彭曉云 趙林濤 王 磊 曲天歌 關(guān)彥玲 曲文華 曲韻智#

1 葵花藥業(yè)集團北京藥物研究院有限公司 北京 101100 2 陜西省中醫(yī)藥研究院藥理室 陜西 西安 710003 3 陜西中醫(yī)藥大學藥學院 陜西 咸陽 712046 4 北京中醫(yī)藥大學 北京 100029 5 黑龍江葵花藥業(yè)股份有限公司 黑龍江 哈爾濱 150036

酒精中毒和酒精濫用對人類健康的危害成為日益嚴重的社會問題，長期大量飲酒可導致人各種器官的損傷，尤其以肝受損最為嚴重。酒精性肝損傷，根據(jù)病理學和臨床分型，可分為酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纖維化等，其發(fā)生的原因主要是由于酒精對肝臟的毒性作用。酒精性肝病是西方發(fā)達國家肝硬化的主要病因（占80%～90%），也是青壯年死亡的主要原因[1]。護肝片主要由柴胡、茵陳、板藍根、五味子、豬膽粉和綠豆組成，能夠疏肝理氣、健脾消食，具有降低轉(zhuǎn)氨酶的作用,用于脂肪肝[2]、慢性肝炎及早期肝硬化等。本研究觀察護肝片對肝臟組織結(jié)構(gòu)及功能的影響，為其防治酒精性肝損傷提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物：雌性SD大鼠，體重180～220g，由西安交大醫(yī)學院實驗動物中心提供，動物合格證號：610017000001469，許可證號：SCXK(陜)2012-003。

1.2 藥物：護肝片，黑龍江葵花藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)；硫普羅寧腸溶片，河南省新誼藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；復方甘草酸苷片，樂普藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)。

1.3 試劑與儀器：60度紅星二鍋頭，北京紅星股份有限公司生產(chǎn)；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）、谷氨酸脫氫酶(GLDH)、血清糖缺乏轉(zhuǎn)鐵蛋白（CDT）、甘油三酯(TG)、總膽固醇（T-CHO）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）測試盒由南京建成生物工程研究所提供；722N型分光光度計（上海元析儀器有限公司）、iMark型酶標儀，日本生產(chǎn)。

1.4 模型的制備、試驗分組及給藥：將110只雌性SD大鼠隨機分為空白組和造模組2組，空白組15只，其余95只按如下方法造模。參考文獻[3-5]，空白組以水灌胃并喂正常全價飼料，模型組從低濃度酒精10%（體積分數(shù)）開始,每天1次，1.5ml/100g，逐日遞增3%～4%,到濃度為60%時，減少灌胃體積為1.0ml/100g，同時以10%酒精飲料（用二鍋頭與純凈水配制）為飲用水，連續(xù)8周以上。從第4周開始抽查，空白組和造模組均進行抽樣，造模組多于空白組，進行病理檢測，直到觀察到酒精誘發(fā)大鼠肝炎形成后進行實驗分組?？瞻讓φ战M和模型組各12只，每天灌胃給予純凈水；給藥組各11只，硫普羅寧腸溶片組給藥量0.05g/kg，復方甘草酸苷片組給藥量0.06g/kg，護肝片大、中、小劑量組給藥劑量分別為0.8g/kg、0.4g/kg、0.2g/kg，以上各組每日給藥1次,每周給藥7天，共4周。由于肝損傷模型大鼠自我修復能力強，在給藥期間模型組與給藥組繼續(xù)造模。

1.5 取材與檢測：大鼠處理前禁食不禁水12h；用水合氯醛麻醉，頸總靜動脈取血測血液生化指標；解剖取大鼠肝臟，部分肝組織測組織生化指標含量；剩下的肝組織固定，做病理切片，采用HE染色。

表1 對大鼠血清AST、ALT的影響（±s，U/L）

表1 對大鼠血清AST、ALT的影響（±s，U/L）

注：與空白組比較，△△P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別空白組模型組硫普羅寧腸溶片復方甘草酸苷片護肝片大劑量護肝片中劑量護肝片小劑量劑量（g/k g）--0.0 5 0.0 6 0.8 0 0.4 0 0.2 0只數(shù)1 2 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 A S T 5 6.8 6±1 9.0 1 9 2.2 6±2 7.1 4△△6 0.5 6±8.7 1**6 2.4 2±1 0.6 6**5 8.6 9±1 7.1 4**6 1.8 1±1 4.9 5**7 0.3 0±1 3.0 3*A L T 5 1.3 8±5.6 7 8 0.4 8±2 1.9 3△△5 5.4 3±8.8 6**5 7.0 1±9.9 6**5 3.5 8±1 5.5 0**5 6.4 6±6.1 7**6 3.4 8±1 2.0 2*

1.6 統(tǒng)計學方法：采用SPSS16.0軟件進行統(tǒng)計學處理，各組實驗動物數(shù)據(jù)采用±s表示，組間采用方差分析，各指標間比較采用t檢驗，各組均與模型組比較P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 對大鼠血清生化指標的影響：由表1、表2可見，模型組大鼠血清AST、ALT、GLDH、CDT、GGT含量明顯高于空白組（P＜0.01）；各給藥組大鼠血清AST、ALT含量明顯低于模型組（P＜0.01或P＜0.05），硫普羅寧腸溶片組復方甘草酸苷組及護肝片大、中劑量組大鼠血清GLDH CDT、GGT含量明顯低于模型組（P＜0.01或P＜0.05），小劑量護肝片組大鼠肝功能指標CDT、GGT也明顯低于模型組（P＜0.01）。

表2 對大鼠血清GLDH、T-BIL、CDT的影響（±s）

表2 對大鼠血清GLDH、T-BIL、CDT的影響（±s）

注：與空白組比較，△△P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別空白組模型組硫普羅寧腸溶片復方甘草酸苷片護肝片大劑量組護肝片中劑量組護肝片小劑量組劑量（g/kg）- -0.05 0.06 0.80 0.40 0.20動物數(shù)（只）12 10 11 11 11 11 11 GLDH（U/mL）299.31±62.16 396.23±62.36△△322.53±69.10*335.29±49.63*320.13±45.56**334.74±58.16*351.12±61.92 CDT（mg/L）17.21±5.87 44.46±9.08△△28.69±7.83**35.17±7.86*26.60±8.94**30.32±9.02**30.11±6.08**GGT（U/L）40.72±7.97 81.84±7.51△△47.21±5.65**48.41±9.58**46.72±5.14**48.73±6.56**53.51±9.16**

2.2 對大鼠肝組織生化指標的影響：由表3、表4可見，模型組大鼠肝組織中TG、T-CHO、MDA含量明顯高于空白組（P＜0.01），SOD、GSH含量明顯低于空白組（P＜0.01）；各給藥組大鼠肝組織TG、T-CHO、MDA含量明顯低于模型組（P＜0.01或P＜0.05），GSH含量明顯高于模型組（P＜0.01或P＜0.05），除了小劑量組，各給藥組的SOD含量也明顯高于模型組（P＜0.01）。

2.3 對肝病理組織的影響：HE染色鏡下空白組：肝組織結(jié)構(gòu)正常，無炎癥和脂滴；模型組：大部分動物可見肝細胞有散在脂滴并伴隨局灶性炎細胞浸潤；給藥組：普遍可見肝細胞有極少量脂肪變性。

表3 大鼠肝組織中TG、T-CHO含量（±s，mmol/gprot）

表3 大鼠肝組織中TG、T-CHO含量（±s，mmol/gprot）

注：與空白組比較，△△P＜0.01；與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01。

組別空白組模型組硫普羅寧腸溶片復方甘草酸苷片護肝片大劑量護肝片中劑量護肝片小劑量劑量（g/k g）--0.0 5 0.0 6 0.8 0 0.4 0 0.2 0只數(shù)1 2 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 T G 1.0 0±0.1 6 1.3 0±0.1 9△△1.0 6±0.1 2**1.0 8±0.1 2**1.0 5±0.1 4**1.0 7±0.1 1**1.1 2±0.1 3*T-C H O 1.5 8±0.1 7 2.6 6±0.2 0△△1.6 5±0.2 1**1.6 9±0.1 9**1.6 2±0.2 0**1.6 5±0.2 8**2.0 9±0.3 3**

表4 對大鼠肝組織SOD、GSH、MDA的影響（±s）

表4 對大鼠肝組織SOD、GSH、MDA的影響（±s）

注：與空白組比較，△△P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別空白組模型組硫普羅寧腸溶片復方甘草酸苷片護肝片大劑量護肝片中劑量護肝片小劑量劑量（g/k g）- -0.0 5 0.0 6 0.8 0 0.4 0 0.2 0動物數(shù)（只）1 2 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 S O D（U/m g p r o t）1 1 8.2 8±1 1.8 9 9 6.5 2± 7.2 4△△1 0 9.0 7±1 1.0 6**1 0 7.4 2±7.1 5**1 1 0.2 6±1 0.6 8**1 0 8.5 0±1 0.9 9**1 0 3.6 0±1 5.0 5 G S H（m g/g p r o t）5.8 5±0.6 4 4.0 2±0.6 7△△5.0 5±0.3 8**4.9 7±0.7 1**5.4 5±0.4 1**5.0 7±0.7 5**4.8 8±0.7 9*M D A（n m o l/g p r o t）2.3 5±0.3 6 3.7 3±0.6 5△△2.5 4±0.4 0**2.5 7±0.6 7**2.5 5±0.3 9**2.5 6±0.3 9**3.0 1±0.3 6**

3 討論

人體攝入酒精后主要在肝臟代謝，長期大量飲酒會引起酒精性肝損傷，其損傷機制與乙醇及其代謝產(chǎn)物對肝細胞的氧化損傷或降低機體抗氧化水平有關(guān)[6-7]。本研究結(jié)果說明，護肝片能夠有效地對抗慢性酒精性肝損傷模型大鼠的肝損傷程度，其作用機理可能通過增強模型大鼠肝組織中SOD、GSH活性，抑制MDA的產(chǎn)生，從而保護細胞器和酶的結(jié)構(gòu)功能，減少活性氧自由基的數(shù)量，提高肝細胞抗氧化能力，保護肝細胞正常的通透性，保護肝細胞的結(jié)構(gòu)和功能，進而發(fā)揮保護肝臟的作用。另外，護肝片可明顯降低CDT的含量，也為本品對抗肝組織損傷的機理之一。