湯純 閔祥博 范翠翠 張春宇

益生菌是一類對(duì)宿主有益的活性微生物，其能夠粘附于腸道中，通過短暫的定植促進(jìn)腸道內(nèi)微生態(tài)平衡，促進(jìn)有益菌增殖、抑制有害菌生長(zhǎng)、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收。小兒便秘是一種常見臨床消化道疾病，多因飲食不當(dāng)，過多食入辛、辣、油膩食物或過多食用少渣精細(xì)食物，導(dǎo)致腸道干澀，蠕動(dòng)減慢從而導(dǎo)致便秘。這種便秘多為功能性便秘，少見病理性便秘，其根本原因?yàn)槟c道微環(huán)境失調(diào)所導(dǎo)致。本研究針對(duì)功能性便秘這種特定癥狀作為研究方向，應(yīng)用鹽酸洛哌丁胺作為造模藥物建立腸蠕動(dòng)抑制模型，考察漢臣氏（沈陽(yáng)）兒童制品有限公司自主分離的菌株植物乳桿菌HCS03- 002的通便益生特性，為今后該菌株的后續(xù)開發(fā)、生產(chǎn)提供數(shù)據(jù)支持。

材料與方法

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。昆明（KM）小鼠，18～22g，4～5周齡，50只，雄性。購(gòu)于遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)股份有限公司，許可證號(hào)：SCXK（遼）2015- 0001。

菌種。漢臣氏（沈陽(yáng)）兒童制品有限公司分離的植物乳桿菌HCS03- 002，實(shí)驗(yàn)室保存。

試劑及儀器。鹽酸洛哌丁胺、活性炭粉、阿拉伯樹膠、天平、注射器、直尺、眼科鑷、手術(shù)剪。

實(shí)驗(yàn)方法。

（1）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組樣品給予時(shí)間 實(shí)驗(yàn)設(shè)三個(gè)劑量組，一個(gè)空白對(duì)照組和一個(gè)模型對(duì)照組?？瞻讓?duì)照組和模型對(duì)照組同途徑給蒸餾水。

樣品給予時(shí)間21天。分組及給樣方案詳見表1。

（2）實(shí)驗(yàn)步驟 墨汁配制：準(zhǔn)確稱取阿拉伯樹膠100g，加水800ml，煮沸至溶液透明，再稱取活性炭粉50g加至上述溶液中煮沸3次，待溶液涼后加水定容到1000ml，于冰箱中4℃保存，用前搖勻。

鹽酸洛哌丁胺溶液（0.8mg/ml）配制：準(zhǔn)確稱取鹽酸洛哌丁胺16mg，加入20ml蒸餾水充分溶解，現(xiàn)用現(xiàn)配。

模型建立：小鼠平衡飼養(yǎng)3天后，按體重隨機(jī)分組，連續(xù)給樣品21天后，各組小鼠禁食不禁水16h。模型對(duì)照組和三個(gè)劑量組給予鹽酸洛哌丁胺（8mg/kg），空白對(duì)照組給蒸餾水。

指標(biāo)測(cè)定：給鹽酸洛哌丁胺后0.5小時(shí)，劑量組分別灌胃給予含受試樣品的墨汁，空白和模型對(duì)照組灌胃墨汁；25分鐘后立即脫頸椎處死動(dòng)物，從幽門至墨汁前沿為“墨汁推進(jìn)長(zhǎng)度”。按下式計(jì)算墨汁推進(jìn)率：

數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定：應(yīng)用SPSS軟件的單因素分析方法（One- Way- Anova）對(duì)墨汁推進(jìn)率進(jìn)行組間統(tǒng)計(jì)學(xué)比較。

結(jié)果

墨汁推進(jìn)率。根據(jù)各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物墨汁推進(jìn)率（表2）可知：本次試驗(yàn)?zāi)Ｐ蛯?duì)照組墨汁推進(jìn)率（49%）低于空白對(duì)照組（73%），本次試驗(yàn)造模成功；通過組間統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，植物乳桿菌3g/kg組（63%）與模型對(duì)照組（49%）比較，有顯著性差異。

實(shí)驗(yàn)過程中，模型對(duì)照組墨汁推進(jìn)率明顯低于空白對(duì)照組，說(shuō)明本方案造模方法是可行的，能夠?qū)崿F(xiàn)腸蠕動(dòng)的抑制。各給樣組均表現(xiàn)出有一定的通便功效，1g/kg、2g/kg、3g/kg劑量組墨汁推進(jìn)率分別為55%、61%、63%，均高于模型對(duì)照組（49%），但未表現(xiàn)出明顯的劑量依賴關(guān)系；這種現(xiàn)象說(shuō)明植物乳桿菌可能在1g/kg劑量下已經(jīng)達(dá)到最大腸道定植效果，提高給樣劑量如2g/kg及3g/kg無(wú)法繼續(xù)放大通便效果；這種現(xiàn)象也有可能是因?yàn)榻o樣周期短導(dǎo)致的，在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中，在保留現(xiàn)有方案下，可以通過增加其他劑量組或調(diào)整給樣周期來(lái)進(jìn)行改進(jìn)，以期達(dá)到最優(yōu)試驗(yàn)效果，從表觀水平上，進(jìn)一步評(píng)價(jià)植物乳桿菌（HCS03-002）的小鼠體內(nèi)通便效果。綜上，在3g/ kg劑量下，連續(xù)21天口服灌胃植物乳桿菌（HCS03- 002），對(duì)小鼠腸蠕動(dòng)抑制模型有較好的通便效果；同時(shí)說(shuō)明，本公司植物乳桿菌（HCS03- 002），具有一定的開發(fā)潛力。

作者簡(jiǎn)介：

湯純（1987-），男，助理工程師，從事食品及保健品研發(fā)工作。通訊作者：湯純（1987-）。