楊菊紅 林列坤 王一娜

地中海貧血(thalassemia)又稱海洋性貧血, 是一組遺傳性溶血性貧血疾病。也是最常見的單基因遺傳?。?］。在我國廣東、廣西、海南、云南等地為多, 由于常染色體遺傳性缺陷, 引起珠蛋白合成障礙, 導(dǎo)致一種或幾種珠蛋白數(shù)量不足或完全缺如, 因而紅細(xì)胞被溶解破壞的溶血性貧血, 外周血紅細(xì)胞呈小細(xì)胞低色素性改變。而缺鐵性貧血(iron-deficiency anemia, IDA)由于鐵攝入不足或丟失過多導(dǎo)致, 引起中晚幼紅細(xì)胞出現(xiàn)“老核幼漿”現(xiàn)象, 而成熟紅細(xì)胞為大小不均的小細(xì)胞低色素改變。目前我國開展的α-地中海貧血基因檢測(cè)包括3種缺失型(--SEA, -α3.7和-α4.2), 3種突變型(CS、QS、WS), β-地中海貧血基因檢測(cè)包括17個(gè)位點(diǎn)的19種突變型, α-地中海貧血和β-地中海貧血均表現(xiàn)為小細(xì)胞低色素性貧血, 但是HbA2增高對(duì)β地中海貧血有很好的輔助診斷意義, α-地中海貧血和缺鐵性貧血也同樣為小細(xì)胞低色素性貧血, 兩者HbA2均減低, 致使在審核α-地中海貧血基因檢測(cè)結(jié)果時(shí), 需要排除缺鐵性貧血的可能性。本研究經(jīng)過隨機(jī)篩選單純性α-地中海貧血樣本, 正常樣本(已經(jīng)排除地中海貧血和缺鐵性貧血), 以及缺鐵性貧血樣本各60例, 通過分析三組MCHC、RDW-SD和HBA2的改變, 探討其對(duì)α-地中海貧血及缺鐵性貧血的鑒別診斷價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 于2017年1月～2018年3月本院收治的1900例地中海貧血基因篩查樣本中隨機(jī)抽取三組樣本, 分別為正常組、α-地中海貧血組、缺鐵性貧血組, 各60例。正常組中男26例, 女34例；年齡17～43歲, 經(jīng)基因檢測(cè)已排除α-地中海貧血和β地中海貧血, 受檢者鐵蛋白(ferritin, Fer)＞15 μg/ml。α-地中海貧血組中男23例, 女37例；年齡7～37歲, 經(jīng)基因檢測(cè)已確診為α-地中海貧血, Fer＞15 μg/ml。缺鐵性貧血組中男16例, 女44例；年齡3～47歲, 經(jīng)基因檢測(cè)已排除α-地中海貧血和β-地中海貧血, Fer＜15 μg/ml。三組的一般資料比較, 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 Sysmex XS-1000i血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀及原裝試劑；貝克曼DXI800全自動(dòng)生化分析儀及原裝試劑；SEBIA全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀及原裝試劑；Eppendorf 6333 PCR擴(kuò)增儀；Hb-2012A醫(yī)用核酸分子雜交儀；α-地中海貧血基因檢測(cè)采用地中海貧血基因檢測(cè)試劑盒(潮州凱普生物化學(xué)有限公司)。

1.2.2 標(biāo)本采集與方法 血常規(guī)和地中海貧血基因檢測(cè)均采用EDTA抗凝的真空采血管, Fer檢測(cè)采用分離膠真空采血管。MCHC 和RDW-SD 用Sysmex XS-1000i血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測(cè), HbA2 用SEBIA全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

正常組MCHC水平為(335±14)g/L, α-地中海貧血組MCHC水平為(327±18)g/L, 缺鐵性貧血組MCHC水平為(289±21)g/L；缺鐵性貧血組MCHC水平明顯低于正常組和α-地中海貧血組, α-地中海貧血組MCHC水平明顯低于正常組, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。正常組RDW-SD水平為(41.7±3.8)%, α-地中海貧血組RDW-SD水平為(38.2±4.4)%, 缺鐵性貧血組RDW-SD水平為(46.0±6.1)%；缺鐵性貧血組RDW-SD水平明顯高于正常組和α-地中海貧血組,正常組RDW-SD水平明顯高于α-地中海貧血組, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。α-地中海貧血組和缺鐵性貧血組HbA2水平均低于正常組, 缺鐵性貧血組HbA2水平低于α-地中海貧血組, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 三組MCHC、RDW-SD、HbA2水平比較( x-±s)

3 討論

目前檢測(cè)的α-地中海貧血基因包括3種缺失型(--SEA,-α3.7和-α4.2), 3種突變型(CS、QS、WS), 不同基因型患者貧血程度也明顯不同, 例如-α3.7/αα和-α4.2/αα型患者的外周血紅細(xì)胞參數(shù)多為正?；蚵晕⑵? --SEA/αα型患者紅細(xì)胞參數(shù)多數(shù)明顯減低, 這是因?yàn)檫z傳因素引起血紅蛋白中的珠蛋白鏈一種或幾種合成減少或缺如, 導(dǎo)致的血紅蛋白組成改變, 臨床癥狀的輕重不一。本研究發(fā)現(xiàn), 不同基因型的α-地中海貧血患者血紅蛋白(Hb)、平均紅細(xì)胞體積(MCV)和平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)下降程度不同, 但MCHC較正常組略低, RDW-SD幾乎不增高?？赡艿脑蚴铅?地中海貧血以珠蛋白發(fā)生基因缺陷為最根本的致病因素,導(dǎo)致患者一定程度合成血紅蛋白量明顯減少, 減少量一般相對(duì)恒定, 因而紅細(xì)胞的體積表現(xiàn)出較小的形態(tài), 但紅細(xì)胞的大小基本保持相對(duì)一致, 紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度也相對(duì)穩(wěn)定。而缺鐵性貧血由于體內(nèi)儲(chǔ)存鐵消耗而缺乏, 不能得到足夠的補(bǔ)充, 致使合成血紅蛋白的鐵元素不足引起的貧血, 多數(shù)缺鐵性貧血患者的MCV、MCH、MCHC明顯低于參考值,RDW-SD明顯增高。也就是說缺鐵性貧血患者外周血紅細(xì)胞不僅呈現(xiàn)小細(xì)胞低色素, 而且大小不均, 這是由于鐵元素長期處于一種不穩(wěn)定的供應(yīng)狀態(tài), 隨著缺鐵程度的不斷變化,導(dǎo)致了紅細(xì)胞充盈程度的相應(yīng)改變, 最終形成了外周紅細(xì)胞小細(xì)胞低色素, 明顯大小不均的現(xiàn)象, MCHC也會(huì)因?yàn)槿辫F程度的加重而明顯減低［2］。

HbA2(α2δ2)在正常成人體內(nèi)約占血紅蛋白總量的2.5%～3.5%, 引起HbA2升高的主要原因有β-地中海貧血和巨幼紅細(xì)胞性貧血等, 引起HbA2降低的主要原因有α-地中海貧血、缺鐵性貧血、α鏈或δ鏈變異體等［3］, 作者的研究發(fā)現(xiàn)缺鐵性貧血組HbA2水平降低比α-地中海貧血組更為顯著。

地中海貧血基因檢測(cè)過程包括核酸提取, 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增, 分子雜交等一系列步驟才能完成, 最后通過觀察膜條上的斑點(diǎn)顯色的不同位置來確定基因類型, 由于影響因素較多, 顯色結(jié)果會(huì)出現(xiàn)斑點(diǎn)顯色太淺, 非特異性結(jié)合出現(xiàn)假陽性斑點(diǎn), 甚至也可能由于DNA的純度和濃度太低,造成實(shí)驗(yàn)失敗等, 結(jié)合患者的紅細(xì)胞參數(shù)和Hb電泳結(jié)果來審核地中海貧血基因檢測(cè)結(jié)果尤為重要, 紅細(xì)胞(RBC)、Hb、MCV、MCH這些指標(biāo)對(duì)地中海貧血基因結(jié)果審核有一定的意義, 但是MCHC、RDW-SD和HbA2對(duì)α-地中海貧血更有鑒別診斷價(jià)值。

鑒于地中海貧血基因結(jié)果審核的重要性, 建議臨床醫(yī)生盡量完善血常規(guī), 血紅蛋白電泳, Fer 等檢測(cè)項(xiàng)目, 從實(shí)驗(yàn)室的角度出發(fā), 只有具備完善的資料, 嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶?shí)驗(yàn)流程, 細(xì)心的審核態(tài)度, 才能確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性, 才能盡量避免漏檢的發(fā)生和及時(shí)發(fā)現(xiàn)罕見型地中海貧血的可能。