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        無償獻(xiàn)血者乙肝病毒核酸檢測分析

        2018-08-27 06:40:10李小容譚寒玉
        大醫(yī)生 2018年6期
        關(guān)鍵詞:免疫檢測血樣無償獻(xiàn)血者

        李小容 譚寒玉 朱 林 淳 靜

        (四川省綿陽市紅十字中心血站,四川綿陽 621000)

        輸血是臨床急救及手術(shù)治療等的重要環(huán)節(jié),也是挽救傷病者的關(guān)鍵,而輸血安全則是保障傷病者生命安全的重中之重,其中,輸血相關(guān)性傳染病的預(yù)防是臨床關(guān)注的重點(diǎn),血液篩查也是各地血站安全工作的核心。一直以來,血清免疫學(xué)檢測都是血液篩查的主要手段,檢測的陽性率高,但是HBV、HCV及HIV這3種液傳播疾病病毒檢測的窗口期均較長,仍具有一定的安全風(fēng)險(xiǎn)。而核酸檢測應(yīng)用的逐漸廣泛,有效彌補(bǔ)了血清免疫檢測的不足[1]。本研究就核酸檢測在無償獻(xiàn)血者乙肝病毒空窗期篩查中的應(yīng)用價值進(jìn)行探究,效果如下。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料

        選取2015年8月至2017年12月本院采集的且經(jīng)過血清免疫檢測合格的無償獻(xiàn)血者的血樣標(biāo)本為研究樣本,共有107 465例,均進(jìn)行核酸檢測。無償獻(xiàn)血者均經(jīng)過嚴(yán)格篩選,均身體健康,滿足衛(wèi)生部頒布的現(xiàn)行的《獻(xiàn)血者健康檢查要求》的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。采集血液后,同時留取用以血清免疫檢測和核酸檢測的樣本,先進(jìn)行血清免疫檢測,合格后,再行核酸檢測,血清免疫檢測及核酸檢測全程中,血樣的采集、存取及處理操作,皆由專業(yè)人員嚴(yán)格依照衛(wèi)生部的技術(shù)要求規(guī)范進(jìn)行。

        1.2 試劑與儀器

        (1)血清免疫檢測。使用全自動酶聯(lián)免疫分析儀(生 產(chǎn) 廠 家:HUMAN Gesellschaft fürBiochemica und DiagnosticambH)全自動加樣儀(生產(chǎn)廠家:嘉興凱實(shí)生物科技有限公司);乙型肝炎病毒表面抗原(HBSAG)酶聯(lián)免疫診斷試劑盒、丙型肝炎病毒抗體(HCV)酶聯(lián)免疫試劑盒以及人類免疫缺陷病毒HIV(1+2)抗體酶聯(lián)免疫檢測試劑盒均購自北京萬泰生物藥業(yè)有限公司,具體操作,皆嚴(yán)格依照產(chǎn)品使用說明書進(jìn)行。

        (2)核酸檢測。使用羅氏COBASS201檢測系統(tǒng),使用配套試劑,具體操作步驟,皆嚴(yán)格依照產(chǎn)品使用說明書進(jìn)行。

        1.3 方法

        (1)標(biāo)本采集及處理方法。EDTA-K2真空抗凝管,留取10mL血液,分2管裝存,其中,應(yīng)用帶分離膠的真空抗凝管保存核酸檢測標(biāo)本。全部標(biāo)本在血樣采集后4 h內(nèi)進(jìn)行離心處理,運(yùn)輸或保存待檢時,應(yīng)將樣本置于4℃環(huán)境內(nèi),需保證在采集血樣24 h內(nèi)進(jìn)行檢測。需要追蹤檢測的獻(xiàn)血者的血樣,使用帶分離膠的真空抗凝管留樣,5 mL即可,核酸初檢為陽性的標(biāo)本,需取血袋血漿,實(shí)施核酸拆分實(shí)驗(yàn)。

        (2)核酸檢測方法。先進(jìn)行單人份聯(lián)合檢測,若為核酸單獨(dú)反應(yīng)性標(biāo)本,則進(jìn)一步采取分項(xiàng)鑒別試驗(yàn)。

        1.4 檢測結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

        兩種檢測行平行檢測。血清免疫檢測結(jié)果低于設(shè)定的Cut off值,則可判定為陰性,而若大于或等于設(shè)定的Cut off值,則可判定為陽性[2]。

        在核酸檢測中,核酸單獨(dú)反應(yīng)性判定由系統(tǒng)自動完成,以樣本S/CO值≥1為判定標(biāo)準(zhǔn),初檢時同時檢測3種病毒,出現(xiàn)反應(yīng)性結(jié)果便是存在1 ~ 3種陽性病毒核酸;初檢陽性者,取血袋血漿,分別進(jìn)行3種病毒核酸反應(yīng)試驗(yàn),無反應(yīng),則為陰性,有反應(yīng),為陽性,

        1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

        采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)量資料用(±s)表示,行t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料用(%)表示,行χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 核酸單獨(dú)反應(yīng)性檢測結(jié)果

        在本組107 465例無償獻(xiàn)血者中,出現(xiàn)核酸單獨(dú)反應(yīng)性的樣本有331例,陽性檢出率為0.31%,核酸初檢單陽性例數(shù)有223例,單陽性率為0.21%。

        2.2 核酸鑒別試驗(yàn)陽性檢出結(jié)果

        進(jìn)一步核酸鑒別試驗(yàn)中,有97例為反應(yīng)性樣本,總陽性率為29.31%;而其中,HCV-NRA的鑒別陽性檢出率顯著高于HCV-DRA和 HIV-NRA,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < 0.05),見表 1。

        表1 HBV-DNA、 HCV-DRA和 HIV-NRA核酸鑒別情況比較[例(%)]

        3 討論與結(jié)論

        一直以來,臨床都以血清免疫學(xué)檢查為血液篩查的主要手段,陽性檢出率高,但若患者處于窗口期、合并病毒變異或處于免疫靜默期間,均容易出現(xiàn)漏診[3]。近年來,隨著分子流行病學(xué)的的發(fā)展以及分子生物科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步,核酸檢測在血液篩查,尤其是HBV、HCV以及HIV等病毒的篩檢中,應(yīng)用逐漸廣泛,現(xiàn)如今,其應(yīng)用幾乎已經(jīng)覆蓋了全國各地的血站。

        相比于血清免疫學(xué)監(jiān)測,核酸檢測的最顯著優(yōu)勢就是能夠縮短病原體檢測的窗口期,其檢測的靈敏度很高,能夠直接對血液中的病原體進(jìn)行篩查,可以準(zhǔn)確檢測出血清免疫檢測不到的隱匿病毒,從而有效提升輸血安全。

        核酸檢測基于TMA技術(shù),其基本原理如下:借助特異性的磁微珠以及目標(biāo)捕獲試劑,將被檢測的病毒核酸分子進(jìn)行分離和純化,再借助TMA技術(shù),實(shí)現(xiàn)對HBV-DNA、HCV-RNA以及HIV-RNA的核酸片段進(jìn)行擴(kuò)增,最后,再利用HPA法對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測,所用試劑中,具有內(nèi)標(biāo)分子,在整個反應(yīng)過程中都起到嚴(yán)密監(jiān)測的作用,可以有效避免假陰性結(jié)果的出現(xiàn)。

        現(xiàn)階段,臨床將核酸檢測引入到無償獻(xiàn)血者的血液篩查中,其目的就在于對血清免疫檢測遺漏的血樣進(jìn)行再次篩查,而血清免疫檢測漏診的發(fā)生,主要集中于以下兩種原因,其一,獻(xiàn)血者正處于血清免疫檢測的窗口期,其二則是獻(xiàn)血者屬于隱匿性HBV病毒感染;后一種現(xiàn)象的出現(xiàn),多是由于病毒變異或者患者自身免疫系統(tǒng)發(fā)生變化導(dǎo)致,感染者體內(nèi)的乙肝表面抗原的合成降低或者出現(xiàn)結(jié)構(gòu)變化,在進(jìn)行血清HBsAg檢測時,結(jié)果呈陰性,但是患者肝組織中還是可以檢出HBV-DNA。而核酸檢測則正好能彌補(bǔ)這一不足。但有研究證實(shí),核酸檢測的總檢出率相比于血清免疫檢測較低,且成本較高,因此,在實(shí)踐應(yīng)用中,均先行血清免疫檢測,再行核酸檢測進(jìn)行二次篩查,以確保安全性。

        本研究中,針對107 465例血清免疫檢測合格的無償獻(xiàn)血者的血樣進(jìn)行核酸檢測,先行單人份聯(lián)合檢測,成功發(fā)現(xiàn)有331例血樣存在核酸單獨(dú)反應(yīng)性,進(jìn)行核酸單陽性確定有223例,進(jìn)一步實(shí)施核酸鑒別反應(yīng)試驗(yàn),最終確定有97例血樣存在病毒感染,而其中有94例HBV-DNA陽性檢出,HCV-DRA以及HIV-DRA陽性檢出則分別為2例和1例。證實(shí)了核酸檢測能夠有效彌補(bǔ)血清免疫檢測的缺漏,將兩者聯(lián)合應(yīng)用,效果突出。將陽性檢出率進(jìn)行兩兩交叉對比,結(jié)果顯示,HBV-DNA陽性檢出與其它兩種的陽性檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),證實(shí)目前輸血安全風(fēng)險(xiǎn)主要為乙肝病毒感染,所以應(yīng)將其作為防控重點(diǎn)。

        綜上所述,核算檢測可以與血清免疫檢測聯(lián)合應(yīng)用于無償獻(xiàn)血者血液安全檢查中,能有效提升輸血安全,另外,臨床應(yīng)加強(qiáng)對乙肝病毒感染的篩查和防控。

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