麥麥提依明·托合提 文國道 唐超 李俊漾 胡躍兵 馬馳原*

(新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院神經(jīng)外科，新疆 烏魯木齊 830001; 2南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬金陵醫(yī)院，中國人民解放軍南京總醫(yī)院神經(jīng)外科，江蘇 南京 210002)

人類前梯度蛋白2(anterior gradient 2, AGR2)是源于非洲爪蟾蛋白XAG2(Xenopus anterior gradient 2)的人型同系物，它在爪蟾胚胎的生理發(fā)育生長過程中發(fā)揮了重要的作用[1]。本部分實(shí)驗(yàn)中，我們用鞍區(qū)占位性病變患者、正常人及前列腺癌患者血清檢測(cè)AGR2蛋白含量，評(píng)價(jià)AGR2在垂體腺瘤(pituitary adenoma, PA)診斷、鑒別診斷中的價(jià)值。

材料與方法

一、病例的收集與分類

按本研究納入標(biāo)準(zhǔn)選擇2013年12月至2014年12月在我院神經(jīng)外科手術(shù)治療的垂體腺瘤患者以及非垂體腺瘤鞍區(qū)病變患者。隨機(jī)選擇前列腺癌患者7例作為陽性對(duì)照組。所有病例均經(jīng)病理確診。隨機(jī)選擇20例正常人(男女分別為10例，年齡段在20～ 50歲者)作為陰性對(duì)照組。

相關(guān)病例入選標(biāo)準(zhǔn)：①診斷明確者；②發(fā)病后隨訪時(shí)間超過兩年者；③垂體腺瘤影像學(xué)能明確侵襲性或非侵襲性者；④垂體腺瘤為單一分泌類型者；⑤年齡段在20～50歲者；⑥無其他疾病者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①垂體腺瘤卒中或者囊變者；②發(fā)病后隨訪時(shí)間低于兩年者；③影像學(xué)能明確侵襲性或非侵襲性者；④診斷為混合型垂體腺瘤者；⑤年齡在20歲以下或50歲以上者；⑥存在其他疾病者。

按照納入標(biāo)準(zhǔn)選擇的垂體腺瘤患者共163例，非垂體腺瘤鞍區(qū)病變患者共43例。其中無功能(non-functioning, NF)腺瘤110例，生長激素(growth hormone, GH)腺瘤29例，泌乳素腺瘤(prolactin, PRL)腺瘤17例，促腎上腺皮質(zhì)激素(adenocorticotropic hormone, ACTH)腺瘤7例。根據(jù)垂體腺瘤Hardy分類法和Knosp分類法將垂體腺瘤分為侵襲性垂體腺瘤和非侵襲性垂體腺瘤[2]，其中侵襲性垂體腺瘤75例，非侵襲性垂體腺瘤88例。

二、實(shí)驗(yàn)方法

收集相關(guān)患者與正常人的血液，在室溫下放置2 h，然后1 500 g離心20 min，取上清后轉(zhuǎn)移至武漢Uscn生命科學(xué)技術(shù)有限公司生產(chǎn)的AGR2檢測(cè)試劑盒采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)測(cè)定血清中AGR2含量。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

本實(shí)驗(yàn)所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)。用受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic curve, ROC)來確定最佳轉(zhuǎn)折點(diǎn)以及血清AGR2對(duì)垂體腺瘤和其他非垂體腺瘤病變鑒別診斷的敏感性和特異性。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、垂體腺瘤患者血清AGR2的水平

在本實(shí)驗(yàn)中，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度和OD值所繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。其中相關(guān)系數(shù)r=0.99999468，S=0.17271624。

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的擬合方程式及相關(guān)系數(shù)，計(jì)算出的血清AGR2水平如圖2所示。結(jié)果提示，垂體腺瘤患者血清AGR2水平明顯高于正常人血清AGR2水平，分別為(250.10±79.14) ng/mL和(163.67±50.38) ng/mL，P<0.001以及非垂體腺瘤鞍區(qū)病變患者血清AGR2水平，分別為(250.10±79.14) ng/mL和(220.84 ±79.62) ng/mL，P=0.017。此外，非垂體腺瘤鞍區(qū)病變患者血清AGR2水平也明顯高于正常人血清AGR2水平，分別為(220.84±79.62) ng/mL和(163.67±50.38) ng/mL，P=0.002。這表明，檢測(cè)血清AGR2水平不僅能把鞍區(qū)病變患者中的垂體腺瘤患者區(qū)分出來，而且能區(qū)分垂體腺瘤、非垂體腺瘤鞍區(qū)病變患者與正常人。

隨后，我們比較了垂體腺瘤不同分泌類型中血清AGR2水平，血清AGR2水平在GH腺瘤中最高(291.38±97.37)ng/mL，其含量高到低依次為GH腺瘤，NF腺瘤，ACTH腺瘤及PRL腺瘤，分別為(291.38±97.37) ng/mL，(245.63±74.79) ng/mL，(232.58±76.03) ng/mL，(215.81±44.12) ng/mL。不同分泌類型垂體腺瘤患者血清AGR2水平無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

二、ROC曲線分析

根據(jù)垂體腺瘤患者和正常人血清AGR2水平繪制出的ROC曲線如圖3 所示。其曲線下面積(area under curve, AUC)為0.835。血清AGR2水平的截?cái)帱c(diǎn)(cut-off point)為158.63 ng/mL，其正確系數(shù)(Youden Index)為0.564。敏感性為91.4%(149/163),特異性為65%(13/20)。這些數(shù)據(jù)表明用ELISA法檢測(cè)血清AGR2水平具有較高的敏感性。

三、垂體腺瘤患者血清AGR2水平與其臨床特征的關(guān)系

在163例垂體腺瘤患者中，男女患者分別為83例和80例。其中75例為侵襲性，其余88例為非侵襲性垂體腺瘤。163例垂體腺瘤患者中，14例為術(shù)后復(fù)發(fā)垂體腺瘤，其余149例為原發(fā)性垂體腺瘤。共5例為垂體微腺瘤(直徑10 mm)，其余均為垂體大腺瘤(直徑>10 mm)。垂體腺瘤患者臨床因素與血清AGR2水平的關(guān)系如表1 所示。結(jié)果提示：在垂體腺瘤患者中，男性患者與女性患者血清中AGR2水平有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，男性患者血清AGR2水平高于女性患者。然而，在正常人中，男性血清中AGR2的水平與女性無明顯差異。血清AGR2水平與其它臨床特征如腫瘤侵襲性、腫瘤復(fù)發(fā)、腫瘤大小等無明顯的相關(guān)(P值分別為0.112、0.608、0.608)。這表明，不同臨床特征的垂體腺瘤患者血清AGR2的水平是比較穩(wěn)定的。

163例垂體腺瘤中，垂體微腺瘤(直徑10 mm)僅5例。為探究腫瘤大小與血清AGR2水平有無相關(guān)性，我們將163例垂體大腺瘤按腫瘤最大直徑分為5組，分別是腫瘤最大直徑為≤10 mm、10～19 mm、20～29 mm、30～39 mm以及≥40 mm。其血清AGR2水平依次為271.02±86.02、255.81±91.79、250.55±82.13、249.80±55.36、219.20±45.55，腫瘤體積越大，其血清中AGR2的水平越低。然而，各組血清AGR2的水平無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

圖1 血清AGR2的ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線

Fig 1 The standard curve according to the concentration of standard reagent

圖2 正常人、垂體腺瘤患者、非垂體腺瘤鞍區(qū)病變患者及前列腺癌患者血清AGR2水平散布圖

Fig 2 Scatter plot of serum AGR2 levels in normal controls, pituitary adenoma patients, non-PA patients with other occupying lesions in saddle area and prostate cancer patients detected by ELISA

NC: Normal control; PA: Pituitary adenomas; Non-PA: Non-PA patients with other occupying lesions in saddle area; PC: Prostate cancer.

aP<0.01,bP<0.01,cP=0.017<0.05.

圖3 垂體腺瘤患者和正常人血清中AGR2水平的ROC曲線

Fig 3 The ROC curve for serum AGR2 in pituitary adenoma patients and normal controls

ParametersnAGR2 (ng/mL) Cases163250.10±79.14 Gender Male83262.14±78.82a Female80237.60±78.01 Aggressive Yes75239.55±71.26 No88259.08±84.66 Recurrence Yes14241.88±59.49 No149250.87±80.86 Tumor size ≤10 mm5271.02±86.02 >10 mm158249.43±79.12

aP=0.047<0.05,vsfemale patients.

討 論

垂體腺瘤是常見的顱腦腫瘤之一，約占全部顱腦腫瘤的10%，在人群尸檢中發(fā)現(xiàn)率可高達(dá)20%～30%[3]。垂體腺瘤過度分泌某些垂體激素，引起一序列的代謝紊亂和臟器損害；腫瘤壓迫正常垂體，導(dǎo)致正常垂體激素分泌減少，引起相應(yīng)靶腺的功能低下；腫瘤壓迫視神經(jīng)等周圍結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致視力下降、視野缺損等相應(yīng)功能的嚴(yán)重障礙。因?yàn)榇贵w腺瘤的好發(fā)年齡為20～35歲，對(duì)腫瘤患者的生活、勞動(dòng)能力及生育功能均有嚴(yán)重的損害，造成一序列社會(huì)心理影響[4]。

垂體腺瘤以其腫瘤生物學(xué)特性可分為非侵襲性垂體腺瘤、侵襲性垂體腺瘤以及垂體腺癌。其中，非侵襲性微腺瘤由于腫瘤體積小、缺乏特異性臨床表現(xiàn)，早期難以發(fā)現(xiàn)。侵襲性垂體腺瘤可以侵犯周圍的硬膜、骨質(zhì)，侵入海綿竇、蝶竇等結(jié)構(gòu)。侵襲性垂體腺瘤具有高增殖活性、高侵襲能力、術(shù)后易復(fù)發(fā)、臨床治愈率低等特點(diǎn)[5]。即使侵襲性垂體腺瘤做到鏡下全切，其復(fù)發(fā)率仍高達(dá)20%[6]。因此，垂體腺瘤的早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療至關(guān)重要。

AGR2是源于非洲爪蟾蛋白XAG2(Xenopus anterior gradient 2)的人型同系物，它在爪蟾胚胎的生理發(fā)育生長過程中發(fā)揮了重要的作用[7]。AGR2 主要和激素依賴性腫瘤相關(guān)，例如乳腺癌、胰腺癌、肺癌、前列腺癌等。AGR2 在一些腫瘤中表現(xiàn)出了明顯的致癌基因的相關(guān)特征，例如促進(jìn)細(xì)胞增殖，促進(jìn)腫瘤耐藥等。然而，在纖維肉瘤中腫瘤的致瘤性卻因AGR2 的過度表達(dá)而被抑制。所以AGR2 在不同的腫瘤中的表達(dá)有很大的差異，其在不同腫瘤發(fā)生發(fā)展的過程中的作用也有很大的差異。因此，進(jìn)一步深入研究AGR2 在垂體腺瘤中的功能及機(jī)制很有必要。

血清AGR2作為惡性腫瘤生物學(xué)標(biāo)志物已有大量研究。Edgell等報(bào)道在卵巢癌患者血清中AGR2水平明顯提高[8]。Chen等發(fā)現(xiàn)在胰腺癌和癌前病變患者胰液中AGR2水平比正常對(duì)照組顯著提高[9]。血清AGR2還可以作為評(píng)價(jià)惡性腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)活性的重要指標(biāo)[10]。文獻(xiàn)報(bào)道AGR2 mRNA在前列腺、乳腺及結(jié)直腸惡性腫瘤患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞中表達(dá)升高[11]。Chung等通過檢測(cè)血清中AGR2蛋白水平發(fā)現(xiàn)，血清中AGR2水平升高與腫瘤術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[12]。本研究首次發(fā)現(xiàn)血清AGR2可作為鑒別垂體腺瘤與正常人以及垂體腺瘤與非垂體腺瘤鞍區(qū)病變的臨床生物學(xué)指標(biāo)。關(guān)于AGR2如何分泌及其如何在腫瘤中起作用的機(jī)制需要更多的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)來探索和驗(yàn)證。

本實(shí)驗(yàn)用ELISA法檢測(cè)了垂體腺瘤患者、非垂體腺瘤鞍區(qū)病變患者以及正常對(duì)照組血清AGR2水平，發(fā)現(xiàn)血清AGR2可以作為垂體腺瘤與非垂體腺瘤鞍區(qū)病變患者鑒別診斷的重要生物學(xué)標(biāo)志物。ROC曲線表明用ELISA法檢測(cè)血清AGR2水平具有較高的敏感性。血清AGR2水平與腫瘤侵襲性、術(shù)后復(fù)發(fā)、腫瘤大小等臨床因素?zé)o明顯的相關(guān)。AGR2在垂體腺瘤診斷及鑒別診斷中的價(jià)值需要更大規(guī)模的臨床研究來進(jìn)一步驗(yàn)證。