周德榮 陳捷 林潔斌

前列腺癌是臨床常見惡性腫瘤, 屬性激素相關的癌癥類型, 是導致男性患者死亡的重要惡性病變之一。近十幾年來伴隨時代的發(fā)展, 前列腺癌發(fā)病率有上升趨勢, 正逐漸演變成為一種公共衛(wèi)生問題, 個別國家發(fā)病率甚至高達1%［1］,因此積極預防及治療前列腺癌成為醫(yī)學上需要深入研究的重難點問題。異黃酮屬于新型食物補充劑, 基本來源于大豆,既往醫(yī)學實驗研究顯示大豆對性激素依賴性癌癥有一定保護效果, 比如常見的前列腺癌、乳腺癌, 本文將再次深入探究異黃酮類化合物對前列腺癌細胞PC-3增殖的抑制作用, 具體報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細胞 前列腺癌細胞PC-3株標本由成都典型-培養(yǎng)物中心提供。

1.1.2 試劑 培養(yǎng)基：北美Gibco公司原裝進口, 型號為PRMI1640；小牛血清：北美Gibco公司原裝進口, 批準號 10270106；大豆苷元、金雀異黃素及大豆黃素均由日本Sigma公司提供；噻唑藍：日本Sigma公司MTT系；胰蛋白酶：上海斯信生物科技公司提供；順鉑：海南高翔醫(yī)藥有限公司。

1.1.3 儀器 本次實驗室研究使用到的儀器有倒置顯微鏡(出至于重慶光學儀器廠)、二氧化碳培養(yǎng)箱(日本Sanyo公司)、Elite ESP流式細胞儀(美國Coulter公司)、Top Count-NXT微孔板-閃爍發(fā)光檢測儀(美國, GE公司)和DG3022酶聯(lián)免疫檢測儀(華東電子管廠)。

1.2 方法

1.2.1 培養(yǎng)細胞 PRMI1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)前列腺癌細胞,培養(yǎng)基中包含10%濃度的胎牛血清, 形式為開放式-單層-貼壁培養(yǎng), 環(huán)境溫度條件控制在37℃, 使其處于飽和濕度狀態(tài), 并包含5%濃度的二氧化碳。

1.2.2 分組 實驗物采用二甲基亞楓［被譽為萬能溶劑,實驗預處理］物質(zhì)溶解后加入含有5%濃度胎牛血清的PRMI1640培養(yǎng)基中, 最終濃度調(diào)整如下：溶劑對照組, 體積占量比0.1%。順鉑對照組：3.0×10-5mol/L；大豆苷元：5.0×10-6mol/L、25.0×10-6mol/L、75.0×10-6mol/L ；金雀異黃素組：5.0×10-6mol/L、25.0×10-6mol/L、75.0×10-6mol/L；大豆黃素組：5.0×10-6mol/L、25.0×10-6mol/L、75.0×10-6mol/L。

1.2.3 處理及檢測 觀察異黃酮類化合物對前列腺癌細胞PC-3增殖的抑制作用, 樣本處理先取多生長期PC-3, 將其接種在96孔培養(yǎng)板, 每孔細胞濃度為5.0×103個, 持續(xù)培養(yǎng)24 h, 細胞貼壁, 加入濃度不同的實驗物, 總體積為200 μl/孔, 每一個劑量組均設置 4個復孔, 待72 h后加入噻唑藍, 20 μl/孔, 濃度為5 mg/ml, 接著繼續(xù)培育4 h, 除培養(yǎng)液,加入100 μl/孔的DMSO, DMSO凋零, 接著使用DG3022酶聯(lián)免疫檢測儀測得吸光度(A值, 490 nm波長), 算出A值平均值、抑制率(抑制率=溶劑對照組實驗組A值之差/溶劑對照組A 值 ×100.0%)［2］。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS19.3統(tǒng)計學軟件對研究數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差( x-±s)表示, 采用t檢驗。p＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

與溶劑對照組比較, 順鉑對照組及大豆苷元組、金雀異黃素組、大豆黃素組25.0×10-6、75.0×10-6mol/L濃度PC-3增殖抑制作用均更優(yōu), 差異具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)；且大豆苷元組、金雀異黃素組、大豆黃素組最高癌細胞PC-3增殖抑制率分別達50.19%、51.30%、39.12%。見表1。

表1 MTT檢測法測得大豆苷元、金雀異黃素、大豆黃素對前列腺癌細胞PC-3 的增殖影響(, %)

表1 MTT檢測法測得大豆苷元、金雀異黃素、大豆黃素對前列腺癌細胞PC-3 的增殖影響(, %)

注：與溶劑對照組比較, ap＜0.05

實驗物 濃度( mol/L) A值 抑制率溶劑對照 - 0.27±0.01 -順鉑對照 3.0×10-5 0.11±0.01a 61.61金雀異黃素 5.0×10-6 0.26±0.04 3.70 25.0×10-6 0.16±0.02a 42.45 75.0×10-6 0.13±0.02a 51.30大豆苷元 5.0×10-6 0.27±0.02 1.48 25.0×10-6 0.19±0.03a 27.30 75.0×10-6 0.14±0.02a 50.19大豆黃素 5.0×10-6 0.27±0.05 1.85 25.0×10-6 0.22±0.02a 17.35 75.0×10-6 0.17±0.01a 39.12

3 討論

異黃酮在國外醫(yī)學實驗研究里是常見植物雌激素, 其弱雌激素能和受體結(jié)合, 所發(fā)揮出的雌激素樣作用取決于機體激素水平狀態(tài)。本次研究納入的大豆苷元、金雀異黃素、大豆黃素均屬異黃酮類, 為生物類范疇, 目前已經(jīng)有較多研究證實了該物質(zhì)的藥用價值, 專家普遍覺得異黃酮對前列腺癌等性激素依賴性惡性腫瘤有一定保護功效［3］。目前該物質(zhì)對前列腺癌某些細胞因子的增值抑制作用研究還在深入進行中。

金雀異黃素化學結(jié)構(gòu)相似于雌二醇, 因此經(jīng)激素受體結(jié)合, 可發(fā)揮出雌激素樣作用；大豆苷元結(jié)構(gòu)同前者相比第5位碳上多了一個羥基, 機體攝入后通過內(nèi)里能轉(zhuǎn)化成金雀異黃素；大豆黃素為主要異黃酮化合物, 為4’一二羥基異黃酮, 作為先導物也和雌激素受體有一定親和力。流行病學研究得知, 長期攝入較多大豆類食物, 能明顯降低性激素依賴性癌癥發(fā)生率, 包括子宮癌、前列腺癌、乳腺癌等, 有動物實驗顯示異黃酮類化合物具有一定癌癥細胞抑制增值效果,可預防這類癌癥的發(fā)生［4］。研究發(fā)現(xiàn)異黃酮類化合物廣泛存在于幾百種植物中, 其中大豆最高, 因此膳食計劃中日?？啥嗍炒蠖怪破贰，F(xiàn)代醫(yī)學證實抑制癌細胞PC-3增殖, 影響細胞DNA合成, 可促使其惡性病變細胞凋亡［5］, 本次研究結(jié)果顯示較高濃度及高濃度大豆苷元、金雀異黃素、大豆黃素均有一定程度前列腺癌細胞PC-3增殖抑制效果, 結(jié)果和較多經(jīng)典研究相仿［3-5］, 為進一步充分利用異黃酮藥效, 探尋該物質(zhì)對性激素依賴型癌癥以及其他病變的作用, 目前醫(yī)學關于其生物學效應的研究還在持續(xù)進行中。

綜上所述, 大豆苷元、金雀異黃素、大豆黃素歸屬異黃酮類化合物, 生物體長期較多攝入能起到一定前列腺癌細胞PC-3增殖的抑制作用, 日常飲食科學調(diào)整, 可達到預防性激素依賴型惡性腫瘤的效果。