秦 勤 秦德川 鄭 嶸吳立鵬

(1.佳木斯大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007； 2.泰山醫(yī)學(xué)院口腔醫(yī)學(xué)院，山東 泰安 271000)

齦溝液(gingival crevicular fluid，GCF)是指從牙齦結(jié)締組織深入到齦溝內(nèi)的液體，當(dāng)牙齒受到正畸力這一機械外力作用時，牙周組織就會發(fā)生相應(yīng)的生物學(xué)反應(yīng)，使齦溝液中的某些化學(xué)成分發(fā)生變化[1]。齦溝液中細(xì)胞因子含量的變化，說明正畸力對齦溝液有影響，從而間接證實了正畸力對牙周組織改建的影響[2]。本研究通過應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)方法檢測正畸力作用下人齦溝液(GCF)中bFGF和IL- 6含量的動態(tài)變化,初步探討bFGF和IL-6在正畸牙移動過程中正畸力對牙周組織改建的影響，為臨床矯治提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對象

收集2017年5月至2017年 8月期間，在泰山醫(yī)學(xué)院正畸科門診就診的患者12例，其中男性6例，女性6 例，年齡19～25 歲，中位年齡20.8歲?；颊呔鶠樾璋纬项M第一前磨牙拉尖牙向遠(yuǎn)中的恒牙牙合，尖牙無明顯錯位。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)身體健康,無全身系統(tǒng)性疾病及任何傳染性疾病；(2)近3個月未曾服用任何藥物；(3)牙周健康，無牙周病史，無牙齦紅腫和探診出血，牙周袋探診深度≤3 mm，X線示牙槽骨無病理性改變；(4)無正畸治療史；(5)無吸煙史；(6)患者及家長自愿參加本研究，依從性好。如實告知患者所做工作、治療風(fēng)險及并發(fā)癥，患者均簽署知情同意書，研究方案經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。受試者用直絲弓固定矯治器排齊牙列后，在左上尖牙施加150 g的遠(yuǎn)中初始力。加力裝置采用彈性橡皮鏈,左上第一磨牙為作用點，正畸專用測力計測量力值。

1.2 齦溝液的收集

采用40#吸潮紙尖,收集患者正畸牙齒加力前、加力后1、3、7、14、28 d時的齦溝液。囑患者用生理鹽水常規(guī)漱口，放置開口器，棉卷隔濕取樣牙，用探針去除牙面軟垢及菌斑，然后用無菌棉球擦干實驗牙頸部，用氣槍沿牙面向冠方輕吹，吹干牙及周圍牙齦粘膜，輕輕插入尖牙的遠(yuǎn)中鄰面靠頰側(cè)前庭溝處的齦溝直至有阻力時停止,放置1 min后取出,同一部位取5次，若沾有血跡則棄去重取。將采集的樣本密封于EP管后稱重,于-80 ℃冰箱凍存。樣本全部收集完后,應(yīng)用離心洗提法回收濾紙條上的齦溝液,應(yīng)用ELISA法測定齦溝液中bFGF和IL-6的含量。

1.3 牙周臨床指標(biāo)記錄

由于牙周檢查可能會對齦溝液產(chǎn)生影響，因此牙周臨床指標(biāo)記錄在取樣后進行。要求患者牙周狀況達到：茵斑指數(shù)(plaque index，PLI)≤2，出血指數(shù)(bleeding index，BI)≤1，牙周探診深度(probing depth，PD)≤3 mm。所有的牙周臨床指標(biāo)檢查和記錄均由同一名醫(yī)師完成。

1.4 檢測方法

通過雙抗體夾心法測定齦溝液中bFGF和IL-6的濃度。按照ELISA試劑盒的操作步驟進行操作，樣本室溫下解凍，標(biāo)準(zhǔn)品稀釋、加樣、加酶、顯色、終止、測定等，最后繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣本濃度。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 尖牙遠(yuǎn)移過程中bFGF在GCF中的水平變化

以加力前GCF中bFGF的含量為基線。bFGF在正畸牙齒移動過程中GCF中的水平也呈現(xiàn)動態(tài)變化，加力1 d后升高(P>0.05)，3 d時達到峰值(P>0.05)，然后下降，28 d時恢復(fù)到加力前水平(表1，圖1)。

2.2 尖牙遠(yuǎn)移過程中IL-6在GCF中的水平變化

以加力前GCF中IL-6的含量為基線。IL-6在正畸牙齒移動過程中GCF中的水平呈現(xiàn)動態(tài)變化，24 h內(nèi)顯著升高并達到峰值(P<0.01)，之后開始下降，28 d時恢復(fù)到加力前水平(P>0.01)(表1，圖2)。

圖1 正畸牙齒早期齦溝液中bFGF的表達水平

圖2 正畸牙齒移動早期齦溝液中IL-6的表達水平

3 討 論

正畸力施加在牙齒上，并通過牙周膜把機械力傳導(dǎo)到牙槽骨，引起整個牙體牙周組織發(fā)生一系列的變化。機械力作用下正畸牙齒移動的生物學(xué)基礎(chǔ)就是牙周組織的改建[3]。機械負(fù)荷會改變牙周組織的血管性和血流，從而導(dǎo)致局部合成和釋放各種分子，如細(xì)胞因子、生長因子、酶和神經(jīng)傳遞物，參與骨組織的降解破壞及愈合重建，誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)骨吸收和骨再生。在連續(xù)反應(yīng)和釋放物質(zhì)的基礎(chǔ)上，一些生物活性分子被提出作為生物標(biāo)記，以便更好的了解正畸牙移動所涉及的生物過程，改善治療，減少不良副作用。因此正畸過程中牙周組織的重建程度，通過監(jiān)測某些生化介質(zhì)的水平，是臨床上有用的方法，因為它們在牙齒運動中甚至在組織損傷中都有著重要作用[4]。而檢測齦溝液中的相關(guān)成分則有助于確定牙齒移動過程中牙周組織的重塑狀況，檢測正畸治療效果[1]。

堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)同其他細(xì)胞因子一樣，是人體中一種非常微量的活性物質(zhì)，廣泛分布于牙周組織和細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)中，它是成纖維細(xì)胞生長因子家族中的一員，參與胚胎發(fā)育、血管生成、損傷修復(fù)、神經(jīng)再生、腫瘤生長等多項生理及病理過程[5]。在牙齒移動過程中伴隨著血管變化與成纖維細(xì)胞和成骨細(xì)胞的增殖和分化，bFGF也會隨之而變化[6]。葛少華等人[7]研究證實bFGF可促進牙周細(xì)胞的增殖,抑制細(xì)胞的分化成熟,從而促進牙周再生。常少海等人[8]在對大鼠正畸牙模型的研究中發(fā)現(xiàn)，在50 g正畸力作用下bFGF在大鼠的牙周組織中表達強于對照組，提示bFGF可能參與機械力誘導(dǎo)的牙周組織重建過程。而張燎等人[9]建立兔子正畸牙移動模型的研究中檢測到50 g正畸力實驗組牙周組織中bFGF較對照組有顯著性改變，而100 g左右的正畸力組與對照組相比沒有統(tǒng)計學(xué)差異。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在150 g正畸力作用下，齦溝液中bFGF的表達升高后下降,但隨時間波動變化不大，處于相對穩(wěn)定的水平，14 d時就已恢復(fù)到加力前水平，提示bFGF可能參與機械力誘導(dǎo)的牙周組織重建過程，而與加力前相比未出現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)差異，此結(jié)果提示，同50 g的正畸力相比，100 g以上的正畸力雖然也會刺激細(xì)胞分泌bFGF，但無法釋放出一個足的量，可能是因為內(nèi)源性bFGF在牙周組織改建中主要在局部發(fā)揮作用,并存在自身負(fù)反饋調(diào)節(jié)。有研究者[10 ]體外實驗證實,機械張力可以刺激局部的成骨細(xì)胞產(chǎn)生bFGF,該因子再通過自分泌或旁泌途徑調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞的功能，從而進一步調(diào)節(jié)正畸牙移動過程中牙槽骨的改建。

白細(xì)胞介素6與牙周炎的關(guān)系十分密切，是一種來源廣泛的多功能細(xì)胞因子,由一條多肽單鏈組成,可由成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、成骨細(xì)胞等細(xì)胞合成分泌，在骨吸收和骨沉積的相互聯(lián)系中起著至關(guān)重要的作用,當(dāng)細(xì)菌及其他致病因子初期作用于牙周組織時，IL-6具有一定的保護機體的作用，然而IL- 6分泌增多時會產(chǎn)生明顯的致炎作用，加速牙周炎的發(fā)生和發(fā)展[11]。Johnson等[12-13]運用ELISA等免疫學(xué)方法測出,齦溝深度≤ 3 mm的健康人的正常牙周組織中含有極其微量的IL- 6,而在牙周袋深度> 3 mm的牙周炎患者中,相應(yīng)部位的IL- 6分泌量明顯增多,而且與袋深顯著相關(guān)。McGee等[13]發(fā)現(xiàn)牙周炎越嚴(yán)重,牙周組織中IL- 6變化愈加活躍，逐漸升高,因而推薦以IL- 6的比例作為牙周炎活動性及嚴(yán)重性的指標(biāo)。本研究發(fā)現(xiàn)，齦溝液中IL-6的表達先增加，后下降，提示IL-6可能參與機械力誘導(dǎo)的牙周組織重建過程，且與牙周炎患者齦溝液中IL-6的表達水平相比，正畸過程中的IL-6的濃度在峰值表達較小，28 d時已恢復(fù)到加力前水平，濃度變化相對穩(wěn)定，說明此時的牙移動引起的牙周組織變化可能是生理性的，而且是在正畸的開始階段，是牙周組織對正畸力作用刺激的反應(yīng)，并非牙周組織的病理表現(xiàn)，不會產(chǎn)生病理性的不良后果。

本研究結(jié)果顯示了作為機體內(nèi)的重要炎癥因子，bFGF和IL-6的表達水平呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢,可以用于判斷正畸牙齒移動過程中牙周組織對正畸力的反應(yīng)和炎癥狀況。同時說明臨床上采用150 g的正畸力牽引尖牙向遠(yuǎn)中移動是安全的。但由于研究對象以及樣本量的有限性，本研究并不能說明牙齒移動過程中齦溝液中bFGF和IL-6水平在不同年齡段患者中的表達差異，值得進一步研究。