張碧玲

（陜西省涇陽(yáng)縣農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)監(jiān)測(cè)站，陜西 涇陽(yáng) 713700）

1 試劑配制

緩沖溶液：燒杯中依次加入試劑、蒸餾水（500毫升），之后將燒杯置于室溫保存；底物：向標(biāo)有“底物”的試劑瓶中加3.1毫升蒸餾水溶解，混勻備用，為避免試劑瓶溫度過(guò)低，應(yīng)降低放入0～5℃的冰箱冷藏；酶試劑：處于溶液狀態(tài)的酶試劑應(yīng)用時(shí)，應(yīng)堅(jiān)持在常溫狀態(tài)應(yīng)用，避免溫度過(guò)低。向標(biāo)有“酶試劑”的試劑瓶中加入3.1毫升的緩沖溶液，混勻備用，需放入冰箱冷藏（0～5℃）切勿冷凍結(jié)冰；顯色劑：顯色劑已配制成溶液，從冰箱取出恢復(fù)到常溫后直接使用。需放入冰箱冷藏（0～5℃）切勿冷凍結(jié)冰。

需要注意的是，配制緩沖溶液時(shí)，邊倒水邊攪拌，防止試劑結(jié)塊，不停攪拌，直到試劑全部溶解。加熱會(huì)使溶解加快，但會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。沒(méi)有蒸餾水的，可用純凈水代替，礦泉水、自來(lái)水等不能代替，配制酶試劑時(shí)，輕搖使之溶解，不能劇烈震搖。

2 樣品制備

稱取2克果蔬樣品放入三角瓶中，用移液槍加入10毫升緩沖溶液后，放入振蕩器中震蕩2分鐘，其中，所選果蔬樣品的葉菜應(yīng)順著葉緣剪成寬度為1厘米的菜樣，塊根采取1厘米左右的表皮樣品。沒(méi)有振蕩器的，可用手順著一個(gè)方向輕輕搖動(dòng)，力度不要太大，心里默數(shù)120下即可。

3 樣品測(cè)定

首先，對(duì)照測(cè)試。取酶100微升，緩沖液2.5毫升，加入比色皿中，再加顯色劑100微升，放置10分鐘，加底物100微升，搖勻后立即放入儀器的比色池中，按對(duì)照鍵進(jìn)行對(duì)照檢測(cè)，對(duì)照后△A在3分鐘的吸光值在0.3～0.8之間就可選用。然后，樣品測(cè)試：取得測(cè)液2.5毫升，取酶100微升，加入比色皿中，再加顯色劑100微升，靜置10分鐘，加底物100微升，搖勻立即放入儀器的比色池中，按樣品鍵進(jìn)行檢測(cè)，反應(yīng)180秒，出結(jié)果。最后，結(jié)果判定。抑制率，陰性，為合格樣品；40%＜抑制率＜50%，為可疑樣品；抑制率≥50%，陽(yáng)性，為不合格樣品。

抑制率(%)=[（△A-△At）/△A]×100%；△A—對(duì)照3分鐘的吸光值，△At—樣品3分鐘的吸光值。注意事項(xiàng)：緩沖液和樣品的比例是1∶5，即稱取1克樣品，就加5毫升緩沖液，取稱2克樣品，就加入10毫升緩沖液，必須是同比例的；樣品測(cè)定跟對(duì)照測(cè)定是同一過(guò)程，即做對(duì)照靜置多長(zhǎng)時(shí)間，做樣品同樣也靜置多長(zhǎng)時(shí)間；當(dāng)溫度較高時(shí)，酶反應(yīng)速度變快，加入酶液和顯色劑后靜置的時(shí)間可以相對(duì)短點(diǎn)，具體時(shí)間應(yīng)以膽堿酯酶空白對(duì)照測(cè)試3分鐘的吸光值變化而定。

當(dāng)溫度高時(shí)，酶反應(yīng)速度快，可將儀器的反應(yīng)時(shí)間調(diào)至1分鐘，做空白對(duì)照時(shí)，測(cè)試1分鐘的吸光度△A在0.15～0.3之間即可往下操作；待測(cè)樣品加入底物后，應(yīng)快速搖勻放入儀器的比色池中，否則會(huì)影響數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性；平時(shí)應(yīng)該保持比色皿的清潔，使比色皿有好的透光度，做檢測(cè)時(shí)，用手拿比色皿的磨沙面，比色皿長(zhǎng)期使用透光面就不太清潔，可用乙醇清洗，確保比色皿透光面透亮；微量移液槍專用，最好貼上標(biāo)簽，使用時(shí)應(yīng)先潤(rùn)洗，用完后應(yīng)調(diào)到最大量程量放置，吸取試劑時(shí)堅(jiān)持只吸出，不能放回的原則，防止試劑污染；切記做檢測(cè)時(shí)必須是同批試劑，即生產(chǎn)日期相同、配制時(shí)間相同，任何試劑使用時(shí)，用一瓶打開一瓶，用完后才能使用新的，防止變質(zhì)。

4 數(shù)據(jù)分析