒙藥分冊》（1998年版）中，但原標準中僅有處方、制法、性狀、檢查（散劑項下）和功能主治、用法用量等項；沒有鑒別項和含量測定內容，無法對該制劑進行質量控制。為了能夠有效地控制該藥的質量，保證臨床療效，有必要對其進行系統(tǒng)的質量標準研究，提升其原有的標準。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC—20ATvp型HPLC儀，含SPD-M20Avp型檢測器、SHIMADZU-VP色譜工作站（日本島津公司）；AUW220型電子天平（日本島津公司）；KQ-600DB型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；AUY120型電子天平（廣州市新英電器有限公司）；HH-S26S數(shù)顯恒溫水浴鍋（上海躍進醫(yī)療機械廠）。WS701型紅外線快速干燥器（上海錦州屏儀器儀表有限公司通州分公司）；DHG9070型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海精密宏實驗設備有限公司）；ZF-I型三用紫外分析儀（上海顧村電光儀器廠）；紫外分析儀JY02S型（北京君意東方電泳設備有限公司）。

1.2 試劑

巴西蘇木素對照品（中國食品藥品檢定所，供含量測定用，純度>99%，批號：111881-201302）；原蘇木素B對照品（中國食品藥品檢定所，供含量測定用，純度>99%，批號：111882-201302）；水為超純水，其余試劑均為分析純。

1.3 分析樣品

蘇木六味湯散是內蒙古民族大學附屬醫(yī)院（批號：20150504、20140417；規(guī)格：15 g）、內蒙古國際蒙醫(yī)醫(yī)院（批號：20141115；規(guī)格：3 g）、通遼市蒙醫(yī)研究所（批號：20140952；規(guī)格：15 g）、包頭市蒙醫(yī)中醫(yī)醫(yī)院（批號：412183；規(guī)格：21 g）等醫(yī)院的制劑。

2 方法與結果

2.1 蘇木的TLC鑒別[13] 取樣品1 g，加甲醇10 mL，超聲處理30 min，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取蘇木對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。再取巴西蘇木素和原蘇木素B對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液。照TLC試驗，取以上溶液各2 μL，各自點在相同硅膠GF254板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸=8∶4∶1為展開劑，展開，晾干，即刻置于干燥器內12 h后置紫外燈（254 nm）下檢視。樣品的色譜圖中，在與對照品和對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。見圖1。

2.2 高良姜的TLC鑒別[13] 取樣品1 g，加甲醇20 mL，超聲處理20 min，過濾，取續(xù)濾液作為樣品溶液[13]。另取高良姜對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。再取高良姜素對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液。照TLC實驗，吸取上述溶液各2 μL，各自點在相同硅膠薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯-甲醇-冰乙酸10∶1∶1∶0.5上層為展開劑，并展開2次，再晾干，噴10% CH3CH2OH·H2SO4溶液顯色。樣品色譜圖中，與對照品和對照藥材相應的位置上，顯出顏色相同的斑點。見圖2。

2.3 木香的TLC鑒別 取樣品1.5 g，加CH3OH 15 mL，超聲30 min，過濾，濾液蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，即得濾液作為樣品溶液。再取去氫木香內酯、木香烴內酯對照品，加甲醇制成1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶[13]。吸取上述溶液各5 μL，各自點在相同硅膠G板上，以15∶5∶1比例的環(huán)己烷-甲酸乙酯-甲酸作為展開劑，預飽和25 min，展開，當展距約15 cm時取出，晾干。分別噴以5%的香草醛硫酸溶液，于105 ℃加熱至2～3 min斑點清楚，在日光下檢識。樣品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，結果見圖3。

圖2 高良姜薄層色譜鑒別注：1～5供試品；6高良姜對照藥材；7高良姜對照品；8陰性對照

2.4 檳榔的TLC鑒別 取樣品2 g，加濃氨試液適量潤濕，加三氯甲烷80 mL，回流提取30 min，過濾，濾液揮干，殘渣加甲醇0.5 mL，使溶解，作為供試品溶液[13]。另取檳榔對照藥材2 g，同法制成對照藥材溶液。吸取上述溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，置氨蒸氣預報和的展開缸內，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-濃氨試液8∶7∶0.2為展開劑，展開，取出晾干，分別置于碘缸中熏至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。見圖4。

2.5 蘇木中巴西蘇木素和原蘇木素B含量的測定

2.5.1 色譜條件 色譜柱：Topsil-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（11∶89）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：285 nm；柱溫：30 ℃；進樣量為10 μL。

2.5.2 溶液的配制 1）對照品溶液的制備：分別精密稱取巴西蘇木素與原蘇木素B對照品3.01 mg和3.03 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成0.301 mg/mL巴西蘇木素和0.303 mg/mL原蘇木素B的對照品溶液。2）混合對照品溶液的制備：取上述巴西蘇木素對照品溶液（0.301 mg/mL）和原蘇木素B對照品溶液（0.303 mg/mL）再分別精密吸取1.5 mL和0.95 mL至10 mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度。制成每1 mL分別含巴西蘇木素45.15 μg和原蘇木素B 28.79 μg的混合對照品溶液。3）供試品溶液的制備：取蘇木六味湯散約1.5 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入80%的甲醇50 mL，稱定重量加熱回流20 min，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.5.3 系統(tǒng)適用性試驗 精密吸取混合對照品溶液、供試品溶液各10 μL，按色譜條件進樣測定，記錄色譜。見圖5、6。由圖可知，供試品溶液與混合對照品溶液均在相同保留時間處出現(xiàn)巴西蘇木素和原蘇木素B的吸收峰，且與其他組分峰達到基線分離，分離度均大于1.5。理論板數(shù)按原蘇木素B峰計算應不低于3 000。

2.6 線性關系考察 精密吸取上述混合對照品溶液（1 mL分別含巴西蘇木素的濃度為52.8 μg、原蘇木素B 74.2 μg）2.5，5.0，7.5，10.0，12.5 μL注入高效液相色譜儀進行測定。按上述色譜條件測定其峰面積，以進樣量（xng）橫坐標，峰面積（y）為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程分別為：Y巴西蘇木素=2 000 000X-8 636.2（r=0.999 7），Y原蘇木素B=1 000 000X-2 742.5（r=0.999 9）。

結果是巴西蘇木素和原蘇木素B的進樣量分別在112.875～564.375 ng、71.975～359.875 ng范圍內與各自峰面積呈良好的線性關系。見圖7，圖8。

2.7 精密度試驗 稱取蘇木六味湯散（批號：412183、包頭市蒙醫(yī)中醫(yī)醫(yī)院提供）約1.5 g，精密稱定，按供試品制備方法制備待測溶液，再按“2.5.1”項下色譜條件連續(xù)進樣5次，記錄峰面積。

結果是巴西蘇木素和原蘇木素B的峰面積的RSD分別為0.49%、0.49%，表明儀器精密度良好。見表1。

2.8 穩(wěn)定性試驗 取蘇木六味湯散（批號：20140417，內蒙古民族大學附屬醫(yī)院提供）約1.5 g，精密稱定，按供試品制備方法制備待測溶液，分別于室溫下放置2，4，6，8，10，12 h，按“2.5.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。

結果是巴西蘇木素和原蘇木素B的峰面積的RSD分別為1.24%，0.59%。表明供試品溶液在12 h內穩(wěn)定性良好。見表2。

2.9 重復性試驗 稱取蘇木六味湯散（批號：412183，包頭市蒙醫(yī)中醫(yī)醫(yī)院提供）約1.5 g，共6份，分別制備供試品溶液，再按“2.5.1”項下色譜條件進樣測定，平行測定6次，記錄峰面積，計算樣品含量。

結果是巴西蘇木素和原蘇木素B峰面積的RSD分別為1.97%、1.12%（n=6），表明該方法重復性良好。見表3。

2.10 加樣回收率試驗 分別取已知含量的蘇木六味湯散0.75 g，共6份，精密稱定。精密吸取每份適量加巴西蘇木素和原蘇木素B的對照品，制備供試品溶液。再按“2.5.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算加樣回收率。

結果是西蘇木素和原蘇木素B的平均回收率和RSD分別為99.24%、0.12%和98.06%、0.93%。見表4。

2.10 樣品測定 取六批蘇木六味湯散約1.5 g，精密稱定，每批制備3份，再按“2.5.1”項下色譜條件進樣10 μL，每份測定3次，并計算樣品的含量。

結果是民大附院（20140417）、民大附院（20150504）、國際蒙醫(yī)醫(yī)院、包頭中蒙醫(yī)醫(yī)院通遼蒙研所的巴西蘇木素和原蘇木素B平均含量和RSD見表5。

3 討論

蒙藥蘇木六味湯由蘇木（Caesalpinia sappan L）、檳榔（Areca catechu L）、高良姜（Alpinia officnarum Hance）、草果（Amomum tsao-Ko Grevost et Lemaire）、木香（Aucklandia Lappa Decne）、白豆蔻（Amomum Kravanh Pirre ex Gagnep）組成，收載于《內蒙古蒙成藥標準》[1]和《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準·蒙藥分冊》[2]（1998年版）中。具有祛“巴達干·赫依”，行血化瘀功能，臨床主要用于腎寒，腰腿疼痛，婦女痛經(jīng)，血瘀閉經(jīng)等癥，是蒙醫(yī)臨床常用藥之一。雖然已收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準·蒙藥分冊》（1998年版）中，但原標準中僅有處方、制法、性狀、檢查（散劑項下）和功能主治、用法用量等項；沒有鑒別項和含量測定項內容，無法對該制劑進行質量控制。為了能夠有效地控制該藥的質量，保證臨床療效，有必要對其進行系統(tǒng)的質量標準研究，提升其原有的標準。李爭春等[3]研究蘇木中，初步確定了16種化合物，其中的主要成分有槲皮素、巴西蘇木素、異甘草素、原蘇木素B、brazil A、3′-去氧蘇木醇、4-O-hydroxybrazilin、蘇木查耳酮、（αS）-α，2′，4，4′-tetrahydroxy dihydro-chalcone等，其中巴西蘇木素是蘇木水提物的主要化學成分。蘇木主要成分為酚類化合物。分別為蘇木酮A，3-去氧蘇木酮B，蘇木查爾酮，3-去氧蘇木查爾酮，原蘇木素B，（-）-丁香樹脂酚和表蘇木醇等成分。近年研究表明蘇木除傳統(tǒng)功效外，還有新的藥理活性，如抗腫瘤、抗氧化作用等[4]。巴西蘇木紅素又名蘇木紅素（brazilein），是我國常用中藥材蘇木（又名蘇方木，蘇枋，赤木，紅柴，戈梅芳）中主要活性成分巴西蘇木素的氧化產(chǎn)物[5]。目前酚類物質是蘇木中公認的活性成分，主要包括高異黃酮、蘇木素、原蘇木素、蘇木查耳酮及苯丙素類，且發(fā)現(xiàn)蘇木種子中含有大量的卡山烷型二萜[6]。蘇木的化學成分主要包括高異黃酮、查爾酮和苯并環(huán)氧庚烷等。在后續(xù)的實驗中，又分離得到10個化合物，分別鑒定（-）-5-O-methyllatifolin（1）、（-）-dalbergiphenol（2）、（-）-latifolin（3）、3，5-二甲氧基-4-羥基肉桂醛（4）、6，4′-二羥基-7-甲氧基-黃烷酮（5）、（+）-南燭木樹脂酚（6）、3，7-二羥基色原酮（7）、3′-O-甲氧基巴西蘇木素（8）、3′-O-甲基蘇木醇（9）以及3′-O-去氧蘇木醇（10）。這10個化合物按其結構類型可分為新黃酮類（1～3），肉桂醛類（4），黃烷酮類（5），木脂素類（6），色原酮類（7）和高異黃酮類（8～10），其中化合物1～5系首次從該屬植物中分離得到[7]。蘇復寧洗液（凍干）是以我國傳統(tǒng)中藥蘇木經(jīng)提取制備成的一種用于預防膀胱癌術后復發(fā)的中藥制劑，為桔紅色無定形粉末或疏松固體狀物，該制劑對膀胱腫瘤細胞有顯著的殺傷作用，具有抗癌活性高、毒性小、安全有效等諸多優(yōu)點[8]。蘇木提取物作用后，肝癌細胞內PCNA平均表達與其對照組比較明顯減小，實驗結果表明蘇木提取物對腫瘤細胞的增殖有良好的抑制作用[9]。蘇木粗提物對多種腫瘤細胞均能產(chǎn)生顯著的抑制作用，能通過誘導人卵巢癌細胞Skov3產(chǎn)生凋亡[10]。木香為菊科植物木香（Auxklandia lappa Dencne.）的干燥根。木香中主要代表性成分為木香烴內酯和去氫木香內酯，該類成分具有松弛平滑肌作用。木香烴內酯還具有抑制潰瘍作用[11]。去氫木香內酯是菊科植物木香干燥根的活性成分。其具有很好的抗癌、抗菌、抑制胃潰瘍、增加胃腸蠕動等作用。目前，木香烴內酯（CT）主要通過影響腫瘤細胞的細胞周期、誘導細胞凋亡、抑制腫瘤血管生成、抑制端粒酶活性而抗腫瘤，是否存在其他方面的機制還有待研究。同時，有關CT對正常細胞毒性實驗研究較少，僅少量文獻表明其細胞毒性較低，如果CT的毒理活性低，將可能具有比其他抗腫瘤藥物更大的臨床應用價值[12]。檳榔為棕櫚科植物檳榔（Areca catechu L.）的干燥成熟種子[13]。棋榔辛、苦、溫，歸胃、大腸經(jīng)，具有殺蟲、消積、行水、降氣、截拒的功效，主要用于絳蟲病、蛔蟲病、姜片蟲病、蟲積腹痛、積滯灣、里急后重、水腫腳氣、拒疾。歷代本草記載，在使用本藥時，有生、熟之分，“急治生用，經(jīng)火則無力”?，F(xiàn)代藥理研宄表明，檳榔具有驅蟲殺蟲、促胃腸運動、抗菌、抗抑郁、抗氧化等作用，檳榔生用主要用于殺蟲；炒制后主要用于消積導滯[14]。檳榔種子含總生物堿0.3%～0.6%，主要為檳榔堿，并含有少量檳榔次堿、去甲基檳榔堿、去甲基檳榔次堿、異去甲基檳榔次堿、檳榔副堿及高檳榔堿等，均與鞣酸結合存在。還含有鞣質、脂肪、甘露醇、半乳糖、蔗糖、α-兒茶精、表兒茶精、無色花青素、檳榔紅色素、皂苷及多種原矢車菊素的二聚體、三聚體、四聚體等。所含脂肪酸的組成為：月桂酸19.5%、肉豆蔻酸46.2%、棕櫚酸12.7%、硬脂酸1.6%、癸酸0.3%、油酸6.2%、亞油酸5.4%、十二碳酸0.3%、十四碳烯酸7.2%，又含氨基酸，其中脯氨酸占15%以上[15]。目前對檳榔化學成分的研究集中在檳榔堿[16]。大量實驗研究表明檳榔中主要有4種生物堿，分別是檳榔堿、檳榔次堿、去甲基檳榔堿、去甲基檳榔次堿；后來研究人員又發(fā)現(xiàn)了異去甲基檳榔次堿、高檳榔堿。其他有效成分還有檳榔多酚，總黃酮、檳榔油等[17]。采用硅膠柱色譜和Sephadex LH-20等分離方法，對馬檳榔Capparis masaikai果實的化學成分進行分離純化，依據(jù)理化性質及波譜數(shù)據(jù)分析進行結構鑒定，從中分離鑒定了10個單體化合物，分別為：杜仲樹脂酚（1）、erythro-guaiacylglycerol-β-O-4′-sinapyl ether（2）、hedyotol C（3）、hedyotisol A（4）、hedyotisol B（5）、ozoroalide（6）、5α，6α-epoxy-3β-hydroxyergosta-22-ene-7-one（7）、松柏醛（8）、3-羥基-5-（對羥基苯基）戊酸（9）、β-hydroxypro-piovanillone（10）。分離得到的化合物結構類型包括木脂素、大環(huán)內酯、甾醇及酚類?；衔?～10為首次從該植物中分離，其中1～7為首次從該屬植物中分離得到[18]。檳榔也具有口腔細胞毒性、生殖細胞毒性、肝細胞毒性、免疫細胞毒性[19]。高良姜為姜科植物高良姜（Alpinia officinarum Hance）的干燥根莖。根莖含有黃酮類、揮發(fā)油、甾醇類化合物，以及鞣質、淀粉、脂肪及微量元素等化學成分，其中的黃酮類成分為其有效成分之一。目前己從其藥材中分離鑒定了幾十種化合物[20]。草果為姜科植物草果（Amomum tsao-ko Grevost et Lemaire）的干燥成熟果實。臨床常以炮制品入藥，炮制的方法歷代本草均有記載。然而有關炮制品的成分及炮制機理的研究較少[21]。目前國內外學者主要集中于草果揮發(fā)油成分的研究，他們主要對不同產(chǎn)地、不同提取方法（水蒸氣蒸餾法、微波萃取技術等）以及草果全株各部位的揮發(fā)油進行提取，并對其化學成分進行了比較分析[22]。草果中含有揮發(fā)油，油中含α、β一旅烯，1，8一按油素，對一聚傘花素，壬醛，癸醛，芳樟醇，樟腦，α一松油醇，香葉醇，草果酮，橙花叔醇等。尚含Zn、Cu、Fe、Ni、Mn、Co等無機元素[23]。草果具有調節(jié)胃腸功能、降脂減肥、降血糖、抗氧化、抗腫瘤、防霉和抗炎鎮(zhèn)痛等作用[24]。在高良姜葉的甲醇提取液中共鑒定出分屬于兩類成分的16個化合物，其中黃酮類物質白楊素、喬松素、楊芽黃素、芹菜素、高良姜素、高良姜素-3-O-甲醚、金合歡素、山柰酚、山柰素、槲皮素、異鼠李素、蘆丁。二芳基庚烷類成分包括益智酮甲、益智醇、六氫姜黃素和hannokinol[25]。白豆蔻為姜科植物白豆蔻（Amomun kravanh Pierre ex Gagnep.）或爪哇白豆蔻（Amomum compactum Soland ex Maton）的干燥果實[26]。含有主要成分1，8-桉葉油素及α，β-蒎烯、α-松油醇、松油醇-4、芳樟醇[27]。白豆蔻精油的化學成分主要是由單萜烯類化合物、倍半萜烯類化合物以及萜烯類氧化物構成的，并且以前兩類化合物占大多數(shù)。無論任何產(chǎn)地的白豆蔻精油，均以桉油精為含量最高的化學成分[28]。白豆蔻屬名貴中藥材之一，始載于唐代《開元本草》，又名白豆寇、白寇仁，性辛、溫，入脾、胃、肺經(jīng)，為姜科植物白豆范口口或爪哇白豆范的干燥成熟果實，具有芳香化濕、健胃止嘔、抑菌防腐之功效。其主要藥效成分為按油精，起解熱、消炎、抗菌的作用。白豆蔻是三仁湯的主要組方藥材之一，臨床上多配伍使用，主治嘔惡欲吐、胃院脹滿、妊娠嘔吐、口臭等癥[29]。

方中蘇木、高良姜、木香、檳榔的薄層色譜鑒別鑒了2015年版《中華人民共和國藥典》方法，展開劑比例做了適當調整，結果均能達到良好分離，斑點清晰，重復性好；結果表明，該方法簡便、斑點清晰可以作為定性鑒別和檢查來控制藥品的質量。

通過對蘇木中巴西蘇木素和原蘇木素B高效液相色譜分析，在285 nm處有較高吸收，為方便檢驗，選擇檢測波長為285 nm，在285 nm處測定峰面積響應及線性良好。

對流動相進行了優(yōu)選，包括不同比例的甲醇-水，乙腈-水等流動相系統(tǒng)，最終選用乙腈-水溶液（11∶89）為流動相，巴西蘇木素和原蘇木素B的色譜峰型好，保留時間適宜，分離效果較好。

參考文獻

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