冉曉敏 金榕榕 易春梅 萬祖英 張國輝

摘要 采用枯草芽孢桿菌GH18、GH19對立枯絲核菌進(jìn)行抑菌試驗，并與3種化學(xué)藥劑（代森錳鋅、甲基硫菌靈、百菌清）的抑菌效果進(jìn)行了對比，結(jié)果顯示： GH18和GH19對立枯絲核菌的抑菌效果都很明顯；3種化學(xué)藥劑中，以甲基硫菌靈的抑菌效果最強(qiáng)。

關(guān)鍵詞 立枯絲核菌；生物學(xué)特性；生物防治；化學(xué)防治

中圖分類號：S476.1；S435.1 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：2095-3305（2018）05-004-02

DOI： 10.19383/j.cnki.nyzhyj.2018.05.002

立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）屬半知菌亞門真菌，是一種不產(chǎn)生任何無性孢子，在自然界廣泛存在并呈世界性分布的土壤習(xí)居菌。作為引起根腐和莖腐癥狀的重要菌種，立枯絲核菌被認(rèn)為是最具破壞力的土傳植物病原物之一[1]。該菌最早是由日本人白井光太郎（Shirai）研究樟苗白絹病菌時所發(fā)現(xiàn)的；在我國，立枯絲核菌病最早是于1922年在臺灣被發(fā)現(xiàn)。目前立枯絲核菌的分布已經(jīng)相當(dāng)普遍[2-3]，寄主范圍極廣，除侵染棉花外，還可侵染小麥、水稻、芝麻、花生、玉米等50科200余種植物，極易造成重大危害[4]。在貴州地區(qū)，立枯絲核菌不僅造成蔬菜、水果等農(nóng)作物受害，而且在漸漸興起的藥用植物種植中（如黔東南州種植的白及等），也受到了該菌的侵害，損失慘重，嚴(yán)重影響了藥用植物的質(zhì)量和農(nóng)民的收入。

目前，對立枯絲核菌病主要的防治方法即采用化學(xué)藥劑。然而化學(xué)農(nóng)藥的大量使用不僅導(dǎo)致立枯絲核菌產(chǎn)生抗藥性，農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)殘超標(biāo)，同時也對壞境存在污染。生物農(nóng)藥因安全性高、資源豐富、環(huán)境友好等特點，是當(dāng)前研究的熱點[5-7]。藥用植物的種植不能使用農(nóng)藥，故生物防治顯得尤為重要，然而在貴州省對此的研究卻很少[8-10]。鑒此，文中考察了中國科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物研究所提供的枯草芽孢桿菌GH18、GH19對立枯絲核菌的抑菌效果，并與3種化學(xué)藥劑（代森錳鋅、甲基硫菌靈、百菌清）進(jìn)行了對比，以期為立枯絲核菌的生物防治研究提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試材料 中藥材白及病葉，2016年6—9月于貴州昌昊中藥材發(fā)展有限公司采集所得。

1.1.2 試驗儀器 超凈工作臺、高壓蒸汽滅菌鍋、微波爐、電磁爐、移液槍、奧杜巴斯BX53熒光顯微鏡、照相機(jī)、恒溫箱等。

1.1.3 試驗試劑 PSA培養(yǎng)基，72%乙醇、0.1%升汞、甲基托布津（江蘇龍燈化學(xué)有限公司）、百菌清（西安亞森化工有限公司）、代森錳鋅（山東澳得利化工有限公司）等；枯草芽孢桿菌GH18、GH19（由中國科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物研究所提供）。

1.2 方法

1.2.1 分離純化 對白及病株的病害組織進(jìn)行觀察，從病害組織表面病斑形態(tài)、病斑顏色、病斑大小等方面進(jìn)行描述，并拍照記錄。采用組織分離法分離白及病葉的立枯絲核菌。在無菌操作臺上，分別切取2～3塊病原組織2～4 mm用72%乙醇和0.1%升汞先后消毒處理后呈三角形放置在PSA平板上，將其倒置于28℃的恒溫培養(yǎng)箱中連續(xù)培養(yǎng)3～5 d；分別挑取新長菌落的菌絲到新的PSA平板上培養(yǎng)3～5 d，多次操作直至得到純菌落，再對菌落的形態(tài)結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察和拍照。

1.2.2 生物學(xué)特性研究采用熒光顯微鏡觀察法。顯微鏡觀察時主要觀察立枯絲核菌形態(tài)結(jié)構(gòu)特征，菌絲的顏色、形狀，有無隔膜和分支及分支特點，觀察菌核形態(tài)，并采用熒光顯微鏡測量菌絲和菌核的大小，同時拍照記錄。

1.2.3 生物防治研究

（1）培養(yǎng)枯草芽孢桿菌GH18、GH19菌落。在超凈工作臺上倒新平板，然后將芽孢桿菌稀釋6倍，以平板涂布法的方式將枯草芽孢桿菌GH18、GH19分別涂布于不同的平板上，標(biāo)記然后置于恒溫培養(yǎng)箱里培養(yǎng)2～3 d，每天定時觀察菌苔的長勢。

（2）枯草芽孢桿菌GH18、GH19對立枯絲核菌抑菌實驗。取長勢相同的立枯絲核菌菌苔，打6～9個直徑為1 cm的孔，放置于新倒好的平板中央，然后用滅好菌的牙簽分別沾取枯草芽孢桿菌GH18和GH19點在每個有菌苔的培養(yǎng)基的對角線邊上，標(biāo)記培養(yǎng)2～3 d，每天定時觀察菌苔長勢，并拍照記錄。

1.2.4 3種化學(xué)試劑的抑菌試驗 待平板冷卻到室溫后，將稀釋后的3種化學(xué)藥劑（表1）分別取100 ml于平板上涂布，然后將長勢相同的菌落放在中央，分別標(biāo)記培養(yǎng)2～3 d，并每天觀察拍照。

2 結(jié)果與分析

2.1 枯草芽孢桿菌GH18、GH19的抑菌結(jié)果

由圖1可以看出，用枯草芽孢桿菌GH18、GH19處理立枯絲核菌，菌落生長均受到抑制，相同條件下，對照組菌落長滿培養(yǎng)皿。可見枯草芽孢桿菌GH18、GH19對立枯絲核菌的抑菌作用很強(qiáng)。

2.2 化學(xué)藥劑的抑菌效果

相同培養(yǎng)條件下，空白對照組的立枯絲核菌菌絲長滿培養(yǎng)皿，百菌清和代森錳鋅處理的立枯絲核菌菌落生長受到抑制，百菌清和代森錳鋅處理的立枯絲核菌菌落比甲基硫菌靈處理的立枯絲核菌的菌落要大（百菌清、代森錳森、甲基硫菌靈處理的立枯絲核菌菌落直徑分別為2.1 cm，3.2 cm和1.3 cm）。百菌清和代森錳鋅對立枯絲核菌的菌落生長速度具有減緩作用，但甲基硫菌靈對立枯絲核菌的菌落生長具有很好的抑制作用。

3 結(jié)論與討論

該次試驗以2種生物藥劑為主，3種化學(xué)制劑為鋪進(jìn)行，結(jié)果顯示：該次試選用的2種枯草芽孢桿菌對立枯絲核菌的抑制作用均很強(qiáng)，菌絲生長困難，且這2種生物菌劑對人體無害，易生產(chǎn)，可以大規(guī)模使用。而3種化學(xué)制劑中以甲基硫菌靈對立枯絲核菌的抑菌效果最好。所以鑒于目前黔東南州受立枯絲核菌病害的中藥材的現(xiàn)狀來說，可以以這2種生物藥劑防治為主，化學(xué)防治為輔，對立枯絲核菌進(jìn)行有效的防治。

立枯絲核菌是一類寄主廣泛，危害嚴(yán)重的植物根部病原菌，能夠引起茄科蔬菜苗床幼苗立枯的現(xiàn)象[11-13]。從河北省22個主要產(chǎn)棉縣市分離純化得到67個棉花立枯病菌株，經(jīng)鑒定均為立枯絲核菌[14]，足見其傳染范圍極廣。立枯絲核菌的致病機(jī)理非常復(fù)雜，其產(chǎn)生的毒素是可能的主要致病原因之一[15]。目前認(rèn)為，生防機(jī)制主要有抗生溶菌、競爭、寄生作用，促進(jìn)植物生長和植物的誘導(dǎo)抗性[16]。探究枯草芽孢桿菌對土傳病原菌脅迫下玉米抗逆的生理影響，得出枯草芽孢桿菌對立枯絲核菌通過提高玉米地下組織中CAT酶活性和各組織中POD酶活性，同時降低MDA含量，來提高其對土傳病原的抗性[17]。此外，枯草芽孢桿菌還可以有效地防治番茄立枯病，減少了化學(xué)藥劑的使用和對環(huán)境的污染[18]。

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責(zé)任編輯：劉赟