張建明,田 甜,姜 偉

(1.中國長江三峽集團有限公司中華鱘研究所，湖北 宜昌 443100； 2.三峽工程魚類資源保護湖北省重點實驗室，湖北 宜昌 443100)

長薄鰍(LeptobotiaelongateBleeker)，又稱薄鰍、花鰍，隸屬鰍科(Cobitidae)、沙鰍亞科(Botiinae)、薄鰍屬(Leptobotia)，是長江珍稀特有魚類，1998年，長薄鰍被正式列入《中國瀕危動物紅皮書》[1]。近年來，由于受到過度捕撈、環(huán)境污染等人為因素的影響，長薄鰍的棲息環(huán)境受到嚴(yán)重破壞，導(dǎo)致其數(shù)量越來越少，種群結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，親魚數(shù)量不足，魚類個體呈現(xiàn)小齡化趨勢。劉軍[2]對其定量分析認(rèn)為，長薄鰍已達到三級急切保護程度。長薄鰍苗種及幼魚的培育在整個養(yǎng)殖過程中至關(guān)重要，因此，做好苗種和幼魚階段的消毒和疾病預(yù)防工作對開展長薄鰍規(guī)?；B(yǎng)殖具有重要的意義。目前，有關(guān)長薄鰍幼魚急性毒性試驗方面的研究鮮見報道[3]。本試驗研究了氟苯尼考、鹽酸強力霉素、聚維酮碘、氯胺T、鹽酸奎寧、亞甲基藍、阿維菌素和敵百蟲共8種水產(chǎn)藥物對長薄鰍幼魚的急性毒性，旨在為長薄鰍幼魚培育階段常規(guī)藥物的合理使用提供參考數(shù)據(jù)，并為實際養(yǎng)殖生產(chǎn)提供有效指導(dǎo)。

1 材料和方法

1.1 材料

試驗魚為中國長江三峽集團公司中華鱘研究所烏東德魚類增殖放流站人工培育的長薄鰍幼魚。挑選體質(zhì)健壯、游動活潑、無病無傷、規(guī)格整齊的幼魚作為試驗魚，體長為(5.57±0.29)cm，體質(zhì)量為(1.95±0.24)g。試驗前在圓形暫養(yǎng)池(直徑3 m，水深0.7 m)中暫養(yǎng)5 d，試驗開始前2 d及試驗期間停止投喂。供試水產(chǎn)藥物規(guī)格及生產(chǎn)廠家見表1。

1.2 試驗條件

試驗在塑料桶中進行，試驗用水為經(jīng)過曝氣和靜止沉淀后的金沙江水，水溫為(22±1) ℃，pH值為7.9±0.2，溶氧量保持在6.0 mg/L以上。試驗期間每天監(jiān)測溶氧量、水溫，并保持試驗場所安靜、減少外界干擾對魚類造成的影響。

表1 供試水產(chǎn)藥物名稱及含量

1.3 試驗方法

試驗采用靜態(tài)急性毒性試驗方法進行[4-6]，試驗過程中為保證溶氧量，各試驗組微充氣。

1.3.1 預(yù)試驗 為了確定正式試驗所需要的試驗藥物質(zhì)量濃度范圍，在正式試驗前根據(jù)魚病防治的藥物常用劑量，適當(dāng)調(diào)整質(zhì)量濃度比例進行預(yù)試驗。預(yù)試驗持續(xù)96 h，觀察魚的活動情況，每24 h記錄一次死亡尾數(shù)。

1.3.2 正式試驗 根據(jù)預(yù)試驗得出的結(jié)果，在魚24 h全致死質(zhì)量濃度和96 h無死亡質(zhì)量濃度之間按等對數(shù)間距設(shè)置5個質(zhì)量濃度(表2)，每個質(zhì)量濃度設(shè)3個平行組，另設(shè)1個空白對照組，每個試驗組放幼魚20尾。

配置好試驗藥物后，由低質(zhì)量濃度組到高質(zhì)量濃度組依次隨機放入試驗魚，并于10 min內(nèi)完成分組，試驗過程中不換藥液。試驗開始后，觀察并記錄魚的活動和存活情況，分別于24、48、72、96 h時統(tǒng)計并記錄魚的存活情況。以試驗魚停止呼吸、對外界刺激無反應(yīng)為死亡判定標(biāo)準(zhǔn)。

表2 各試驗組供試水產(chǎn)藥物的質(zhì)量濃度 mg/L

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

采用寇氏法(Karber)估算半致死質(zhì)量濃度(LC50)、安全質(zhì)量濃度(SC)[7-8]，相關(guān)計算公式如下：

LogLC50=Xm-d(∑p-0.5)，

SC=48 hLC50×0.3/(24 hLC50/48 hLC50)2，

式中：Xm為最大劑量的對數(shù)，d為相鄰劑量組比值的對數(shù)，p為死亡率。

2 結(jié)果與分析

2.1 氟苯尼考、鹽酸強力霉素對長薄鰍幼魚的急性毒性試驗結(jié)果

在試驗初期，氟苯尼考和鹽酸強力霉素各試驗組長薄鰍幼魚未出現(xiàn)明顯異常反應(yīng)。分別在5 h和8 h后，1 548.82～2 000.00 mg/L氟苯尼考各試驗組和477.71～1 000.00 mg/L鹽酸強力霉素各試驗組中的長薄鰍幼魚開始出現(xiàn)異常反應(yīng)，均表現(xiàn)為游動緩慢、靜伏水底或在水底扭動、對外界刺激反應(yīng)遲鈍；隨后各組試驗魚均出現(xiàn)失衡、側(cè)翻、呼吸緩慢或做間歇性呼吸的癥狀；隨著時間的延長，試驗魚開始出現(xiàn)死亡，死亡魚體表黏液增多，體表、鰭條等部位充血嚴(yán)重。

氟苯尼考對照組和1 200.00 mg/L組的長薄鰍幼魚在整個試驗過程中未出現(xiàn)異常反應(yīng)和死亡現(xiàn)象。1 364.58、1 548.82、1 757.92 mg/L試驗組的長薄鰍幼魚24 h死亡率分別為0、20%、60%，48 h死亡率分別為10%、30%、70%，72 h死亡率分別為15%、35%、85%，96 h死亡率分別為25%、50%、90%；2 000.00 mg/L試驗組的長薄鰍幼魚在24 h死亡率為100%(表3)。

鹽酸強力霉素對照組和200.00 mg/L組的長薄鰍幼魚在試驗過程中未出現(xiàn)異常反應(yīng)和死亡現(xiàn)象。299.23、477.71、669.88 mg/L試驗組的長薄鰍幼魚24 h死亡率分別為0、20%、55%，48 h死亡率分別為0、55%、75%，72 h死亡率分別為10%、85%、90%，96 h死亡率分別為15%、90%、100%；1 000.00 mg/L試驗組的長薄鰍幼魚24 h死亡率為100%(表3)。

2.2 聚維酮碘、氯胺T對長薄鰍幼魚的急性毒性試驗結(jié)果

在試驗初期， 0～39.81 mg/L聚維酮碘各試驗組和氯胺T各試驗組長薄鰍幼魚未出現(xiàn)異常反應(yīng)，但聚維酮碘56.23 mg/L和80.00 mg/L試驗組中的長薄鰍幼魚在放入時便出現(xiàn)上下竄游、急躁不安的現(xiàn)象。3 h后，聚維酮碘39.81、56.23、80.00 mg/L試驗組長薄鰍幼魚開始出現(xiàn)游動無力、對外界刺激反應(yīng)遲鈍的現(xiàn)象，隨后試驗魚出現(xiàn)失衡、側(cè)翻、呼吸緩慢或間歇性呼吸的癥狀；隨著時間的延長，28.18、39.81、56.23、80.00 mg/L試驗組的試驗魚開始陸續(xù)死亡，死亡魚體表黏液增多，鰭條、皮膚充血發(fā)紅。11 h后，氯胺T 31.62、39.81、50.00 mg/L試驗組的長薄鰍幼魚開始表現(xiàn)出對外界刺激反應(yīng)遲鈍的現(xiàn)象，隨后試驗魚開始出現(xiàn)失衡、側(cè)翻、呼吸緩慢或做間歇性呼吸的癥狀；隨著時間的延長，31.62、39.81、50.00 mg/L試驗組的試驗魚開始出現(xiàn)集中死亡現(xiàn)象，死亡的長薄鰍幼魚體色發(fā)白，并伴有明顯的白色斑點。

聚維酮碘對照組和20.00 mg/L組的長薄鰍幼魚在試驗過程中未出現(xiàn)異常反應(yīng)和死亡現(xiàn)象，28.18、39.81、56.23 mg/L試驗組長薄鰍幼魚24 h死亡率分別為0、15%、60%，48 h死亡率分別為0、30%、80%，72 h死亡率分別為15%、45%、85%，96 h死亡率分別為25%、65%、100%；80.00 mg/L試驗組的長薄鰍幼魚24 h死亡率為100%(表3)。

氯胺T對照組和20.00 mg/L試驗組的長薄鰍幼魚在試驗過程中未出現(xiàn)異常反應(yīng)和死亡現(xiàn)象。25.12 mg/L和31.62 mg/L試驗組的長薄鰍幼魚24 h的死亡率分別為0和50%，48 h的死亡率分別為0和60%，72 h的死亡率分別為5%和100%，96 h的死亡率分別為10%和100%；39.81 mg/L試驗組的長薄鰍幼魚24 h和48 h死亡率分別為85%和100%；50.00 mg/L試驗組的長薄鰍幼魚24 h死亡率為100%(表3)。

2.3 鹽酸奎寧、亞甲基藍、阿維菌素和敵百蟲對長薄鰍幼魚的急性毒性試驗結(jié)果

在試驗初期，鹽酸奎寧、亞甲基藍、阿維菌素和敵百蟲各試驗組長薄鰍幼魚未表現(xiàn)出明顯的異常反應(yīng)。以上不同藥物最高質(zhì)量濃度試驗組分別在4、3、3、1 h后開始出現(xiàn)異常行為，初期均表現(xiàn)為游動緩慢無力、反應(yīng)遲鈍等癥狀，隨后出現(xiàn)失衡、側(cè)翻、呼吸緩慢或做間歇性呼吸的癥狀；隨著時間的延長，15.67、24.55、38.45、60.00 mg/L的鹽酸奎寧試驗組，7.08、10.00、14.19、20.00 mg/L的亞甲基藍試驗組，0.10、0.17、0.29、0.50 mg/L的阿維菌素試驗組以及0.88、1.22、1.75、2.50 mg/L的敵百蟲試驗組中試驗魚均開始陸續(xù)死亡。4組試驗魚死亡癥狀一致表現(xiàn)為體表黏液增多，但各組間也存在差異，如鹽酸奎寧組死亡魚體表、鰭條等部位嚴(yán)重充血，亞甲基藍組死亡魚體表呈現(xiàn)淡藍色，阿維菌素組和敵百蟲組死亡魚體色發(fā)白。

鹽酸奎寧對照組和10.00 mg/L試驗組的長薄鰍幼魚在試驗過程中未出現(xiàn)異常反應(yīng)和死亡現(xiàn)象。15.67、24.55、38.45 mg/L試驗組的長薄鰍幼魚24 h的死亡率分別為0、15%、50%，48 h的死亡率分別為10%、45%、75%，72 h的死亡率分別為10%、55%、90%，96 h的死亡率分別為15%、80%、100%；60.00 mg/L試驗組的長薄鰍幼魚24 h死亡率為100%(表3)。

表3 8種水產(chǎn)藥物的急性毒性試驗結(jié)果及LC50和SC

亞甲基藍對照組和5.00 mg/L試驗組的長薄鰍幼魚在試驗過程中未出現(xiàn)異常反應(yīng)和死亡現(xiàn)象。7.08、10.00、14.19 mg/L試驗組的長薄鰍幼魚24 h死亡率分別為0、25%、55%，48 h死亡率分別為10%、30%、80%，72 h死亡率分別為10%、55%、100%，96 h死亡率分別為20%、75%、100%；20.00 mg/L試驗組的長薄鰍幼魚24 h死亡率為100%(表3)。

阿維菌素對照組和0.06 mg/L試驗組的長薄鰍幼魚在試驗過程中未出現(xiàn)異常反應(yīng)和死亡現(xiàn)象，0.10、0.17、0.29 mg/L試驗組的長薄鰍幼魚24 h死亡率分別為0、25%、55%，48 h死亡率分別為10%、40%、90%，72 h死亡率分別為10%、55%、100%，96 h死亡率分別為25%、75%、100%；0.50 mg/L試驗組長薄鰍幼魚24 h死亡率為100%(表3)。

敵百蟲對照組和0.60 mg/L試驗組的長薄鰍幼魚在試驗過程中未出現(xiàn)異常反應(yīng)和死亡現(xiàn)象，0.88、1.22、1.75 mg/L試驗組的長薄鰍幼魚24 h死亡率分別為0、40%、45%，48 h死亡率分別為0、50%、60%，72 h死亡率分別為10%、70%、85%，96 h死亡率分別為10%、70%、100%；2.50 mg/L試驗組的長薄鰍幼魚24 h死亡率為100%(表3)。

2.4 8種水產(chǎn)藥物對長薄鰍幼魚的LC50和SC

8種水產(chǎn)藥物對長薄鰍幼魚的LC50和SC見表3。由表3可見，氟苯尼考、鹽酸強力霉素、聚維酮碘、氯胺T、鹽酸奎寧、亞甲基藍、阿維菌素、敵百蟲對長薄鰍幼魚24 h LC50分別為1 691.18、606.03、51.49、32.80、35.97、12.80、0.25、1.54 mg/L；48 h LC50分別為1 626.97、486.18、45.51、30.98、26.93、11.16、0.18、1.41 mg/L； 72 h LC50分別為1575.34、390.03、40.23、27.96、24.10、9.56、0.16、1.16 mg/L；96 h LC50分別為1 515.53、359.99、34.23、27.65、20.17、8.63、0.13、1.10 mg/L；其SC分別為451.73、93.87、10.67、8.29、4.53、2.55、0.03、0.35 mg/L。

3 結(jié)論與討論

3.1 8種水產(chǎn)藥物對長薄鰍幼魚的毒性評價

LC50常用來衡量藥物對試驗魚毒性的大小， LC50值越小，藥物對試驗魚的毒性越大； LC50值越大，藥物對試驗魚的毒性越小[8]。根據(jù)有毒物質(zhì)對魚類毒性的評價標(biāo)準(zhǔn)，以96 h LC50值作為魚類急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn)，分為劇毒(<0.1 mg/L)、高毒(0.1～1.0 mg/L)、中毒(1.0～10 mg/L)、低毒(>10 mg/L)4個等級[9]。本試驗中氟苯尼考、鹽酸強力霉素、氯胺T、鹽酸奎寧、亞甲基藍、聚維酮碘、阿維菌素、敵百蟲對長薄鰍幼魚的96 h LC50依次為1 515.53、359.99、27.65、20.17、8.63、34.32、0.13、1.10 mg/L，藥物對長薄鰍幼魚毒性大小依次為阿維菌素>敵百蟲>亞甲基藍>鹽酸奎寧>氯胺T>聚維酮碘>鹽酸強力霉素>氟苯尼考。試驗結(jié)果表明，對于長薄鰍幼魚而言，阿維菌素是高毒藥物，敵百蟲和亞甲基藍是中毒藥物，氟苯尼考、鹽酸強力霉素、氯胺T、鹽酸奎寧、聚維酮碘是低毒藥物。

3.2 長薄鰍幼魚對8種水產(chǎn)藥物的敏感性和耐受性

長薄鰍幼魚對8種水產(chǎn)藥物存在敏感性差異，其敏感性由高到低依次為阿維菌素>敵百蟲>亞甲基藍>鹽酸奎寧>氯胺T>聚維酮碘>鹽酸強力霉素>氟苯尼考。其中，最敏感的藥物是阿維菌素，其96 h LC50為0.13 mg/L，SC為0.03 mg/L；最不敏感的藥物是氟苯尼考，其96 h LC50為1 515.53 mg/L、SC為451.73 mg/L，兩者96 h LC50值相差11 658倍，SC相差15 058倍，這可能是由藥物自身的化學(xué)結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)、作用機理、劑型、毒性大小等因素所致。

不同種類魚類對各種藥物的耐受性有差別。氟苯尼考對鯽魚(Cara-ssiusauratus)[10]、大黃魚(Pseudosciaenacrocea)[11]、鱘魚(Sturgeon)[12]、銀盾魚(Pomoxisnigromacufastus)[13]的96 h LC50分別為1 129.54 mg/L、>1 000 mg/kg、891.25 mg/kg、75.2 mg/L，氟苯尼考對長薄鰍幼魚的96 h LC50為1 515.53 mg/L，表明長薄鰍對氟苯尼考的耐受性強于以上4種魚類。目前，未見鹽酸強力霉素對魚類急性毒性試驗的報道，本研究顯示鹽酸強力霉素對長薄鰍的24、48、72、96 h LC50分別為606.03、486.18、390.03、359.99 mg/L。

聚維酮碘對大鱗副泥鰍(Paramisgurnusdabryanus)[4]、拉氏鱥(Phoxinuslagowskii)[14]、云斑尖塘鱧(OxyeleotrismarmoratusBleeker)[15]、泥鰍(Misgurnusanguillicaudatus)[16]的96 h LC50分別為388.47、16.85、29.74、360.00 mg/L。聚維酮碘對長薄鰍幼魚的96 h LC50為34.23 mg/L，表明長薄鰍對聚維酮碘的耐受性高于拉氏鱥和云斑尖塘鱧，低于大鱗副泥鰍和泥鰍。氯胺T對雜交鱘(Acipenserbaeri♂×A.schrenkii♀)[5]、虹鱒(Oncorhynchusmykiss)[17]、斑點叉尾鮰(IetalurusPunetaus)[17]、條紋鱸(Moronesaxatilis)[18]、大西洋鱘(Acipensersturio)[19]的96 h LC50分別為11.40、2.80、3.73、9.70、7.73 mg/L。而氯胺T對長薄鰍幼魚的96 h LC50為27.65 mg/L，比上述報道研究中虹鱒、斑點叉尾鮰、條紋鱸、大西洋鱘以及雜交鱘的96 h LC50均高，說明長薄鰍對氯胺T的耐受性強于以上5種魚類。

亞甲基藍對倒刺鲃(Spinibarbusdenticulatus)[20]、金魚(Carassiusauratus)[21]、孔雀魚(Poeciliareticulata)[22]、團頭魴(Megalobramaamblycephala)[23]的96 h LC50分別為36.7、15.0、237.5、86.44 mg/L。亞甲基藍對長薄鰍幼魚的96 h LC50為8.63 mg/L，表明長薄鰍對亞甲基藍的耐受性明顯低于孔雀魚和團頭魴，稍低于倒刺鲃和金魚。阿維菌素對河鱸(PercafluviatilisLinnaeus)[24]、胭脂魚(Myxocyprinusasiaticus)[25]的72 h LC50分別為0.638、0.026 9 mg/L。阿維菌素對長薄鰍幼魚的72 h LC50為0.16 mg/L，表明長薄鰍對阿維菌素的耐受性強于胭脂魚，低于河鱸。敵百蟲對大鱗副泥鰍[4]、烏鱧(Channaargus)[8]、倒刺鲃(Spinibarbusdenticulatus)[20]、硬刺松潘裸鯉(Gymnocyprispotaninifirmispinatus)[26]、褐鱒(Salmotrutta)[27]、半刺厚唇魚(Acrossocheiliushemispinus)[9]的96 h LC50分別為 4.8、2.719、16.0、4.76、1.43、3.032 mg/L。敵百蟲對長薄鰍幼魚96 h LC50為1.10 mg/L，表明長薄鰍對敵百蟲耐受性與褐鱒相似，但低于其他6種魚類。目前鹽酸奎寧對魚類的急性毒性試驗報道鮮見，本試驗顯示鹽酸奎寧對長薄鰍幼魚的24、48、72、96 h LC50分別為35.97、26.93、24.10、20.17 mg/L。

3.3 8種水產(chǎn)藥物對長薄鰍幼魚的用藥安全和使用注意事項

氟苯尼考，又名氟甲砜霉素，系酰胺醇類藥物，其抗菌活性優(yōu)于氯霉素，副作用小于氯霉素，是水產(chǎn)養(yǎng)殖中常用的一種廣譜抗生素；鹽酸強力霉素，別名多西環(huán)素，是一種長效、高效、廣譜的半合成四環(huán)素類藥物。二者常用于治療淡水魚類的細(xì)菌性爛鰓病、白皮病、白頭白嘴病、豎鱗病、細(xì)菌性敗血癥、細(xì)菌性腸炎病等疾病。口服常用劑量為：氟苯尼考 7～15 mg/kg、鹽酸強力霉素30～50 mg/kg；藥浴常用劑量為：氟苯尼考4～8 mg/L、鹽酸強力霉素15～30 mg/L[28]。本試驗結(jié)果顯示，氟苯尼考和鹽酸強力霉素對長薄鰍幼魚的SC分別為451.73 mg/L和93.87 mg/L，遠(yuǎn)高于日常使用劑量。但在魚類免疫功能類的研究中發(fā)現(xiàn)，過量的使用氟苯尼考對斑點叉尾鮰[29]、鯉(Cyprinuscarpio)[30]和雜色鮑(Haliotisdiversicolor)[31]免疫器官造成不同程度的損傷。因此，在長薄鰍幼魚養(yǎng)殖過程中建議按常規(guī)劑量使用氟苯尼考和鹽酸強力霉素防治細(xì)菌性疾病，以保障長薄鰍幼魚的安全性。

聚維酮碘，又名碘絡(luò)酮，是一種溫和、高效的廣譜消毒劑，主要用于魚卵、水生動物體表消毒。氯胺T，系鹵素類消毒劑，殺菌譜廣，消毒作用緩慢而持久，刺激性小。聚維酮碘常規(guī)使用劑量隨水生動物種類、年齡和疾病種類差別較大，如對蝦病預(yù)防用藥為0.3～0.6 mg/L浸泡10 min，而草魚魚種出血病預(yù)防用藥為30 g/m3浸浴15～20 min；氯胺T常規(guī)藥浴劑量為4～20 mg/L[28]。本試驗結(jié)果顯示，聚維酮碘和氯胺T對長薄鰍幼魚的SC分別為10.67 mg/L和8.29 mg/L，處于常規(guī)使用劑量的中間值。故建議采用聚維酮碘和氯胺T對長薄鰍幼魚進行消毒時通常應(yīng)按照SC使用，確需加大藥物質(zhì)量濃度時不宜超過20 mg/L。

鹽酸奎寧、亞甲基藍、阿維菌素和敵百蟲均是水產(chǎn)養(yǎng)殖中常用的殺蟲、驅(qū)蟲藥，其中鹽酸奎寧和亞甲基藍主要用于治療小瓜蟲、車輪蟲、斜管蟲等原蟲病，阿維菌素可驅(qū)殺棘頭蟲、指環(huán)蟲、三代蟲等蠕蟲，敵百蟲可驅(qū)殺蠕蟲、甲殼動物、蚌殼蟲和水蜈蚣等寄生蟲。藥浴常用劑量為：鹽酸奎寧20～35 mg/L、亞甲基藍2～5 mg/L(重癥4～8 mg/L)、阿維菌素0.08 mg/L、敵百蟲0.2～0.5 mg/L[28]。本試驗結(jié)果顯示，鹽酸奎寧、亞甲基藍、阿維菌素、敵百蟲對長薄鰍幼魚的SC分別為4.53、2.55、0.03、0.35 mg/L，其中鹽酸奎寧和阿維菌素安全劑量低于常規(guī)劑量，亞甲基藍和敵百蟲安全劑量處于常規(guī)劑量的中間值。小瓜蟲病是長薄鰍幼魚養(yǎng)殖過程中的常見病，建議治療此病時應(yīng)慎用鹽酸奎寧，亞甲基藍的使用劑量通常參考SC，如需提高藥物質(zhì)量濃度應(yīng)不超過5 mg/L。治療蠕蟲病時應(yīng)慎用阿維菌素，建議按SC使用敵百蟲。生產(chǎn)實踐表明0.35 mg/L的敵百蟲可以驅(qū)殺大部分的蠕蟲和甲殼動物。