王 斌 時 沛

(南陽醫(yī)學高等?？茖W校基礎醫(yī)學部，河南 南陽 473000)

缺血再灌注損傷(IRI)是指機體組織經(jīng)過一段時間缺血后，再次恢復血流灌注后，部分組織細胞的功能代謝障礙或功能進一步損傷或病情加重的現(xiàn)象，可以分為缺血損傷和再灌注損傷〔1〕。腎臟、心臟及腦部是IRI中較為常見的器官。冠心病是一種常見的嚴重危害老年人群健康的心血管疾病之一，是由于冠狀動脈在粥樣硬化的基礎上伴隨局部血栓形成造成冠脈血流量下降造成心絞痛及IRI〔2～4〕。近年研究表明，炎癥對于動脈粥樣硬化的發(fā)生及進展有著重要的作用〔5〕。炎癥對于斑塊的形成及斑塊從穩(wěn)定狀態(tài)變?yōu)橐讚p狀態(tài)都有著重要的作用。改善患者的心肌供血，使患者血流量增加，改善患者血液循環(huán)，從而使心肌耐受缺血缺氧的能力是目前臨床上的治療重點。人參是一類名貴的重要，歷來治療心血管疾病的處方上有著重要的對用。人參三醇是人參中最重要的一類生理活性物質(zhì)，目前已經(jīng)在臨床上廣泛用于治療心血管疾病，且效果明顯。本研究采用結扎冠狀動脈左前降支的方法導致老年大鼠形成IRI的模型，系統(tǒng)性分析人參三醇對大鼠心肌的影響并探討其作用機制。

1 材料與方法

1.1實驗動物 健康SD大鼠60只，體質(zhì)量280～320 g，鼠齡20～24 w，SPF級，均為雄性，由浙江省醫(yī)學科學院提供，使用許可證號為syxk(浙)2014-0008。大鼠的飼養(yǎng)與SPF動物房中，動物房溫度維持在20～25℃，相對濕度為30%～60%，自由禁食禁水。12 h照明12 h避光，正式試驗前適應新飼養(yǎng)至少1 w。

1.2試劑 本研究使用的人參三醇購自上海源葉生物科技有限公司(純度≥99%)，動物呼吸肌購自成都泰盟科技有限公司，酶標儀購自深圳雷杜生命科學股份有限公司；全自動生化分析儀購自日立7020型；SSW型電熱恒溫水槽購自上海博訊實業(yè)有限公司，生化試劑盒購自日本積水；酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒購自深圳達科為有限公司。

1.3方法 將80只大鼠隨機分為4組，每組20只，分別為假手術組、模型組、生脈飲組(450 mg/kg)和人參三醇組(45 mg/kg)，給藥組連續(xù)給藥7 d，最后1次給藥于造模前腹腔注射(i.p.)給藥。造模方法為大鼠使用30 mg/kg戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，背位固定在手術臺上，記錄正常的心電圖。胸部去毛后消毒，打開胸腔，剪開心包，迅速穿線結扎灌裝動脈左前降支(LAD)后將心臟送回胸腔。假手術組只穿線，不結扎。以心電圖中ST段抬高或者下降0.1 mV為結扎成功。結扎成功后30 min，松開結扎繩實現(xiàn)再灌流后，荷包縫合。再灌注24 h后取材測定各項指標，并同時觀測人參三醇對模型大鼠心電圖ST段的影響。

1.4觀察指標 大鼠再灌注24 h后，腹主動脈插管取血，加入抗凝管中沒使用血小板聚集儀測定大鼠血流動力學參數(shù)5 min的血小板聚集率(PAG)及最大血小板聚集率(MPAG)。另收集部分全血至非抗凝管中，離心收集血清肌酸激同工酶(CK-MB)及白細胞介素(IL)-6、腫瘤壞死因子(TNF)-α水平；按試劑盒方法測血清丙二醛(MDA)，超氧物歧化酶(SOD)含量;另取血抗凝分離血漿，用放免法測血漿內(nèi)皮素(ET)、血小板黏附率血管緊張素(Ang)Ⅱ及前列環(huán)素(PG)I2和血栓素(TX)A2水平。剖取大鼠心臟，使用氯化鈉注射液沖洗干凈大鼠心臟中的血液，剔除脂肪血管等非心肌組織后，沿著冠狀溝切除心房，稱左心室濕重。平行房室溝橫切左心室4～5片，浸入氮藍四唑(NBT)磷酸緩沖液中，于37℃水浴中顏色，切下缺血心肌組織，稱重并計算心肌梗死面積。

1.5統(tǒng)計學方法 使用SPSS15.0統(tǒng)計學軟件進行LSD-t檢驗，率的比較采用χ2檢驗。

2 結 果

2.1人參三醇對大鼠心電圖ST段的影響 與假手術組相比，模型組缺血5 min和30 min ST段均顯著增高；與模型組相比，生脈飲和人參三醇均顯著降低了缺血5 min和30 min ST段。再灌注段的結果表明，與假手術組相比，模型組再灌注5 min、30 min和60 min后ST段均顯著抬高；與模型組相比，而生脈飲組和人參三醇均顯著降低ST段(P<0.05)，見表1。

表1 人參三醇對大鼠心電圖ST段的影響

與模型組比較：1)P<0.05，2)P<0.01，下表同

2.2人參三醇對大鼠血清生化指標及細胞因子的影響 模型組大鼠血清CK-MB、IL-6、TNF-α和MDA均顯著高于假手術組，SOD顯著低于假手術組，差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)。經(jīng)過生脈飲和人參三醇干預后，大鼠血清中CK-MB、IL-6、TNF-α和MDA均顯著低于模型組，SOD顯著高于模型組(P<0.05)，生脈飲組和人參三醇組之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表2。

表2 人參三醇對大鼠血清生化指標及細胞因子的影響

2.3人參三醇對大鼠血流動力學及心肌梗死面積的影響 模型組血小板黏附率、PAG和MPAG均顯著高于假手術組(P<0.01)；生脈飲和人參三醇干預大鼠后，血小板黏附率、PAG和MPAG均顯著低于模型組(P<0.01)。生脈飲組和人參三醇組干預后，大鼠心肌梗死面積顯著低于模型組(P<0.05)。見表3。

表3 人參三醇對大鼠血流動力學及心肌梗死面積的影響

3 討 論

正常的血液循環(huán)是維持機體組織、細胞保持正常生理功能的基本條件。各種原因所致的組織血液灌流量不足會導致組織局部缺血，導致局部組織能量代謝障礙、活性氧增多，導致局部炎癥反應發(fā)生，最后炎癥反應介導的細胞損傷和細胞凋亡導致組織損傷〔6〕。如何有效預防并積極治療組織的IRI是目前臨床上急需解決的治療難題。目前，臨床上主流的治療方法是對缺血組織預處理及在缺血發(fā)生前采取相應措施，提高靶區(qū)域細胞對缺血和缺氧的耐受程度，并且在缺血后處理及采取短暫的再灌注-缺血交替處理方法，但是不僅操作繁瑣，而且往往難以診斷患者是否存在局部缺血風險，難以真正有效實施。人參三醇是一種天然的酚類抗氧化物，也是現(xiàn)在藥理學研究較為充分一種的天然產(chǎn)物?，F(xiàn)代藥理學研究已經(jīng)證實，人參三醇具有抗氧化、抗炎、免疫調(diào)節(jié)等作用〔7，8〕。由于人參三醇具有清除自由基、抑制炎癥等方面的作用，人們推測人參三醇可能能夠緩解機體IRI。

本研究顯示人參三醇能夠顯著改善缺血階段和再灌注階段心肌的心電圖變化，能夠降低由于缺血再灌注引起的血流供應不足導致的損傷。人參三醇能夠顯著降低血清中炎癥介質(zhì)的水平，且人參三醇與生脈飲之間無顯著差異。人參三醇能夠顯著改善大鼠由于IRI導致的血流動力學的變化，這可能與人參三醇主要降低血清中炎癥相關介質(zhì)相關〔9，10〕。綜上所述，人參三醇能夠顯著改善心肌IRI大鼠的心電圖變化，顯著降低血清中的炎癥介質(zhì)相關水平，并降低相關血流動力學參數(shù)，降低心肌梗死面積，值得進一步研究人參三醇的具體作用機制。